發(fā)布時間：2017-03-31 00:24

  本文關鍵詞：丙烯酰胺及其代謝產物對小鼠所致氧化損傷和潛在致癌性的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙烯酰胺（Acrylamide，AA）作為一種潛在的致癌物質，廣泛存在于各個行業(yè)甚至是食品中，威脅著人類的健康。目前，AA的致毒、致癌機制尚不明確，但可能與其體內環(huán)氧化代謝產物—環(huán)氧丙酰胺（Glycidamide，， GA）具有十分明顯的關系，甚至GA可能是AA對實驗動物致毒、致癌的直接作用物。GA比AA具有更強的攻擊DNA分子的能力，這與其強氧化性密不可分。但GA對機體的氧化損傷作用效果和作用機制尚不明確，這阻礙了AA毒性機制的深入探討，也為AA體內防護的建立帶來了困難。本論文旨在研究AA和GA對機體的氧化損傷作用，并對其可能性的致癌機制進行初步探索。 首先，考察AA和GA對小鼠機體和其組織的氧化損傷作用。70只Balb/c雄性小鼠，分別以0mg/kg b.w./day，25mg/kg b.w./day，50mg/kg b.w./day，75mg/kgb.w./day的AA和GA灌胃染毒30天，考察AA和GA對小鼠機體的氧化損傷，以及氧化應激所致炎癥損傷的影響�？疾靹游镄袨榛顒�，動物體重，血清中活性氧，DNA損傷指標和炎癥細胞因子（IL-1，IL-6，IL-10，TNF-α，NF-κB）的水平；考察肝、腎、腦、肺中氧化損傷生化指標（SOD，GSH-Px，GST，MDA，MPO）、病理損傷以及肝、腎功能損傷。結果表明，AA和GA對小鼠有明顯的氧化損傷作用，能明顯升高血清中的活性氧ROS和DNA氧化損傷指標8-OHdG的水平，上調血清中促炎因子IL-1，IL-6，TNF-α，NF-κB和下調抗炎因子IL-10的含量；明顯降低肝、腎、腦、肺中抗氧化物酶SOD，GSH-Px，GST的活力，增加MDA的水平和MPO的活力，提高血清中AST、ALT、BUN、Cr、LDH的含量，造成肝、腎功能受損；肝臟切片結果顯示，AA和GA造成肝小葉炎細胞浸潤，肝臟受氧化損傷作用最明顯，為AA和GA氧化損傷作用的主要靶器官；GA在對抗氧化物酶的抑制上作用上明顯大于AA，比AA具有更大的氧化損傷作用。 其次，考察了AA和GA對肝臟中氧化損傷及致癌相關基因的調控和典型蛋白表達的影響。實驗選取小鼠受氧化損傷最明顯的肝組織作為靶器官，重點研究了AA和GA對肝中基因的調控和典型蛋白表達的影響。100只Balb/c雄性小鼠分別以0mg/kg b.w./day，25mg/kg b.w./day，50mg/kg b.w./day，75mg/kg b.w./day的AA和GA灌胃染毒30天，取肝組織進行Affymetrix表達譜芯片檢測，差異基因分析注釋考察AA和GA對基因調控的影響；并利用Western bolt生物學手段考察了差異基因典型蛋白：Bcl2、Rad51、P21、和Egfr的表達的變化。結果顯示：AA和GA（50mg/kg b.w./day）能明顯上調氧化應激相關，腫瘤癌癥相關和炎癥相關基因，明顯下調抗細胞凋亡類，抑癌相關類，脂肪酸合成類基因的表達；同時AA和GA（50~75mg/kg b.w./day）能明顯下調肝中抑癌基因Bcl2的表達，上調癌癥正相關基因Rad51，Egfr蛋白的表達，證明AA和GA對小鼠肝都具有較強的氧化損傷能力和潛在的致癌性。且AA（50~75mg/kg b.w./day）明顯下調抑癌基因P21的表達，但GA對P21蛋白的表達無明顯影響。 綜上所述，AA和GA對小鼠具有明顯的氧化損傷作用，以肝臟受損最明顯，為氧化應激損傷的靶器官。AA和GA對小鼠肝還具有潛在的致癌性，這與GA的強氧化性對DNA的攻擊能力和對DNA修復相關基因的調控作用有緊密聯系。AA對小鼠的氧化損傷和致癌性與GA的生成過程和GA自身的強氧化性密切相關，因此AA體內毒性防護的建立應以抑制AA向GA的轉換過程為突破點。
【關鍵詞】：丙烯酰胺（AA） 環(huán)氧丙酰胺（GA） 氧化損傷 炎癥損傷 致癌性 基因表達 蛋白免疫印記
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 英文縮略詞表12-14
• 第1章 緒論14-26
• 1.1 食品中 AA 的發(fā)現14-17
• 1.1.1 食品中 AA 的含量和現狀14-16
