本文關(guān)鍵詞：pH敏感性羧甲基殼聚糖藥物載體的設(shè)計(jì)、制備及藥物傳遞研究

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【摘要】：化療是臨床治療多種腫瘤的常用方法之一,但是,大多數(shù)化療藥物在血液中半衰期短,藥物利用率低,降低了藥物療效,并且藥物不能區(qū)分腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞,從而產(chǎn)生了多種副作用,因此,提高腫瘤部位的藥物富集量是提高化療效果的關(guān)鍵因素之一,為了達(dá)到上述目的,藥物傳遞系統(tǒng)迅速發(fā)展。藥物傳遞系統(tǒng)是指在治療疾病的過程中為了獲到更好的治療效果所采用的不同給藥形式。在該研究領(lǐng)域中,納米藥物傳遞系統(tǒng)和聚合物水凝膠藥物傳遞系統(tǒng)是比較常見的兩種類型。納米藥物傳遞系統(tǒng)采用生物相容性好的天然或人工合成高分子材料制備成納米尺寸的載體顆粒,進(jìn)一步負(fù)載傳統(tǒng)小分子化療藥物。納米藥物輸送體系進(jìn)入血液循環(huán)后,由于增強(qiáng)滲透與滯留效應(yīng)(EPR效應(yīng)),被動(dòng)富集在腫瘤組織內(nèi),從而提高了腫瘤組織內(nèi)的藥物濃度,減小對正常組織的毒副作用。但是,基于EPR效應(yīng)的納米藥物輸送體系往往只能富集在腫瘤組織的血管周圍區(qū)域,無法進(jìn)一步的向腫瘤組織內(nèi)部滲透,不能被腫瘤細(xì)胞很好的攝取,限制了治療效果。為了解決這一問題,在納米藥物輸送體系表面修飾一系列可以和腫瘤細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合的配體如葉酸、轉(zhuǎn)鐵蛋白、RGD多肽、半乳糖、苯硼酸等,可以制備多種具有主動(dòng)靶向功能的納米載體。靶向基團(tuán)修飾的納米載體在體內(nèi)循環(huán)時(shí)首先通過EPR效應(yīng)被動(dòng)富集在腫瘤組織外圍血管豐富的區(qū)域,進(jìn)一步通過配體-受體作用被腫瘤細(xì)胞識別并攝取,提高納米藥物載體的藥物傳輸效率。除納米藥物傳遞系統(tǒng)之外,高分子水凝膠藥物傳遞系統(tǒng)也是一種常用的藥物傳遞系統(tǒng)。由于聚合物鏈段的親水作用,水凝膠能在他們的結(jié)構(gòu)中包含有大量的水溶液。水凝膠的高含水量和柔軟的表面性質(zhì)使他們具有非常好的生物相容性。此外,通過合成或者后處理方法的可以輕易的調(diào)節(jié)他們的物理化學(xué)性質(zhì),機(jī)械性能,生物學(xué)性能以及新的功能性質(zhì),從而獲得具有多樣性質(zhì)的水凝膠。比如,水凝膠可以設(shè)計(jì)為對各種外界環(huán)境刺激響應(yīng)的材料,如pH值,溫度,光以及特殊分子等。這些特殊的性質(zhì)使水凝膠在制藥學(xué),生物醫(yī)學(xué)尤其是藥物載體及控制釋放領(lǐng)域擁有廣泛的應(yīng)用。羧甲基殼聚糖(CMCS)是殼聚糖(CS)的一種衍生物,具有良好的生物相容性,與殼聚糖相比,在中性和堿性條件下也具有較好的溶解性,并且可以通過改變羧甲基取代度控制其溶解性�；隰燃谆鶜ぞ厶堑纳鲜鰞�(yōu)點(diǎn),本論文主要開展了以下工作：1)設(shè)計(jì)、制備了具有pH敏感性的羧甲基殼聚糖-聚苯硼酸復(fù)合納米微球(CMCS-PAPBA NPs)和表面修飾葉酸基團(tuán)的靶向羧甲基殼聚糖-聚苯硼酸復(fù)合納米微球(FA/CMCS-PAPBA NPs),并研究了微球的理化性質(zhì)和抗腫瘤活性；納米微球的粒徑分別為207.3 nm和193.3 nm；通過掃描電鏡和透射電鏡觀察納米微球直徑均一、規(guī)整、分散；利用DLS詳細(xì)研究了兩種納米微球在不同生理?xiàng)l件下的穩(wěn)定性；制備的納米微球可以成功負(fù)載抗腫瘤藥物阿霉素,載藥量分別達(dá)到26.30%和34.44%；在藥物體外釋放的研究中,兩組載藥納米微球都表現(xiàn)pH依賴的藥物釋放性質(zhì),即中性條件下(pH 7.4)藥物釋放較慢,弱酸性條件下(pH5.0)藥物釋放加快。