發(fā)布時(shí)間：2018-05-23 07:01

  本文選題：雙酚A + 長(zhǎng)期暴露�。� 參考：《浙江大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：第一部分長(zhǎng)期雙酚A暴露小鼠模型的建立及其脂代謝狀況檢測(cè)目的：研究人類曰常暴露劑量雙酚A的長(zhǎng)期慢性暴露對(duì)小鼠脂代謝的影響。材料和方法：建立雙酚A暴露的小鼠模型。母鼠自生產(chǎn)第一天起,給予含有2.5μg/L(約0.5μg/kg/d,為人類日常接觸劑量)雙酚A的水。對(duì)照組母鼠則喂養(yǎng)單純含溶劑(0.1%體積乙醇)的水。小鼠3周斷奶后,繼續(xù)給雄性子代小鼠喂養(yǎng)和其母親含有相同劑量雙酚A的水。檢測(cè)對(duì)照組及雙酚A組的雄性子代小鼠8周及10個(gè)月的體重、肝臟重量及內(nèi)臟脂肪重量。用血糖測(cè)試儀測(cè)試其空腹血糖；用ELISA試劑盒測(cè)試其血清胰島素水平；用TBA120FR生化分析儀檢測(cè)小鼠血清血脂及肝轉(zhuǎn)氨酶水平；用甘油三酯及膽固醇試劑盒測(cè)試小鼠肝臟甘油三酯及膽固醇水平；用油紅-O染色及HE染色觀察小鼠肝臟脂肪堆積情況。結(jié)論：長(zhǎng)期慢性接觸人類日常暴露劑量的雙酚A會(huì)使小鼠在10月齡(中年)發(fā)生體重增加、血糖血脂異常、肝臟甘油三酯及膽固醇堆積等代謝改變。第二部分：長(zhǎng)期雙酚A暴露小鼠的肝臟脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)情況目的：研究長(zhǎng)期雙酚A暴露小鼠的肝臟脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)變化情況以探究雙酚A暴露導(dǎo)致小鼠脂代謝異常的機(jī)制。材料和方法：取雙酚A及對(duì)照組兩組8周及10月大雄性小鼠的肝臟組織,用Trizol法提取總RNA,運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,用SYGR-Green法運(yùn)用7900Real-Time PCR儀器行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)比較兩組小鼠肝臟的脂代謝相關(guān)酶及脂代謝相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況。結(jié)果：十月齡的小鼠中,雙酚A暴露組肝臟組織中脂肪酸及膽固醇合成相關(guān)的基因表達(dá)明顯上升,且甘油三酯及膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因、脂肪酸氧化相關(guān)基因的表達(dá)明顯下降。其中Fasn的表達(dá)量雙酚A組是對(duì)照組的2倍,而Scd1、Hmgcr及Sqle的表達(dá)量則是對(duì)照組的4倍。另外,調(diào)控脂肪酸及膽固醇合成關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子Srebf1及Srebf2的表達(dá)也明顯上升。結(jié)論：雙酚A所致的肝臟脂肪代謝異常及相關(guān)血脂異常的可能機(jī)制有：肝臟脂肪酸及膽固醇合成增加、肝臟甘油三酯及膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)異常及脂肪酸氧化分解抑制。而其中肝臟脂肪酸及膽固醇的合成增加在BPA所致脂代謝異常中可能發(fā)揮主要作用。轉(zhuǎn)錄因子Srebf1及Srebf2的表達(dá)上升則在BPA所致肝臟脂代謝相關(guān)基因表達(dá)異常中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。第三部分DNA甲基化異常致雙酚A暴露小鼠脂代謝相關(guān)基因差異表達(dá)目的：探究DNA甲基化在雙酚A所致小鼠脂代謝基因表達(dá)異常中發(fā)揮的作用。材料和方法：取雙酚A及對(duì)照組兩組8周及10月大雄性小鼠的肝臟組織,提取DNA、總RNA及蛋白質(zhì)。利用MassARRAY TM EpiTYPER DNA甲基化定量分析技術(shù)分析肝臟脂代謝相關(guān)的幾個(gè)關(guān)鍵基因某個(gè)或某些特定CpG位點(diǎn)的甲基化水平。用Real-time PCR及western blot檢測(cè)比較兩組小鼠肝臟的甲基化轉(zhuǎn)移酶(Dnmt1、Dnmt3a及Dnmt3b)的表達(dá)情況。運(yùn)用Dnmtl/3a/3b siRNA將Hepal-6小鼠肝癌細(xì)胞系Dnmt1/3a/3b敲除后檢測(cè)Hepal-6細(xì)胞系中的脂代謝相關(guān)基因的DNA甲基化水平,mRNA表達(dá)水平及Hepal-6細(xì)胞系中甘油三酯及膽固醇的水平,以探究DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶對(duì)脂代謝相關(guān)基因DNA甲基化、轉(zhuǎn)錄表達(dá)的作用。運(yùn)用BPA處理Hepal-6小鼠肝癌細(xì)胞系并觀察DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)情況,以探究BPA暴露對(duì)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的影響。結(jié)果：8周小鼠中,雙酚A暴露組的Srebf2及Hmgcr啟動(dòng)子區(qū)域的整體DNA甲基化水平較對(duì)照組低。10月小鼠中,雙酚A暴露組Srebfl, Srebf2, Fasn及Hmgcr轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)整體DNA甲基化水平都較對(duì)照組低。另外上述兩個(gè)年齡組的雙酚A組小鼠四個(gè)脂肪合成相關(guān)基因的多個(gè)CpG位點(diǎn)DNA甲基化水平也較對(duì)照組低。實(shí)時(shí)定量PCR和western blot檢測(cè)顯示,雙酚A暴露組的8周小鼠中Dnmt1及Dnmt3a的mRNA.蛋白表達(dá)量和10月小鼠的Dnmt3b的mRNA、蛋白表達(dá)量較對(duì)照組低。Hepal-6細(xì)胞系中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶敲除可導(dǎo)致脂代謝合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的去甲基化及mRNA表達(dá)量上升。BPA處理Hepal-6可以下調(diào)Hepal-6 DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的表達(dá)水平。結(jié)論：雙酚A暴露組中Srebfl, Srebf2, Fasn及Hmgcr啟動(dòng)子區(qū)域的DNA甲基化水平下降可能在雙酚A所致上述四個(gè)基因表達(dá)上升中發(fā)揮一定作用。而雙酚A暴露組中甲基化轉(zhuǎn)移酶表達(dá)的下降是這些基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化下調(diào)的重要原因。
[Abstract]:The effects of long - term chronic exposure of bisphenol A on lipid metabolism in mice were studied by the first part of long - term bisphenol A exposure in mice . The rats were fed with water containing 2.5 渭g / L ( about 0.5 渭g / kg / day , daily contact dose ) . The control group and the control group were fed with water containing 2.5 渭g / L ( about 0.5 渭g / kg / day , which was the daily contact dose of human ) .
The serum insulin level was measured by ELISA kit .
Serum levels of serum lipids and liver transaminase in mice were measured with TBA120FR biochemical analyzer .
Triglyceride and cholesterol were used to test the levels of triglyceride and cholesterol in mice .
The results showed that the expression of fatty acids and cholesterol in liver tissues of mice exposed to bisphenol A was 2 times higher than that of control group . The results showed that the expression of fatty acids and cholesterol in liver tissues of mice exposed to bisphenol A was 2 times that of control group .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R114

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本文編號(hào)：1923733