【摘要】：目的探究鎘(二氯化鎘,Cd Cl2)能否誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞自噬與凋亡以及細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)1/2和AKT蛋白在自噬中的作用。方法將綠色熒光蛋白(GFP)-微管相關(guān)蛋白Ⅰ輕鏈3B(LC3B)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞24 h后,以Cd Cl22,4,8和10μmol·L~(-1)誘導(dǎo)細(xì)胞12 h,熒光顯微鏡觀察自噬情況;以Cd Cl22,4,8和10μmol·L~(-1)誘導(dǎo)未轉(zhuǎn)染GFP-LC3B重組質(zhì)粒的HEK293細(xì)胞12 h,透射電子顯微鏡下觀察自噬泡;Western蛋白印跡檢測LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表達(dá)變化,以及ERK1/2和AKT蛋白的磷酸化表達(dá);流式細(xì)胞儀檢測Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))對HEK293細(xì)胞凋亡的影響。用3-MA(自噬抑制劑)預(yù)處理Cd Cl210μmol·L~(-1)誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞12 h,Western蛋白印跡檢測細(xì)胞內(nèi)激活型胱天蛋白酶3的表達(dá)。結(jié)果 Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞12 h,熒光顯微鏡下轉(zhuǎn)染細(xì)胞出現(xiàn)綠色熒光點狀聚集,電鏡下觀察到自噬泡,Western蛋白印跡檢測到LC3B-Ⅱ/Ⅰ表達(dá)量增加(P0.05,P0.01),ERK1/2和AKT蛋白磷酸化水平均增加(P0.05,P0.01)。流式細(xì)胞儀檢測出Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞發(fā)生了細(xì)胞凋亡;加入3-MA20μmol·L~(-1)+Cd Cl210μmol·L~(-1)后,細(xì)胞自噬被抑制,激活型胱天蛋白酶3表達(dá)增加(P0.01)。結(jié)論低濃度Cd Cl2(≤10μmol·L~(-1))能引起細(xì)胞自噬,可能通過ERK1/2和AKT蛋白介導(dǎo)細(xì)胞自噬;自噬與凋亡相伴發(fā)生,自噬可能抑制凋亡。
[Abstract]:Objective to investigate whether cadmium chloride (CD Cl2) can induce autophagy and apoptosis of HEK293 cells and the role of extracellular regulated protein kinase (ERK) 1 / 2) and AKT protein in autophagy. Methods the recombinant plasmid of green fluorescent protein (GFP) microtubule-associated protein 鈪，

本文編號：2213744