本文選題：丙烯酰胺 + 神經(jīng)元發(fā)育��； 參考：《廣東藥學(xué)院》2014年碩士論文

【摘要】：丙烯酰胺（ACR）是一種在工業(yè)中廣泛應(yīng)用的化學(xué)物質(zhì)，主要用于合成聚丙烯酰胺，，聚丙烯酰胺廣泛應(yīng)用于國防、石化、水處理、造紙、紡織、科研實驗等多種領(lǐng)域。聚丙烯酰胺本身沒有毒性，但ACR復(fù)合體中常常含有微量的單體，單體形式的ACR具有毒性，對人體產(chǎn)生一定的危害。動物實驗研究表明，丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性、生殖毒性和致癌性，但只有神經(jīng)毒性是在人群中發(fā)現(xiàn)的。目前關(guān)于丙烯酰胺的神經(jīng)毒性在成年動物中有大量的報道，丙烯酰胺的神經(jīng)毒性主要是引起中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的軸突病變，其毒性表現(xiàn)為共濟(jì)失調(diào)、骨骼肌無力、體重減輕，病理特征為外周神經(jīng)元軸突的腫脹、變性。我們課題的前期研究也證實了丙烯酰胺的神經(jīng)毒性。 自從2002年發(fā)現(xiàn)多種富含糖類和天冬氨酸殘基的食物在高溫烹調(diào)中會通過美拉德反應(yīng)產(chǎn)生ACR后，食材中ACR的暴露作為一種食品安全問題引起全球的廣泛關(guān)注。2006年，第64屆FAO/WHO聯(lián)合食品添加劑專家委員會指出，普通人群從食品中攝取ACR的平均量為每天每公斤體重1μg。由于嬰兒和兒童體重更輕，但消耗的零食更多，比如薯片、餅干和奶酥等，所以他們相對的ACR攝入量更高，大約是成人的2 3倍。因此，研究ACR對嬰幼兒神經(jīng)發(fā)育是否會造成傷害就顯得十分重要，而關(guān)于ACR對胚胎期和哺乳期動物的神經(jīng)元發(fā)育的影響還不清楚。為此，我們開展了丙烯酰胺亞急性染毒對斷乳期大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響的研究。 本研究的目的是通過觀察胚胎期和哺乳期暴露于丙烯酰胺的幼鼠的體重變化；HE染色觀察海馬齒狀回神經(jīng)元形態(tài)學(xué)變化；免疫組織熒光檢測海馬齒狀回神經(jīng)元DCX和SYP表達(dá)的變化；Western Blot檢測海馬中BDNF和GAP-43表達(dá)量的變化，來初步探討胚胎期和哺乳期丙烯酰胺暴露對大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響以及其可能的機(jī)制。 方法： 1.動物模型的建立：SPF級SD大鼠，雌雄各32只，5-8周齡，體重150-180g，隨機(jī)以1:1的比例雌雄大鼠同籠交配，逐日早晨檢查陰栓，查到陰栓，則確認(rèn)交配成功，并定該日為妊娠第“0”天。將孕鼠隨機(jī)分為四組，每組8只，于妊娠第6天開始給藥，第一組母鼠的飲水中不加丙烯酰胺作為空白對照組，第二、三、四組母鼠的飲水中分別加入丙烯酰胺使其濃度為50ppm、100ppm、200ppm。連續(xù)給藥至幼鼠出生后第21天（分娩當(dāng)天記為出生后第“0”天）。每窩幼鼠在出生后第三天稱重并都隨機(jī)保留8只。 2.母鼠的一般生理指標(biāo)檢測：密切觀察各組母鼠的一般狀況，染毒期間每周測量各組母鼠飼料的消耗量、飲水量和體重的變化，計算出染毒期間各組母鼠丙烯酰胺的平均日攝入量。 3.母鼠步態(tài)評分的觀測：密切觀察各組母鼠神經(jīng)行為的改變，染毒期間每周給出步態(tài)評分。 4.幼鼠的生長觀測：從幼鼠出生日至斷乳期，密切觀察幼鼠的一般生長狀況，每周為幼鼠稱量一次體重。 5.幼鼠海馬中神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀測：取斷乳期幼鼠大腦組織的石蠟切片進(jìn)行常規(guī)HE染色，光鏡下觀察海馬齒狀回神經(jīng)元的形態(tài)學(xué)變化。 6.幼鼠海馬中DCX、SYP的表達(dá)：利用免疫熒光組織化學(xué)法觀測各組斷乳期幼鼠海馬中DCX、SYP的表達(dá)情況，并對免疫熒光陽性產(chǎn)物進(jìn)行圖像分析。 7.幼鼠海馬中BDNF、GAP-43的表達(dá)量的檢測：利用Western Blot檢測各組斷乳期幼鼠海馬中BDNF、GAP-43的表達(dá)含量。 8.統(tǒng)計學(xué)處理：實驗數(shù)據(jù)采用x s表示，應(yīng)用用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。