本文選題：六溴環(huán)十二烷 + 多溴聯(lián)苯醚�。� 參考：《東華大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：六溴環(huán)十二烷((Hexabromocyclododecane, HBCD)屬于添加型含溴阻燃劑,已經(jīng)成為環(huán)境介質(zhì)和生物群中無處不在的污染物。HBCD具有持久性和蓄積性等特點(diǎn),它在環(huán)境中能夠與其替代的溴代阻燃物多溴聯(lián)苯醚(PBDEs)形成復(fù)合污染體系,二者一起作用對人類健康造成潛在的危害。處于腦發(fā)育期的兒童是HBCD及HBCD/PBDEs復(fù)合污染物暴露的高風(fēng)險(xiǎn)人群�，F(xiàn)有的研究資料顯示HBCD與PBDEs均能夠?qū)Ξa(chǎn)生內(nèi)分泌干擾作用,如：對甲狀腺激素產(chǎn)生干擾及對甲狀腺激素代謝過程產(chǎn)生潛在的影響。為了研究HBCD及HBCD/PBDES復(fù)合污染物暴露對甲狀腺激素代謝過程的影響,本文根據(jù)腦發(fā)育期兒童為HBCD及其復(fù)合污染暴露的高風(fēng)險(xiǎn)人群的特點(diǎn),實(shí)驗(yàn)選擇新生3天的SD大鼠,依據(jù)真實(shí)環(huán)境暴露水平設(shè)計(jì)HBCD單一暴露劑量(10、50、100、300μg/kg),及HBCD與等濃度商用多溴聯(lián)苯醚DE-71按2：1比例復(fù)配制成的復(fù)合物暴露劑量(10、50、100、300μg/kg)。此外,分別設(shè)置對照組。根據(jù)大鼠腦發(fā)育的特點(diǎn),將暴露時(shí)間分為21天短期暴露,42天中期暴露和90天長期暴露。通過對大鼠甲狀腺激素水平的變化,甲狀腺激素代謝酶(脫碘酶)的活性變化及脫碘酶的基因表達(dá)情況等指標(biāo)的測試,從生化指標(biāo)和基因水平揭示HBCD及HBCD/PBDEs復(fù)合污染物暴露對甲狀腺激素干擾的機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示： 1、利用1251-甲狀腺激素與抗血清放射免疫分析法測定血清中甲狀腺激素相關(guān)指標(biāo)的變化,包括：TT3、TT4、FT3、FT3、TSH等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示： 經(jīng)HBCD短期暴露21d,各暴露劑量組大鼠血清中TT3、TT4、FT3、FT4濃度均顯著升高(P0.05)。經(jīng)HBCD暴露至42d,10μg/kg的染毒組FT3、FT4的濃度顯著升高(P0.05)；而其他染毒組的TT3、TT4、FT3、FT4的濃度與21d暴露比均呈現(xiàn)回落的趨勢,與對照組相比,300μ g/kg的染毒組大鼠血清中TT3顯著下降(P0.05)；染毒組血清中TSH的濃度呈現(xiàn)顯著降低(P0.05)。經(jīng)過HBCD暴露至90d,染毒組大鼠出現(xiàn)了血清中TT3、TT4、FT3、FT4的濃度均上升的趨勢。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露至21天,各劑量組大鼠血清中TT4、FT3、FT4濃度出現(xiàn)升高的趨勢,TT3、TSH濃度下降。其中50ug/kg和300ug/kg劑量組大鼠血清中TT4、FT4濃度顯著性升高(P0.05),100ug/kg劑量組TSH濃度顯著下降(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露至42d和90天,大鼠血清中TT4、TT3、FT4、FT3、TSH濃度均呈現(xiàn)升高的趨勢。 2、利用Chopra氏法測定甲狀腺激素代謝酶(脫碘酶)活性,包括：Ⅰ型脫碘酶(D1)和Ⅱ型脫碘酶(D2)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 經(jīng)HBCD單一暴露21天,10、100、300ug/kg劑量組D1活性顯著性升高(P0.05)。經(jīng)HBCD暴露42天,所有暴露劑量組大鼠肝臟中Ⅰ型脫碘酶(D1)活力均呈現(xiàn)降低的現(xiàn)象,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。90天,HBCD對大鼠肝臟組織D1活性的影響與暴露42天時(shí)的現(xiàn)象一致。經(jīng)HBCD/DE-71暴露21天后,300ug/kg劑量組D1活性出現(xiàn)顯著性增大的現(xiàn)象(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天,所有暴露劑量組大鼠肝臟D1活性同21天的現(xiàn)象一致,活性均增大,但42天活性的升高并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71長期暴露后,各暴露劑量組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1)活性均下降。 經(jīng)過HBCD暴露21天,10、50、100ug/kg染毒組大鼠腦組織D2活性顯著性下降(P0.05)。