【摘要】：本研究從上海市各農(nóng)貿(mào)市場及超市采集各類食品樣品,按GB4789.10-2010進(jìn)行金黃色葡萄球菌的分離及鑒定工作,并用PCR方法進(jìn)一步鑒定,以減少假陽性,最終獲得金黃色葡萄球菌食品分離株;同時提取金黃色葡萄球菌食品分離株的DNA,PCR檢測其腸毒素基因的多樣性,統(tǒng)計分析各種腸毒素基因的分布情況;最后對金黃色葡萄球菌食品分離株進(jìn)行多位點(diǎn)序列分型(MLST)研究。 首先采集食品樣品(生牛奶,生鮮肉,水產(chǎn)品、速凍食品、果蔬、豆制品)505份,按國標(biāo)方法進(jìn)行金黃色葡萄球菌的分離和鑒定,共檢出被金黃色葡萄球菌污染的食品樣品117份,分離金黃色葡萄球菌183株,總檢出率為23.2%。在不同種類食品樣品中,金黃色葡萄球菌的檢出率存在明顯差異,其中生鮮肉樣品檢出率最高,為32.9%;其次為生牛乳和速凍食品,檢出率分別為26.3%和26.7%;其它食品中金黃色葡萄球菌的檢出率相對較低。該實(shí)驗結(jié)果基本上反映了上海市各類食品中金黃色葡萄球菌的污染狀況,為監(jiān)控金黃色葡萄球菌引起的食物中毒及追溯污染源提供了參考依據(jù)。 其次,鑒于金黃色葡菌球菌腸毒素是金黃色葡萄球菌引起食物中毒的主要原因,本實(shí)驗應(yīng)用PCR技術(shù)檢測金黃色葡萄球菌食品分離株腸毒素基因的分布特征。在183株金黃色葡萄球菌食品分離株中,有161株攜帶腸毒素基因,攜帶率為88.0%;22株金黃色葡萄球菌不攜帶所檢測的18種腸毒素基因,占12.0%;攜帶率最高的腸毒素基因是seb和sem,均為48.1%;攜帶率最低的腸毒素基因為see,未檢出;5種傳統(tǒng)腸毒素基因的攜帶率(67.8%)低于新型腸毒素基因的攜帶率(84.7%);含有egc毒力基因簇(同時攜帶腸毒素基因seg、sei、sem、sen、seo或seg、sei、sem、sen、seu)的分離株有28株,占15.3%;同時攜帶2種及以上腸毒素基因的分離株有141株,占所有菌株的77.0%,占攜帶腸毒素基因菌株的87.0%;攜帶10種以上腸毒素基因的菌株有9株,占全部分離株的4.9%。 最后,為鑒別菌株間的相關(guān)性,進(jìn)一步確定菌株特征,進(jìn)行金黃色葡萄球菌食品分離株的MLST分型研究。研究發(fā)現(xiàn),183株金黃色葡萄球菌食品分離株中,共有22個序列型,其中數(shù)量最多的序列型為ST-188,有101株;其次為ST-2094和ST-7,分別有22株和20株;ST-97、ST-5、ST-1281、ST-398和ST-1等也比較常見;同時發(fā)現(xiàn),不同種類食品中序列型的分布不同,如金黃色葡萄球菌生鮮肉分離株中:最主要的序列型為ST-7,有19株;其次為ST-188,有7株;ST-2094、ST-5等也比較常見;而在金黃色葡萄球菌生牛乳分離株中,最主要的序列型為ST-188,有67株;其次為ST-2094,有15株;ST-97、ST-965、ST-9等也比較常見。金黃色葡萄球菌果蔬及速凍食品分離株中,最多的序列型是ST-188。金黃色葡萄球菌豆制品分離株中,出現(xiàn)的序列型包括ST-15、ST-5、ST-512、ST-188和ST-2094。在金黃色葡萄球菌水產(chǎn)品分離株(共6株)中,序列型分別為ST-2094、ST-6、ST-72、ST-88和ST-50。
[Abstract]:In this study, all kinds of food samples were collected from farmers' markets and supermarkets in Shanghai. Staphylococcus aureus was isolated and identified according to GB4789.10-2010, and further identified by PCR method in order to reduce false positive. Finally, the Staphylococcus aureus food isolate was obtained, and the DNA polymerase chain reaction (DNA-PCR) of the Staphylococcus aureus food isolate was used to detect the diversity of the enterotoxin genes, and the distribution of the enterotoxin genes was analyzed statistically. Finally, (MLST) was used to study the multi-locus sequence typing of Staphylococcus aureus food isolates. First, 505 samples of food (raw milk, fresh meat, aquatic products, frozen food, fruits and vegetables, bean products) were collected. Staphylococcus aureus was isolated and identified according to the national standard method. A total of 117 samples of food contaminated by Staphylococcus aureus were detected. 183 strains of Staphylococcus aureus were isolated and the total detection rate was 23.2%. The detection rate of Staphylococcus aureus was significantly different in different kinds of food samples, among which the detection rate of fresh meat was the highest (32.9). The detection rates of Staphylococcus aureus in other foods were 26.3% and 26.7%, respectively. The results of the experiment basically reflect the contamination of Staphylococcus aureus in various kinds of food in Shanghai and provide a reference basis for monitoring the food poisoning caused by Staphylococcus aureus and tracing the pollution sources of Staphylococcus aureus. Secondly, in view of Staphylococcus aureus enterotoxin is the main cause of food poisoning caused by Staphylococcus aureus, the distribution of enterotoxin gene of Staphylococcus aureus food isolate was detected by PCR technique. Of 183 Staphylococcus aureus food isolates, 161 were enterotoxin genes, with a carrying rate of 88.0 and 22 Staphylococcus aureus strains, which did not carry 18 enterotoxin genes detected. The enterotoxin genes with the highest carrying rate were seb and sem48.1, and the lowest enterotoxin groups were see. the carrying rate of the five traditional enterotoxin genes (67.8%) was lower than that of the new enterotoxin genes (84.7%), and the egc virulence group was the lowest. 28 strains were isolated from the cluster (which also carried the enterotoxin gene segseianseo or segsei semsenseu). There were 141 isolates carrying two or more enterotoxin genes at the same time, accounting for 77.0% of all strains and 87.0% of the strains carrying enterotoxin genes, and 9 strains carrying more than 10 enterotoxin genes, accounting for 4.9% of the total isolates. Finally, MLST typing of Staphylococcus aureus food isolates was carried out in order to identify the correlation between strains and further determine the characteristics of the strains. Among the 183 Staphylococcus aureus food isolates, there were 22 sequence types, of which ST-1888 was the most abundant, followed by ST-2094 and ST-7, with 22 and 20 strains of ST-97T5 ST-1281, ST-398 and ST-1, respectively. The distribution of sequence type in different kinds of food is different, such as Staphylococcus aureus fresh meat isolate: the most important sequence type is ST-7, there are 19 strains, followed by ST-188, there are 7 strains ST-2094 ST-5 and so on, but in Staphylococcus aureus raw milk isolate, The main sequence type was ST-188 (67 strains), followed by ST-2094 (15 strains ST-97 ST-965ST-9). Among the isolates of Staphylococcus aureus fruits, vegetables and frozen foods, ST-188 was the most frequent. The sequence types of Staphylococcus aureus soybean products isolates include ST-15, ST-5, ST-512ST-188 and ST-2094. The sequence of Staphylococcus aureus aquatic product isolates (6 strains) were ST-2094 ST-72N ST-88 and ST-50, respectively.
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R155.5

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