母鼠步態(tài)得分用Mann Whitney U Test進(jìn)行分析，其它數(shù)據(jù)采用單因素方差分析，如果差異性顯著再用LSD法進(jìn)行組間兩兩比較。檢驗水準(zhǔn)α=0.05，若P0.05，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果： 1. ACR對母鼠的影響：ACR染毒期間，與0ppm組相比，100ppm組和200ppm組母鼠體重減輕，飼料消耗量和飲水量有所減少，步態(tài)得分增高，染毒結(jié)束時，100ppm組和200ppm組母鼠分別呈輕度和中 重度神經(jīng)受損癥狀。 2. ACR對幼鼠生長的影響：與0ppm組相比，50ppm組、100ppm組和200ppm組幼鼠出生時體重偏低，而且生長緩慢，至斷乳期，50ppm組、100ppm組和200ppm組的幼鼠的體重和對照組相比明顯下降（P0.01），分別為對照組幼鼠體重的96.25%、81.07%和62.34%。 3.各組斷乳期幼鼠海馬HE染色結(jié)果：光學(xué)顯微鏡下觀察，50ppm組幼鼠海馬齒狀回中神經(jīng)元未見顯著性變化；100ppm組幼鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層神經(jīng)元排列較為疏松，神經(jīng)元數(shù)量有所減少，顆粒細(xì)胞層及亞顆粒細(xì)胞層中可見少量神經(jīng)元發(fā)生胞核固縮；與100ppm組相比，200ppm組幼鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層神經(jīng)元排列更加疏松，亞顆粒細(xì)胞層核固縮的神經(jīng)元進(jìn)一步增多，神經(jīng)元核固縮程度加重。 4.各組斷乳期幼鼠海馬神經(jīng)元DCX和SYP的免疫熒光組織化學(xué)檢測結(jié)果：DCX免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)位于顆粒層以及齒狀回門區(qū)的神經(jīng)元胞體和軸突中，免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞多呈圓形或梭形，與0ppm組和50ppm相比，100ppm組幼鼠海馬齒狀回中DCX陽性神經(jīng)元平均光密度值減小，差異性顯著（P0.05），200ppm組幼鼠海馬齒狀回中DCX陽性神經(jīng)元平均光密度值減小，差異性極顯著性（P0.01）；SYP免疫反應(yīng)陽性物質(zhì)主要位于齒狀回顆粒層中，與0ppm組相比，100ppm組幼鼠海馬齒狀回中SYP陽性神經(jīng)元平均光密度值減小，差異性顯著（P0.05），200ppm組幼鼠海馬齒狀回中SYP陽性神經(jīng)元平均光密度值減小，差異性極顯著（P0.01）。 5.各組斷乳期幼鼠海馬組織中BDNF和GAP-43的Western Blot檢測結(jié)果：BDNF和GAP-43在各組幼鼠海馬中都有陽性表達(dá)，與0ppm組和50ppm組幼鼠海馬中BDNF表達(dá)量相比，100ppm組降低，差異性顯著（P0.05），200ppm組極度降低（P0.01）；與0ppm組幼鼠海馬中GAP-43表達(dá)量相比，50ppm組降低，差異性顯著（P0.05），100ppm組和200ppm組極度降低（P0.01）。 結(jié)論： 1. ACR母源性染毒能導(dǎo)致幼鼠出生時體重降低，并且在哺乳期間體重生長緩慢。 2.胚胎期和哺乳期ACR染毒可導(dǎo)致幼鼠海馬中DCX、SYP、BDNF、GAP-43的表達(dá)下降，并影響到海馬神經(jīng)元發(fā)育。 3. ACR亞急性染毒對斷乳期大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)育的影響機(jī)制可能與抑制神經(jīng)元的增殖和分化及突觸形成有關(guān)。
[Abstract]:acrylamide ( ACR ) is a widely used chemical substance in industry . It is widely used in many fields such as defense , petrochemical , water treatment , papermaking , textile and scientific research .

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本文編號：1956409