發(fā)布時(shí)間：2017-04-01 15:08

  本文關(guān)鍵詞：多種谷物豆組合膳食纖維的特性及其對(duì)細(xì)胞糖代謝的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：(1)分別提取多種谷物豆組合(簡(jiǎn)稱谷豆組合)與全小麥(簡(jiǎn)稱小麥)中的膳食纖維和類黃酮,掌握其含量、理化和體外抗氧化特性的差異；(2)熟悉谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞模型和酶-抑制劑模型上α-葡萄糖苷酶活性、對(duì)腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)起關(guān)鍵作用的Na+-K+-ATP酶活性、對(duì)腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)、葡萄糖生成中α-葡萄糖苷酶S-I以及腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)載體SGLT1、GLUT2的基因和蛋白的調(diào)控水平的影響；(3)了解谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮對(duì)胰島素誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型的影響,來(lái)源不同的膳食纖維、類黃酮對(duì)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的改善作用及差異,對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型肝糖原合成、己糖激酶(HK)活力、丙酮酸激酶(PK)活力的改善作用,以及對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖代謝過(guò)程中AMPKα、AKT蛋白磷酸化水平、IRS-1蛋白表達(dá)的調(diào)控作用。方法：(1)用酶-化學(xué)法提取谷豆組合與小麥中膳食纖維,按國(guó)標(biāo)法測(cè)定其含量,用浸提回流法提取谷豆組合與小麥中類黃酮,用可見(jiàn)光分光光度法,以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品為對(duì)照,測(cè)定其含量；按國(guó)標(biāo)法測(cè)定谷豆組合與小麥中膳食纖維膨脹率、持水力、葡萄糖透析延遲指數(shù),并通過(guò)DPPH自由基清除率和總抗氧化能力(T-AOC)法測(cè)定其體外抗氧化能力；(2)用葡萄糖測(cè)定試劑盒測(cè)定并計(jì)算各組對(duì)Caco-2細(xì)胞模型和酶。抑制劑模型上α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用,同時(shí)用ELISA法測(cè)得其對(duì)Na+-K+-ATP酶活性的影響,用葡萄糖測(cè)定試劑盒測(cè)定并計(jì)算其對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制作用,最后運(yùn)用Real-time PCR法測(cè)定S-I、GLT1、GLUT2mRNA的表達(dá),運(yùn)用Western blotting法測(cè)定S-I、SGLT1、GLUT2蛋白水平的表達(dá)對(duì)其機(jī)制進(jìn)行探討；(3)用胰島素誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞建立胰島素抵抗模型,通過(guò)葡萄糖消耗量的測(cè)定,確定建立體外胰島素抵抗模型的最佳時(shí)間和最佳濃度及其穩(wěn)定性的檢測(cè)；(4)用葡萄糖測(cè)定試劑盒測(cè)得并計(jì)算各組在胰島素抵抗HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗的含量.以及用MTT法測(cè)干預(yù)物對(duì)IR-HepG2細(xì)胞活性的影響,用總蛋白定量試劑盒、肝糖元、丙酮酸激酶(PK)、己糖激酶(HK)分別測(cè)定干預(yù)物對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞肝糖元合成、PK活力、HK活力的影響,最后運(yùn)用Western blotting法測(cè)定對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖代謝過(guò)程中AMPKα、AKT蛋白磷酸化水平以及IRS-1蛋白水平的影響其機(jī)制進(jìn)行探討。結(jié)果：(1)谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮的理化和抗氧化特性檢測(cè)結(jié)果表明,谷豆組合的膨脹力、持水力,葡萄糖透析延遲能力,體外抗氧化能力均優(yōu)于小麥；(2)谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮對(duì)α-葡萄糖苷酶抑制作用在60 min達(dá)到最大抑制作用,且濃度均為100μg/mL時(shí),在Caco-2細(xì)胞模型上,抑制率從大到小為谷豆組合膳食纖維、小麥膳食纖維、谷豆組合類黃酮、小麥類黃酮；在酶-抑制劑模型上,抑制率從大到小為谷豆組合膳食纖維、小麥膳食纖維、谷豆組合類黃酮、小麥類黃酮；四種干預(yù)物均不影響Na+-K+-ATP酶活性；在30、60、90、120 min四個(gè)時(shí)間點(diǎn),對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制最佳濃度為100 μg/mL,谷豆組合膳食纖維的抑制作用優(yōu)于其它三組；谷豆組合膳食纖維、小麥膳食纖維、谷豆組合類黃酮、小麥類黃酮均有抑制S-I、SGLT1、GLUT2mRNA水平和蛋白表達(dá)水平的作用,且谷豆組合作用優(yōu)于小麥。(3)在胰島素濃度為10-8mol/L,作用時(shí)間為36 h,饑餓12h為誘導(dǎo)胰島素抵抗模型建立的最佳條件,并且在48 h內(nèi)穩(wěn)定；與模型組比,濃度為100 μg/mL時(shí),谷豆組合與小麥中膳食纖維可以明顯增加葡萄糖的消耗量,在濃度為100 μg/mL時(shí)進(jìn)行組間比較,提高IR-HepG2細(xì)胞肝糖元含量、HK、PK活力的能力從大到小為谷豆組合膳食纖維、小麥膳食纖維、谷豆組合類黃酮、小麥類黃酮；谷豆組合膳食纖維,可以明顯提高AMPKa蛋白磷酸化水平和IRS-1蛋白水平,而對(duì)AKT蛋白磷酸化水平未見(jiàn)明顯影響,且谷豆組合作用優(yōu)于小麥。結(jié)論：(1)谷豆組合與小麥均富含膳食纖維,谷豆組合類黃酮的含量明顯高于小麥,且其膨脹力、持水力,葡萄糖透析延遲能力,體外抗氧化能力均優(yōu)于小麥；(2)谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮均能抑制葡萄糖的生成、延緩葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn),但是谷豆組合膳食纖維比小麥膳食纖維、谷豆組合類黃酮和小麥類黃酮的抑制作用更加顯著,可能通過(guò)抑制S-I、SGLT1、GLUT2基因、蛋白表達(dá)水平,控制葡萄糖自由進(jìn)出細(xì)胞,有效降低葡萄糖進(jìn)入血液；(3)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型建立的最佳條件是胰島素濃度為10-8mol/L,作用時(shí)間為36 h,饑餓12 h,并且在48 h內(nèi)穩(wěn)定；(4)谷豆組合與小麥中膳食纖維和類黃酮均能改善胰島素抵抗,但是谷豆組合膳食纖維作用優(yōu)于谷豆組合類黃酮和小麥中膳食纖維和類黃酮,可能通過(guò)調(diào)節(jié)AMPKa蛋白磷酸化水平和IRS-1蛋白水平,改善胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下的葡萄糖攝取。
【關(guān)鍵詞】：膳食纖維 類黃酮 Caco-2細(xì)胞 HepG2細(xì)胞 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R151
【目錄】：