2)細(xì)胞攝取試驗(yàn)表明,非靶向納米粒子(CMCS-PAPBA NPs)和靶向納米粒子(FA/CMCS-PAPBA NPs)都可以成功進(jìn)入到SH-SY5Y細(xì)胞中并且將阿霉素釋放到細(xì)胞核中；在細(xì)胞毒性(MTT)試驗(yàn)中,兩組空白微球幾乎沒有毒性,與細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后細(xì)胞存活率均高于90%；與兩組載藥納米微球共培養(yǎng)的SH-SY5Y細(xì)胞的存活率都隨藥物濃度的增大而降低;此外,利用SH-SY5Y細(xì)胞構(gòu)建了3-D細(xì)胞團(tuán),考察了納米微球的細(xì)胞攝取情況和細(xì)胞毒性,結(jié)果表明,葉酸修飾的靶向納米微球可以更好的被3-D細(xì)胞團(tuán)攝取,并有效抑制3-D細(xì)胞團(tuán)的增殖。3)構(gòu)建了小鼠肝癌細(xì)胞H22的皮下異種移植腫瘤模型并研究了載藥納米微球的體內(nèi)分布以及抗腫瘤效果；在體內(nèi)分布試驗(yàn)中,注射靶向載藥納米微球(DOX-loaded FA/CMCS-PAPBA NPs)的小鼠,其腫瘤部位在48 h內(nèi)總的藥物濃度明顯高于普通載藥納米微球組(DOX-loaded CMCS-PAPBA NPs)以及游離藥物阿霉素組(DOX)；在抗腫瘤試驗(yàn)中,分別給小鼠注射不同樣品組,并觀察小鼠腫瘤的生長情況；結(jié)果發(fā)現(xiàn),注射生理鹽水以及兩組空白粒子的小鼠腫瘤平均質(zhì)量比較大,分別為1.2±0.64 g,1.7±0.63 g,1.5±0.48 g,而普通載藥微球組和靶向載藥微球組的腫瘤平均質(zhì)量分別為0.6±0.39 g和0.5±0.31 g,明顯小于阿霉素組的腫瘤平均質(zhì)量0.9±0.39 g,同時(shí),靶向載藥微球組小鼠腫瘤生長抑制率52.28%也明顯高于阿霉素組、普通載藥微球組的24.60%和47.96%;腫瘤組織切片表明,葉酸修飾的靶向納米粒子治療組小鼠腫瘤組織的壞死最為嚴(yán)重。這些結(jié)果表明了靶向載藥納米微球相比于游離藥物和普通載藥納米微球能更有效的抑制腫瘤生長。4)通過一種簡單的方法合成了具有酸敏感性的原酸酯類交聯(lián)劑(OEDE),在水溶液中使用交聯(lián)劑交聯(lián)羧甲基殼聚糖,制備了具有pH敏感性的水凝膠。綜上所述,本論文以羧甲基殼聚糖為材料設(shè)計(jì)的pH敏感性納米粒子載體在提高抗腫瘤效果的同時(shí),降低了藥物對正常組織的毒性,因此在腫瘤化療領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：羧甲基殼聚糖 藥物傳遞 原酸酯 納米粒子 水凝膠
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R91
【目錄】：

• 摘要3-6
• Abstract6-13
• 第一章 緒論13-23
• 1.1 腫瘤發(fā)生、病因以及治療方法13-15
• 1.2 納米藥物載體的種類15-17
• 1.3 納米粒子的材料17-19
• 1.4 靶向納米粒子19-21
• 1.5 論文主要內(nèi)容21-23
• 第二章 羧甲基殼聚糖納米粒子的制備23-33
• 2.1 引言23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器23-25
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器24-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-27
• 2.3.1 3-丙烯酰胺基苯硼酸的合成25
• 2.3.2 伯胺含量測定以及葉酸-羧甲基殼聚糖的制備25-26
• 2.3.3 納米粒子的制備26
• 2.3.4 正交試驗(yàn)26
• 2.3.5 納米粒子的粒徑及穩(wěn)定性26-27
• 2.3.6 納米粒子組成元素分析27
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論27-32
• 2.4.1 CMCS-PAPBA納米粒子的合成27-28
• 2.4.2 正交試驗(yàn)優(yōu)化粒子制備條件28-29
• 2.4.3 納米粒子粒徑與穩(wěn)定性研究29-31
• 2.4.4 納米粒子元素分析31-32
• 2.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)32-33
• 第三章 羧甲基殼聚糖納米粒子的藥物釋放及抗腫瘤效果評價(jià)33-50
