本文關(guān)鍵詞：FRET技術(shù)研究PEG-PCL膠束跨MDCK細胞單層轉(zhuǎn)運的完整性

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【摘要】：本文旨在研究聚乙二醇-聚ε-己內(nèi)酯[poly(ethylene glycol)-co-poly(ε-caprolactone),PEG-PCL]膠束跨犬腎極性上皮細胞(madin-darby canine kidney,MDCK)單層轉(zhuǎn)運后的完整性。通過化學(xué)鍵合的方法將異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate isomer I,FITC)連接于PEG-PCL上,制備熒光標(biāo)記的載體材料PEG-PCLFITC,并采用熒光光譜法進行鑒定。采用薄膜水化法制備兩種熒光標(biāo)記的膠束:一種是同時物理包載熒光共振能量轉(zhuǎn)移(F?rster resonance energy transfer,FRET)熒光對3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate(DiO)與1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate(Di I)的膠束(DiO-DiI-M);另一種是含有部分PEG-PCL-FITC載體材料并物理包載Di I的膠束(FITC-DiI-M)。采用動態(tài)光散射法測定膠束的粒徑,熒光光譜法測定膠束在孵育介質(zhì)中的穩(wěn)定性。采用激光共聚焦掃描顯微鏡和FRET技術(shù)研究這兩種熒光標(biāo)記的膠束跨MDCK極性上皮細胞單層的完整性。結(jié)果表明,FITC與PEG-PCL被成功連接。DiO-DiI-M與FITC-DiI-M的粒徑大小一致,均約為30 nm,多分散度良好,且兩種膠束在4 h內(nèi)可在孵育介質(zhì)中以穩(wěn)定形式存在,基本無釋放。通過比較Transwell層和接收層的FRET效率和皮爾森共定位系數(shù)(Person’s coefficient)可知,1 h時,兩種膠束的FRET效率與Person’s系數(shù)在Transwell層和接收層間基本不變,但4 h時,接收層FRET效率與Person’s系數(shù)明顯下降,同時FITC-DiI-M下降的幅度大于DiO-DiI-M,說明1 h時膠束基本保持完整且能以完整形式從極性上皮細胞基底側(cè)排出并被接收室中的細胞攝取,4 h時部分膠束已在與細胞單層相互作用的過程中被破壞,以完整形式跨膜的比例有所下降。
【作者單位】： 北京大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)系;澳門大學(xué)中華醫(yī)藥研究院中藥質(zhì)量研究國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 膠束 完整性 熒光共振能量轉(zhuǎn)移 穿細胞轉(zhuǎn)運
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81473159);國家自然科學(xué)基金-海外及港澳學(xué)者合作研究基金(81528021)
【分類號】：R943
【正文快照】： 能量轉(zhuǎn)移(F?rster resonance energy transfer,FRET)熒光對3,3'-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate(Di O)與1,1'-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetramethylindocarbocyanine perchlorate(Di I)的膠束(Di O-Di I-M);另一種是含有部分PEG-PCL-FITC載體材料并物理包載Di I的膠束(

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1 陳同生;;FRET定量化技術(shù)及其在DHA誘導(dǎo)細胞凋亡分子機理研究中的應(yīng)用[A];廣東省生物物理學(xué)會2013年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

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本文編號：995098