• 摘要2-5
• Abstract5-11
• 主要縮略詞表11-12
• 第一章 緒論12-19
• 1 糖尿病及其防治12-14
• 2 谷物及豆類防治糖尿病的生物活性物質(zhì)14-15
• 3 糖代謝關(guān)鍵酶和通路在防治糖尿病中的作用機(jī)制15-17
• 4 本文研究?jī)?nèi)容與意義17-19
• 第二章 多種谷物豆組合植物活性成分的提取及其理化和抗氧化特性的檢測(cè)分析19-37
• 第一節(jié) 多種谷物豆組合與全小麥中膳食纖維的提取、測(cè)定與分析19-24
• 1 實(shí)驗(yàn)材料19-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22
• 4 討論22-24
• 第二節(jié) 多種谷物豆組合與全小麥中類黃酮的提取、測(cè)定與分析24-28
• 1 實(shí)驗(yàn)材料24
• 2 實(shí)驗(yàn)方法24-26
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-27
• 4 討論27-28
• 第三節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮理化特性的檢測(cè)分析28-33
• 1 實(shí)驗(yàn)材料28
• 2 實(shí)驗(yàn)方法28-30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-31
• 4 討論31-33
• 第四節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮抗氧化能力的檢測(cè)分析33-36
• 1 實(shí)驗(yàn)材料33
• 2 實(shí)驗(yàn)方法33-34
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果34-35
• 4 討論35-36
• 本章小結(jié)36-37
• 第三章 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞葡萄糖吸收作用的影響37-84
• 第一節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)α-葡萄糖苷酶活性的影響37-54
• 1 實(shí)驗(yàn)材料37-39
• 2 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-52
• 4 討論52-54
• 第二節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞Na~+-K~+-ATP酶活性的影響54-58
• 1 實(shí)驗(yàn)材料54-55
• 2 實(shí)驗(yàn)方法55-56
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果56-57
• 4 討論57-58
• 第三節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的影響58-69
• 1 實(shí)驗(yàn)材料58-59
• 2 實(shí)驗(yàn)方法59-62
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果62-68
• 4 討論68-69
• 第四節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)Caco-2細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制的探討69-83
• 1 實(shí)驗(yàn)材料69-70
• 2 實(shí)驗(yàn)方法70-74
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果74-80
• 4 討論80-83
• 本章小結(jié)83-84
• 第四章 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮改善胰島素抵抗HepG2細(xì)胞及其機(jī)制的探討84-111
• 第一節(jié) 胰島素抵抗HepG2細(xì)胞模型的建立及穩(wěn)定性的檢驗(yàn)84-91
• 1 實(shí)驗(yàn)材料84-85
• 2 實(shí)驗(yàn)方法85-88
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果88-89
• 4 討論89-91
• 第二節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖代謝的影響91-103
• 1 實(shí)驗(yàn)材料91-92
• 2 實(shí)驗(yàn)方法92-96
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果96-101
• 4 討論101-103
• 第三節(jié) 多種谷物豆組合中膳食纖維和類黃酮對(duì)胰島素抵抗HepG2細(xì)胞糖代謝影響的分子機(jī)制探討103-110
• 1 實(shí)驗(yàn)材料103-104
• 2 實(shí)驗(yàn)方法104-105
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果105-108
• 4 討論108-110
• 本章小結(jié)110-111
• 結(jié)論、創(chuàng)新與展望111-113
• 1 結(jié)論111
• 2 創(chuàng)新點(diǎn)111
• 3 展望111-113
• 參考文獻(xiàn)113-119
• 致謝119-120
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文120-121

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李寶樹(shù);不可小瞧的膳食纖維[J];吉林蔬菜;2000年03期

2 管春梅,張e，

本文編號(hào)：280823