• 3.1 前言33
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料與實(shí)驗(yàn)儀器33-35
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料33-34
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器34-35
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法35-38
• 3.3.1 負(fù)載阿霉素的納米粒子的制備35
• 3.3.1.1 鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制35
• 3.3.1.2 負(fù)載阿霉素納米粒子的制備以及載藥量和包封率研究35
• 3.3.2 負(fù)載鹽酸阿霉素的納米粒子體外釋放研究35-36
• 3.3.3 納米粒子的細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)36
• 3.3.4 納米粒子的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)36-37
• 3.3.5 3-D細(xì)胞滲透和毒性實(shí)驗(yàn)37
• 3.3.6 負(fù)載阿霉素的納米粒子體內(nèi)分布37-38
• 3.3.6.1 鹽酸阿霉素?zé)晒鈽?biāo)準(zhǔn)曲線繪制37-38
• 3.3.6.2 鹽酸阿霉素體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)38
• 3.3.7 負(fù)載阿霉素的納米粒子的體內(nèi)抗腫瘤效果38
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論38-48
• 3.4.1 載藥納米粒子的制備及載藥量和載藥效率的研究38-40
• 3.4.2 負(fù)載鹽酸阿霉素的納米粒子體外釋放研究40-41
• 3.4.3 納米粒子的細(xì)胞攝取41-42
• 3.4.4 納米粒子的細(xì)胞毒性42-43
• 3.4.5 3-D細(xì)胞滲透與生長抑制實(shí)驗(yàn)43-45
• 3.4.6 負(fù)載阿霉素的納米粒子的體內(nèi)分布45-46
• 3.4.7 負(fù)載阿霉素的載藥粒子體內(nèi)抗腫瘤效果46-48
• 3.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)48-50
• 第四章 交聯(lián)羧甲基殼聚糖水凝膠的制備50-57
• 4.1 引言50
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料和儀器50-52
• 4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器51-52
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法52-54
• 4.3.1 原酸酯單體的合成52-54
• 4.3.1.1 試劑純化52
• 4.3.1.2 產(chǎn)物a的合成52
• 4.3.1.3 產(chǎn)物OEDg的合成52-53
• 4.3.1.4 產(chǎn)物OEDE的合成53
• 4.3.1.5 產(chǎn)物OEDE的純化53-54
• 4.3.2 羧甲基殼聚糖交聯(lián)凝膠的制備54
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論54-56
• 4.4.1 產(chǎn)物1的產(chǎn)率以及~1H NMR核磁圖譜分析54
• 4.4.2 產(chǎn)物OEDg的產(chǎn)率以及~1H NMR核磁圖譜分析54-55
• 4.4.3 產(chǎn)物OEDE的產(chǎn)率以及~1H NMR核磁圖譜分析55-56
• 4.4.4 羧甲基殼聚糖水凝膠的制備56
• 4.5 實(shí)驗(yàn)小結(jié)56-57
• 第五章 主要結(jié)論與展望57-59
• 5.1 主要結(jié)論57-58
• 5.2 展望58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 朱壽進(jìn);劉法謙;王t煶，

本文編號：999697