• 1.1.2 AA 在熱加工食品中的形成機理16
• 1.1.3 膳食 AA 的經口暴露劑量16-17
• 1.2 膳食中 AA 毒性的研究進展17-23
• 1.2.1 AA 的代謝與吸收17-20
• 1.2.2 AA 的一般毒性20
• 1.2.3 AA 的神經毒性20-21
• 1.2.4 AA 的生殖毒性21-22
• 1.2.5 AA 的致癌性22
• 1.2.6 AA 可能的致毒機制22-23
• 1.3 選題依據和研究內容23-26
• 1.3.1 選題依據23
• 1.3.2 研究內容23-25
• 1.3.3 技術路線25-26
• 第2章 AA 和 GA 對小鼠氧化應激的影響26-38
• 2.1 實驗材料與設備26-27
• 2.1.1 實驗材料26
• 2.1.2 實驗儀器設備26-27
• 2.2 實驗方法27-29
• 2.2.1 溶液的配置27
• 2.2.2 動物的分組27-28
• 2.2.3 小鼠處理及血清的制備28
• 2.2.4 血清中炎癥因子和氧化損傷指標測定方法28
• 2.2.5 數據分析28-29
• 2.3 結果與討論29-37
• 2.3.1 AA 和 GA 對小鼠一般狀態(tài)的影響29-31
• 2.3.2 AA 和 GA 對小鼠血清活性氧簇的影響31-32
• 2.3.3 AA 和 GA 對小鼠血清氧化應激指標的影響32-33
• 2.3.4 AA 和 GA 對小鼠血清炎癥因子影響33-37
• 2.4 本章小結37-38
• 第3章 AA 和 GA 對小鼠組織的氧化損傷研究38-67
• 3.1 實驗材料與設備38-39
• 3.1.1 實驗材料38
• 3.1.2 實驗儀器設備38-39
• 3.2 實驗方法39-50
• 3.2.1 實驗溶液的配置39
• 3.2.2 動物的分組39
• 3.2.3 小鼠血清的制備39-40
• 3.2.4 小鼠組織勻漿的制備40
• 3.2.5 小鼠血清中肝、腎功能指標的測定40-43
• 3.2.6 小鼠組織中氧化應激損傷指標的測定43-48
• 3.2.7 組織石蠟包埋和切片48-49
• 3.2.8 石蠟切片的 HE 染色49-50
• 3.2.9 病理切片形態(tài)學分析50
• 3.2.10 數據分析50
• 3.3 結果與討論50-66
• 3.3.1 AA 和 GA 對小鼠肝的氧化應激損傷50-58
• 3.3.2 AA 和 GA 對小鼠腎的氧化應激損傷58-61
• 3.3.3 AA 和 GA 對腦的氧化應激損傷61-63
• 3.3.4 AA 和 GA 對肺的氧化應激損傷63-66
• 3.4 本章小結66-67
• 第4章 AA 和 GA 對小鼠肝臟基因的調控和蛋白表達的影響67-91
• 4.1 實驗材料67-68
• 4.2 實驗儀器68
• 4.3 實驗方法68-77
• 4.3.1 溶液的配置68-70
• 4.3.2 動物的分組和飼養(yǎng)70
• 4.3.3 總 RNA 的提取和純化70-71
• 4.3.4 Affymetrix 表達譜芯片的檢測71
• 4.3.5 組織蛋白樣本的提取71-72
• 4.3.6 組織樣本蛋白的測定及上樣蛋白的準備72
• 4.3.7 SDS-PAGE 蛋白質電泳72-74
• 4.3.8 轉膜74-75
• 4.3.9 抗體的封閉和雜交75-76
• 4.3.10 化學發(fā)光及顯影、定影76
• 4.3.11 掃描和分析76-77
• 4.4 結果與討論77-90
• 4.4.1 RNA 的提取純化結果77
• 4.4.2 AA 和 GA 對肝臟基因的影響77-83
• 4.4.3 AA 和 GA 共同調控氧化損傷、癌癥和免疫損傷相關基因83-86
• 4.4.4 AA 和 GA 對 Bcl2，Rad51， P21 和 Egfr 蛋白表達的影響86-90
• 4.5 本章小結90-91
• 第5章 結論及展望91-93
• 5.1 結論91-92
• 5.2 本文創(chuàng)新點92
• 5.3 展望92-93
• 參考文獻93-104
• 導師簡介104-108
• 作者簡介108-110
• 攻讀學位期間發(fā)表學術論文110-111
• 致謝111

【參考文獻】

中國期刊全文數據庫 前10條

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本文編號：278476