經(jīng)暴露42天,所有暴露劑量組大鼠腦組織中D2活性均呈現(xiàn)下降的趨勢,其中50ug/kg和100ug/kg染毒組出現(xiàn)顯著性下降的趨勢(P0.05)。經(jīng)暴露90天,50、100ug/kg劑量組D2活性顯著性升高(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露21天后,所有的暴露劑量組大鼠腦組織D2活性均出現(xiàn)了明顯升高的趨勢,尤其10ug/kg劑量組D2活性顯著性升高(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天,300ug/kg劑量組D2活性出現(xiàn)顯著性增大的現(xiàn)象(P0.05)。經(jīng)90天長期暴露,所有染毒組D2活性全部呈現(xiàn)出顯著性升高的趨勢(P0.05)。 3、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Real-time PCR)定量測定甲狀腺激素代謝酶基因表達(dá)水平的變化,包括Ⅰ型脫碘酶(D1)及Ⅱ型脫碘酶(D2)基因表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 經(jīng)HBCD暴露21天,染毒組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1) mRNA表達(dá)水平隨劑量呈現(xiàn)先降低后增大的趨勢,但整體mRNA表達(dá)水平無顯著性差異,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。暴露至42天,300ug/kg染毒組D1mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P0.05)。經(jīng)HBCD長期暴露后,10、50、100ug/kg劑量組大鼠肝臟Ⅰ型脫碘酶(D1)mRNA表達(dá)水平顯著性增大(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露21天,10～100ug/kg劑量組D1mRNA表達(dá)水平顯著性升高(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露42天,100ug/kg劑量組D1mRNA表達(dá)水平顯著性升高(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71暴露90天后,50、100、300ug/kg暴露劑量組大鼠D1mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P0.05)。 經(jīng)HBCD暴露21天后,所有暴露染毒組中大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶(D2) mRNA表達(dá)水平均出現(xiàn)明顯下降(P0.05)。經(jīng)HBCD暴露42天,50ug/kg染毒組大鼠腦組織中D2mRNA表達(dá)水平顯著性下降(P0.05)。經(jīng)HBCD長期暴露,各暴露組大鼠腦組織D2mRNA表達(dá)水平開始呈現(xiàn)明顯升高的趨勢,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露21天,100ug/kg和300ug/kg暴露組大鼠D2mRNA表達(dá)水平顯著性增大(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露42天,與對照組相比,10-300ug/kg暴露劑量組的大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶(D2)基因表達(dá)水平出現(xiàn)升高的趨勢但無明顯差異(P0.05)。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合暴露90天后,10ug/kg和300ug/kg染毒組大鼠D2mRNA表達(dá)水平顯著性升高(P0.05)。 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出以下結(jié)論： 1、本實(shí)驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)HBCD對甲狀腺激素具有促進(jìn)或激動劑的效果,導(dǎo)致甲狀腺激素水平的升高,干擾了體內(nèi)甲狀腺激素的相對平衡狀態(tài)。而對于多溴聯(lián)苯醚而言,以往的研究通常顯示其對甲狀腺激素具有抑制的作用,常常導(dǎo)致甲狀腺激素水平的下降。但本研究中HBCD與DE-71作為一復(fù)合污染體系作用時(shí),甲狀腺激素水平并未出現(xiàn)下降,反而升高,但從21天來看,對甲狀腺激素的影響無顯著差異,對照HBCD單獨(dú)暴露的結(jié)果來看體現(xiàn)了PBDEs的抑制作用。此外,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明HBCD及HBCD/DE-71更易通過影響游離甲狀腺激素水平(FT3、FT4)對機(jī)體的生理過程產(chǎn)生影響。 