本文關(guān)鍵詞：手性釕（Ⅱ）配合物Λ-OMe靶向抗腫瘤活性及作用機制研究

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【摘要】：目的：端粒酶是影響腫瘤細胞復制增殖的重要標志物,腫瘤的無限增殖與端粒酶激活或端粒維持機制的改變有關(guān)。本文從端粒及端粒酶活性、細胞周期、細胞凋亡方面研究手性釕(Ⅱ)配合物對腫瘤細胞的作用途徑,闡明手性異構(gòu)體對腫瘤細胞的特異性選擇作用,明確其抗腫瘤作用靶點,為開發(fā)抑制端粒酶活性的高效低毒的抗腫瘤藥物提供實驗和理論基礎(chǔ)。方法：1.篩選細胞和手性釕(Ⅱ)配合物。培養(yǎng)細胞,通過MTT法檢測相應(yīng)細胞和藥物。用篩選出的藥敏作用最好的手性釕(Ⅱ)配合物和腫瘤細胞進行下一步檢測。2.端粒及端粒酶活性檢測。通過Western Blott ing法檢測手性釕(Ⅱ)配合物對端粒相關(guān)蛋白Trf1.Trf2的表達；通過TRAP-PCR銀染法檢測手性釕(Ⅱ)配合物對端粒酶活性的影響。3.細胞周期檢測。通過PI單染法檢測手性釕(Ⅱ)配合物對腫瘤細胞周期阻滯的影響；通過RT-PCR檢測其對周期重要調(diào)控因子p21mRNA表達的影響。4.細胞凋亡檢測。通過hoechest33342染色.Tunnel法檢測細胞凋亡的形態(tài)學表現(xiàn)；通過Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測細胞凋亡；通過RT-PCR檢測手性釕(Ⅱ)配合物對細胞凋亡相關(guān)基因Caspase-3、Bcl-2、Bax mRNA表達的影響。結(jié)果：1.MTT檢測：手性釕(Ⅱ)配合物△/∧-[Ru(phen)2p-MopIp]2+(△/∧-OMe)及外消旋體[Ru(phen)2p-MpIp]2+(dl-OMe)對被檢測的腫瘤細胞都有療效,其中手性釕(Ⅱ)配合物∧-OMe對胃癌細胞MGC-803最為敏感�！�-OMe作用MGC-80348小時的IC50為7.4 μ g/ml,且∧-OMe誘導MGC-803細胞死亡有明顯的劑量和時間依賴性。2.端粒及端粒酶活性檢測：手性釕(Ⅱ)配合物∧-OMe能影響端粒相關(guān)蛋白的表達并抑制端粒酶活性,且隨藥物濃度增高,端粒酶活性越小。∧-OMe處理MGC-803細胞48小時后,隨著藥物濃度的增加Trf1的蛋白表達呈現(xiàn)增加的趨勢,Trf2蛋白的表達呈現(xiàn)下降的趨勢；而TRAP-PCR銀染法檢測顯示未加藥物處理組(A條帶)端粒酶條帶最多且顏色最深；陰性對照組(B條帶)條帶最少,顏色最淺；C、D、E條帶分別為5μg/ml,10 μg/ml,20 μ g/ml濃度組,隨著藥物濃度增高,條帶減少,顏色變淺。3.細胞周期檢測：手性釕(Ⅱ)配合物∧-OMe能阻滯細胞周期,且周期阻滯在G0/G1期。加入配合物∧-OMe 24小時后,G0/G1期細胞數(shù)隨著藥物濃度增加比例增高；S期細胞數(shù)隨著藥物濃度增加而降低。周期相關(guān)基因結(jié)果顯示,在同一時間內(nèi),隨藥物濃度增高,p21 mRNA的表達上調(diào),但在24和48小時結(jié)果比較,無明顯的時間依賴性。4.細胞凋亡檢測：手性釕(Ⅱ)配合物人-OMe能促進腫瘤細胞凋亡,且有時間、劑量依賴性。手性釕(Ⅱ)配合物人-OMe處理MGC-803細胞48小時后,未加藥物處理組細胞生長良好,藥物處理組細胞出現(xiàn)細胞數(shù)量減少,核皺縮,核碎裂、凋亡小體等凋亡細胞形態(tài),隨藥物作用時間延長及濃度增高,細胞的凋亡率增高；手性釕(Ⅱ)配合物隨著藥物濃度升高,MGC-803細胞的Bax mRNA/Caspase-3mRNA表達上調(diào),Bcl-2mRNA的表達下調(diào)。結(jié)論：手性釘(Ⅱ)配合物∧-OMe對胃癌細胞MGC-803具有明顯的抗腫瘤作用,其機制主要包括：1.阻滯細胞周期以抑制MGC-803細胞的增殖,周期阻滯在G0/G1期。2.調(diào)節(jié)端粒相關(guān)蛋白,進而抑制端粒酶活性,阻滯端粒延伸,阻礙腫瘤細胞增殖。3.調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達,從而誘導MGC-803細胞凋亡以達到抗腫瘤目的。
【關(guān)鍵詞】：手性釕(Ⅱ)配合物∧-OMe 端粒酶 細胞周期 凋亡
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 引言10-11
• 第一部分 文獻研究11-24
• 第一章 腫瘤治療的現(xiàn)狀研究11-18
• 1 端粒、端粒酶與腫瘤治療的現(xiàn)狀研究11-13
• 2 細胞周期與腫瘤治療的現(xiàn)狀研究13-14
• 3 細胞凋亡與腫瘤治療的現(xiàn)狀研究14-16
• 4 抗腫瘤作用的信號通路研究16-18
• 第二章 手性釕(Ⅱ)配合物與腫瘤的研究18-23
• 1 手性釕(Ⅱ)配合物的結(jié)構(gòu)18
• 2 手性釕(Ⅱ)配合物的抗腫瘤活性研究18-19
• 3 手性釕(Ⅱ)配合物的抗腫瘤機制研究19-23
• 3.1 手性釕(Ⅱ)配合物抗腫瘤作用靶點的研究19-23
• 第三章 本課題的選題意義和研究目23-24
• 第二部分 實驗研究24-50
• 第一章 強效藥物及敏感細胞株篩選實驗24-28
• 1 材料與儀器24-25
• 2 實驗方法25-26
• 3 實驗結(jié)果26-28
• 4 討論28
• 第二章 抑制端粒酶活性實驗28-35
• 1 材料與儀器28-30
• 2 實驗方法30-33
• 3 實驗結(jié)果33-35
• 4 討論35
• 第三章 周期阻滯實驗35-40
• 1 材料與儀器35-36
• 2 實驗方法36-38
• 3 實驗結(jié)果38-39
• 4 討論39-40
• 第四章 細胞凋亡實驗40-50
• 1 材料與儀器40-42
• 2 實驗方法42-43
• 3 實驗結(jié)果43-48
• 4 討論48-50
• 結(jié)語50-52
• 參考文獻52-66
• 附錄66-68
• 研究生就讀期間發(fā)表論文情況68-69
• 致謝69-70
• 統(tǒng)計學審核證明70

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本文編號：987408