本文選題：己烯雌酚 + 鄰苯二甲酸二丁酯��； 參考：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.研究己烯雌酚(DES)、鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)、丙基硫脲嘧啶(PTU)三種類型內(nèi)分泌干擾物對(duì)GT1-7神經(jīng)細(xì)胞增殖的劑量效應(yīng)關(guān)系;2.研究DES、DBP、PTU對(duì)GT1-7神經(jīng)細(xì)胞分泌Gn RH的影響及其聯(lián)合作用;3.研究DES、DBP、PTU聯(lián)合暴露對(duì)GT1-7神經(jīng)細(xì)胞分泌Gn RH的可能機(jī)制。方法:1.采用永生化的下丘腦GT1-7神經(jīng)細(xì)胞模型,將三種受試物暴露24h后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。選擇的受試物及其濃度為:DES為0.1、1、10、100、1000μmol/L,DBP為0.01、1、10、100、1000μmol/L,PTU為0.0001、0.01、1、100、1000μmol/L,聯(lián)合作用的濃度設(shè)計(jì)為DES 0.1-1000μmol/L,DBP 0.01μmol/L,PTU0.0001μmol/L。2.CCK-8法檢測(cè)三種物質(zhì)單獨(dú)暴露和聯(lián)合暴露的GT1-7細(xì)胞存活率。3.Gn RH放免試劑盒檢測(cè)單獨(dú)暴露組及聯(lián)合暴露組細(xì)胞培養(yǎng)液中Gn RH的分泌量。4.Western Blot檢測(cè)聯(lián)合暴露組PLC、GPR54、PKC、Gn RH蛋白表達(dá)量。5.RT-PCR檢測(cè)暴露組PLC、GPR54、PKC、Gn RH基因表達(dá)量。結(jié)果:1.GT1-7細(xì)胞單獨(dú)暴露于DES時(shí),各染毒組細(xì)胞存活率由110%降至4%左右,暴露于DBP時(shí)各組細(xì)胞存活率由130%降至60%左右,均表現(xiàn)為隨濃度的增大細(xì)胞存活率呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢(shì)。細(xì)胞單獨(dú)暴露于PTU時(shí),各組的細(xì)胞存活率相比對(duì)照組有所增加,但基本維持在一定水平120%-135%左右。DES、DBP、PTU單獨(dú)作用時(shí),其濃度分別低于10μmol/L、100μmol/L、1000μmol/L時(shí)GT1-7細(xì)胞存活率在90%以上。而GT1-7細(xì)胞單獨(dú)暴露于此三種物質(zhì)時(shí)對(duì)Gn RH的分泌量的影響則表現(xiàn)為隨DES濃度的增大呈現(xiàn)先增加后降低趨勢(shì),對(duì)照組2.36μg/ml,染毒組由6.26μg/ml降至2.19μg/ml;隨DBP濃度的增大呈降低趨勢(shì),由對(duì)照組2.60μg/ml降至染毒組1.66μg/ml、1.95μg/ml;隨PTU濃度的增大呈先增后降趨勢(shì),對(duì)照組2.3μg/ml,染毒組由3.01μg/ml降至1.46μg/ml。2.DES與PTU、DBP與PTU聯(lián)合暴露時(shí),細(xì)胞存活率隨濃度增加表現(xiàn)為先增加后降低。相比DES單獨(dú)作用體系,0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU同時(shí)加入到0-10μmol/L DES后細(xì)胞存活率顯著增加,約為126%-160%,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。0.01μmol/L DBP和0.0001μmol/L PTU加入DES中后,Gn RH的分泌量隨DES濃度的增加呈降低趨勢(shì),表現(xiàn)為對(duì)照組4.23μg/ml,染毒組0.75μg/ml和1.50μg/ml。3.聯(lián)合暴露時(shí),Kisspeptins/GPR54信號(hào)通路上的各濃度組PKC蛋白表達(dá)量為1.8和1.3,各濃度組PLC蛋白表達(dá)量為1.11和1.14,及DES為0.1μmol/L的GPR54組蛋白表達(dá)量為1.1,上述這些蛋白表達(dá)量相比對(duì)照組都有所增加;而各濃度組Gn RH蛋白表達(dá)量為0.9和0.8,及DES為1μmol/L的GPR54組蛋白表達(dá)量為0.7,上述蛋白表達(dá)量相比對(duì)照組減少。而各濃度PKC基因表達(dá)量為3.9和2.8,GPR54基因表達(dá)量為2.2和1.0,PLC基因表達(dá)量為2.1和1.7,上述基因表達(dá)量相比對(duì)照組都有所增加,Gn RH基因表達(dá)量0.8和0.6,相比對(duì)照組減少。GPR54、PKC、PLC蛋白和基因表達(dá)量基本呈增大趨勢(shì),細(xì)胞內(nèi)Gn RH蛋白及其基因表達(dá)量的變化趨勢(shì)與培養(yǎng)液內(nèi)Gn RH分泌量的變化趨勢(shì)基本一致,呈降低趨勢(shì),這與信號(hào)通路上幾種主要蛋白表達(dá)量的變化呈相反趨勢(shì)。結(jié)論:1.DES、DBP、PTU在一定濃度下共同暴露對(duì)GT1-7細(xì)胞增殖呈現(xiàn)聯(lián)合作用,根據(jù)DES濃度的不同表現(xiàn)為協(xié)同和拮抗效應(yīng)。當(dāng)0.01μmol/LDBP、0.0001μmol/L PTU和0-10μmol/L DES聯(lián)合暴露對(duì)GT1-7細(xì)胞的增殖表現(xiàn)為協(xié)同作用,0.01μmol/L DBP、0.0001μmol/L PTU和100μmol/L DES聯(lián)合暴露則對(duì)GT1-7細(xì)胞的增殖表現(xiàn)為協(xié)同或相加效應(yīng)。2.DES、DBP、PTU在一定濃度下共同暴露對(duì)GT1-7細(xì)胞培養(yǎng)液中的Gn RH分泌呈現(xiàn)聯(lián)合作用,表現(xiàn)為拮抗效應(yīng)。3.DES、DBP、PTU聯(lián)合暴露時(shí)可能促進(jìn)Kisspeptins/GPR54信號(hào)通路上GPR54、PKC、PLC蛋白和基因的表達(dá)而抑制Gn RH蛋白和基因的表達(dá),表明Kisspeptins/GPR54信號(hào)通路雖然參與了調(diào)控Gn RH分泌的過程,但仍可能還有其他信號(hào)通路參與并發(fā)揮主要作用,具體調(diào)控機(jī)制以及其他未知的相關(guān)機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。
[Abstract]:The effects of DES , DBP and PTU on the proliferation of GT1 - 7 nerve cells were studied . Compared with the control group , the expression levels of PKC protein were 1.8 and 1.8 , and the expression level of GT1 - 7 cells increased significantly compared with the control group . The combination of DBP and PTU may promote the expression of GPRS 54 , PKC , PLC proteins and genes on the signaling pathway of Kisspephosph/ GPRS 54 to inhibit the expression of Gn RH proteins and genes , suggesting that although the Kisspepsi / GPRS 54 signal pathway is involved in the regulation of the secretion of Gn RH , there may be other signal pathways involved and play a major role , and the specific regulatory mechanism and other unknown relevant mechanisms are still to be further studied .
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R114

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1919800