2、本研究中HBCD單獨(dú)進(jìn)行短期21d暴露時(shí),Ⅰ型脫碘酶活性升高；經(jīng)不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)暴露后,隨著時(shí)間的推移,HBCD對Ⅰ型脫碘酶的活性無明顯影響。經(jīng)HBCD/DE-71復(fù)合污染暴露后,發(fā)現(xiàn)短期暴露時(shí)高暴露劑量的兩種污染物聯(lián)合作用導(dǎo)致大鼠Ⅰ型脫碘酶活性明顯升高,長期暴露時(shí)低暴露劑量組和高劑量組均明顯抑制了Ⅰ型脫碘酶的活性,與HBCD單獨(dú)作用時(shí)產(chǎn)生的毒性效果存在很大差異。經(jīng)HBCD短期單獨(dú)暴露后,低濃度的HBCD對大鼠腦組織Ⅱ型脫碘酶活性產(chǎn)生抑制作用。長期暴露后,HBCD對Ⅱ型脫碘酶活性無影響,表明這種抑制作用是可逆轉(zhuǎn)的,可隨著時(shí)間的推移逐漸消失。當(dāng)HBCD與DE-71兩種復(fù)合暴露后,不管是短期暴露還是長期暴露,這一復(fù)合污染體系均使得D2活性明顯升高,尤其是90天長期暴露時(shí)間內(nèi)D2活性表現(xiàn)更為明顯。上述結(jié)果均表明HBCD及HBCD/DE-71均能夠通過改變脫碘酶的活性來影響甲狀腺激素的代謝過程從而進(jìn)一步影響機(jī)體內(nèi)甲狀腺激素水平的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。 3、研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)HBCD短期暴露后HBCD對Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平并未產(chǎn)生影響。而長期暴露后,低濃度的HBCD使Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平升高,但中期42d暴露后高濃度的HBCD對Ⅰ型脫碘酶(D1)的基因表達(dá)水平具有抑制作用。HBCD/DE-71復(fù)合暴露研究發(fā)現(xiàn),短期暴露后,HBCD/DE-71對D2基因表達(dá)水平有促進(jìn)作用；長期暴露后則對其產(chǎn)生抑制作用。這表明HBCD與HBCD/DE-71對Ⅰ型脫碘酶基因轉(zhuǎn)錄過程的影響隨著暴露時(shí)間的不同表現(xiàn)出的毒性效果也出現(xiàn)差異。但對Ⅱ型脫碘酶來說,HBCD對D2的基因轉(zhuǎn)錄水平表現(xiàn)為抑制作用趨勢,而HBCD/DE-71對D2基因轉(zhuǎn)錄水平卻表現(xiàn)為促進(jìn)的趨勢。
[Abstract]:In order to study the effects of HBCD and HBCD / PBDES on the metabolism of thyroid hormones , the effects of HBCD and HBCD / PBDES on thyroid hormone metabolism were studied .

1 . The changes of thyroid hormone - related indexes in serum were measured by radioimmunoassay ( RIA ) , including TT3 , TT4 , FT3 , FT3 , TSH , etc . The results showed that :

The concentrations of TT3 , TT4 , FT3 and FT4 increased significantly in the serum of exposed dose groups ( P0.05 ) . The concentrations of FT3 , FT4 increased significantly ( P0.05 ) .
Compared with the control group , TT3 , TT4 , FT3 , FT4 and the exposure ratio of TT3 , TT4 , FT3 , FT4 decreased significantly ( P0.05 ) .
The serum levels of TT4 , FT3 and FT4 in serum of rats exposed to HBCD / DE - 71 increased significantly ( P0.05 ) . The levels of TT4 , FT3 , FT4 , FT3 and TSH in serum of rats with 50ug / kg and 300ug / kg were significantly increased ( P0.05 ) , and the concentrations of TT4 , TT3 , FT4 , FT3 and TSH in serum of rats were increased significantly ( P0.05 ) .

2 . Using the method of Chopra ' s method to determine the activity of thyroid hormone metabolism enzyme ( deiodoenzyme ) , it includes : type 鈪，

本文編號：1976076