本文關鍵詞：諾龍化學發(fā)光免疫分析方法的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本論文建立了諾龍化學發(fā)光免疫分析方法,并能同時檢測群勃龍、丙酸諾龍、雄諾龍、美雄諾龍其他四種蛋白同化激素。 在諾龍多克隆抗體制備基礎上,對化學發(fā)光免疫分析中的主要參數(shù)進行了優(yōu)化,即抗體包被量、酶標抗原的濃度、樣品稀釋液以及發(fā)光底物的種類及濃度。建立了諾龍化學發(fā)光酶聯(lián)免疫分析方法,并對方法的性能指標進行了系統(tǒng)評價。該方法能同時檢測諾龍、群勃龍、丙酸諾龍、雄諾龍、美雄諾龍五種蛋白同化激素,且具有很高的靈敏度,其中諾龍IC50=0.050μg/L, IC15=0.00378μg/L、群勃龍IC50=0.094μg/L, IC15=0.00330μg/L、丙酸諾龍IC50=0.66μg/L,IC15=0.259μg/L、雄諾龍IC50=1.40μg/L, IC15=0.0398μg/L、美雄諾龍IC50=2.40μg/L, IC15=0.078μg/L,與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附分析方法相比,靈敏度提高了5-8倍,該檢測方法的變異系數(shù)在20%以下。 選取了豬肉、雞肉和牛肉作為檢測樣品,通過甲醇提取,磷酸鹽緩沖液稀釋,即可消除樣品的基質(zhì)影響。實際樣品中諾龍的平均回收率為83.2%-94.2%,表明方法的準確性。同時與傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫吸附測定方法的檢測結果比較,相關系數(shù)R2=0.9988；進一步利用高效液相色譜法對建立的諾龍化學發(fā)光酶免疫分析方法的準確性進行了驗證,兩種方法檢測結果的線性相關系數(shù)R2值0.9816,研究結果說明所建立的諾龍化學發(fā)光酶免疫分析方法的準確性,能用于動物源性食品中諾龍類物質(zhì)的快速檢測。
【關鍵詞】：諾龍 蛋白同化激素 化學發(fā)光 酶聯(lián)免疫分析
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R155.5
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 1 前言8-22
• 1.1 研究背景8-12
• 1.1.1 獸藥殘留的概況10-11
• 1.1.2 獸藥殘留的危害11-12
• 1.2 蛋白同化激素概述12-17
• 1.2.1 蛋白同化激素簡介12-13
• 1.2.2 蛋白同化激素對人的影響13-14
• 1.2.3 蛋白同化激素的限量14
• 1.2.4 蛋白同化激素檢測方法研究進展14-17
• 1.3 化學發(fā)光免疫分析方法簡介17-20
• 1.3.1 化學發(fā)光法的基本原理17
• 1.3.2 常用的化學發(fā)光劑17-18
• 1.3.3 化學發(fā)光免疫分析方法的類型18-20
• 1.3.4 化學發(fā)光免疫分析方法的發(fā)展進程20
• 1.4 論文研究目的和意義20
• 1.5 論文研究內(nèi)容20-22
• 2 材料與方法22-34
• 2.1 實驗材料22-25
• 2.1.1 主要藥品22-23
• 2.1.2 主要儀器設備23-24
• 2.1.3 常用溶液的配制24-25
• 2.1.4 實驗樣品25
• 2.2 實驗方法25-34
• 2.2.1 諾龍抗體純化和酶標半抗原的制備25-27
• 2.2.2 建立直接競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫法(dc-CLEIA)的方法27-29
• 2.2.3 dc-CLEIA檢測方法的特異性29-30
• 2.2.4 樣品基質(zhì)影響消除30
• 2.2.5 dc-CLEIA各項性能指標的評價30-31
• 2.2.6 諾龍dc-CLEIA和直接競爭ELISA的性能比較31-34
• 3 結果與討論34-56
• 3.1 諾龍抗體純化和酶標抗原的制備34-35
• 3.1.1 諾龍抗體純化34
• 3.1.2 諾龍半抗原的合成及表征34-35
• 3.1.3 諾龍酶標抗原制備35
• 3.2 諾龍直接競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫法的建立35-41
• 3.2.1 化學發(fā)光底物和儲存條件的選擇35-36
• 3.2.2 dc-CLEIA試劑工作濃度的確定36-38
• 3.3.3 反應體系各影響因素的優(yōu)化38-41
• 3.3 dc-CLEIA檢測方法的特異性41-43
• 3.4 樣品的基質(zhì)影響及消除43-47
• 3.5 直接競爭化學發(fā)光酶聯(lián)免疫法的方法學評價47-50
• 3.5.1 方法的檢出限和靈敏度47
• 3.5.2 方法的精密度47-49
• 3.5.3 方法的準確度49-50
• 3.6 抗體和酶標抗原的穩(wěn)定性結果50-51
• 3.6.1 抗體穩(wěn)定性50
• 3.6.2 酶標抗原穩(wěn)定性50-51
• 3.7 諾龍dc-CLEIA和直接競爭ELISA的性能比較51-54
• 3.7.1 直接競爭ELISA標準曲線51-52
• 3.7.2 諾龍dc-CLEIA與直接競爭ELISA的一致性52-54
• 3.8 諾龍dc-CLEIA的HPLC方法驗證54-56
• 3.8.1 諾龍HPLC檢測方法54
• 3.8.2 dc-CLEIA和HPLC兩種方法檢測結果的相關性分析54-56
• 4 結論56-57
• 5 展望57-58
• 6 參考文獻58-64
• 7 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況64-65
• 8 致謝65

【參考文獻】

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本文編號：284927