本文關(guān)鍵詞：載PMX-53明膠納米微粒的制備及抗炎效果的初步觀察

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【摘要】：背景:牙周炎是以牙周結(jié)締組織破壞和牙槽骨吸收為特點的一種慢性炎癥性疾病,其發(fā)病率高達(dá)80%以上,為成人失牙的主要原因。不僅影響口腔功能,作為糖尿病、動脈粥樣硬化、不良妊娠、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和癌癥等疾病的危險因素,危害全身健康。因此加強牙周炎的防治對全身健康的維護及生命質(zhì)量的提高必將具有重要的意義。在牙周炎的治療過程中,雖然潔治術(shù)、刮治術(shù)及口腔衛(wèi)生指導(dǎo)等基礎(chǔ)治療為牙周炎的主要治療方法,但是局部輔助藥物治療也是牙周炎重要的治療手段之一。目前牙周炎局部治療藥物主要是進口的鹽酸米諾環(huán)素四環(huán)素類廣譜抗菌素,但該藥易產(chǎn)生耐藥性及導(dǎo)致菌群失調(diào)等諸多缺點,其在臨床應(yīng)用中受到了限制。因此,如何開發(fā)和研制一種毒副作用小、具有自主知識產(chǎn)權(quán)的治療牙周炎的局部緩釋藥物將具有重要的臨床意義。PMX-53是一種化學(xué)合成的多肽物質(zhì)。該多肽物質(zhì)模擬補體C5受體的結(jié)構(gòu),是補體C5受體的拮抗劑。牙齦素(gingipains)是牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)產(chǎn)生的主要毒力因子之一,其具有C5轉(zhuǎn)化酶樣的活性,能酶解C5產(chǎn)生大量的C5a,激活C5a-C5a R信號通路,從而引起牙周組織免疫炎癥反應(yīng),導(dǎo)致牙周組織破壞,引發(fā)牙周炎。PMX-53能靶向阻斷C5a-C5a R信號通路,繼而發(fā)揮有效的抗炎作用。研究發(fā)現(xiàn)將PMX-53局部注射于Pg菌感染的小鼠牙周炎動物模型中,其表現(xiàn)出良好的抗炎作用,能明顯減少牙槽骨的破壞。但缺點是藥效維持的時間很短,給藥次數(shù)頻繁,且多點注射給患者帶來痛苦和不便。明膠作為一種天然高分子材料,其具有良好的生物相容性、無毒、無抗原性等優(yōu)點,已成為倍受青睞的藥物載體�；谝陨戏治�,本實驗將PMX-53抗炎藥物與明膠納米微粒進行混合,制成具有良好的抗炎活性及生物安全性的載PMX-53明膠納米微粒,并在體內(nèi)外初步觀察其抗炎效果,為其臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。方法:1.載PMX-53明膠納米微粒的制備采用經(jīng)典的兩步去溶劑法(two step desolvation),制備載PMX-53明膠納米微粒,并進行相關(guān)性能表征;2.載PMX-53明膠納米微粒生物安全性評價取對數(shù)生長期的RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)在無菌96孔板,實驗分為空白對照組,以及不同濃度載藥微粒稀釋液組(0.025%、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%、0.8%),培養(yǎng)24h、48h、72h后,采用MTT法檢測載藥微粒的細(xì)胞毒性。3.載PMX-53明膠納米微�？寡仔Ч捏w外研究體外細(xì)胞實驗選擇小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7,加入牙齦素誘導(dǎo)炎癥,實驗分為4組:陰性對照組、牙齦素組、牙齦素+PMX-53(1μg/ml)組及牙齦素+載藥微粒(4.17 mg/ml)組,其中牙齦素+PMX-53組及牙齦素+載藥微粒治療組的PMX-53量相同,采用ELISA技術(shù),檢測各組促炎因子IL-1β和IL-6表達(dá)情況,初步觀察載藥微粒在體外的抗炎效果。4.載PMX-53明膠納米微粒抗炎效果的體內(nèi)研究選擇24月齡健康雄性巴馬小香豬,選取上下頜第四前磨牙和第一磨牙作為實驗牙。采用局部涂Pg菌(1×109)與不銹鋼絲或絲線結(jié)扎方法構(gòu)建牙周炎動物模型。成功建模后,隨機分為4組。陰性對照組——牙周炎不進行藥物治療,明膠納米微粒治療組,載藥微粒治療組,陽性對照組——派麗奧治療組。觀察載PMX-53明膠納米微粒在體內(nèi)的抗炎效果。結(jié)果:1.制備的載PMX-53明膠納米微粒外觀呈淡黃色,SEM觀察顯示粒子形態(tài)圓整,分散均勻,粒徑大小均勻,直徑為40nm~60nm的載藥微粒占51.24%,載藥量可達(dá)0.24μg/mg,包封率為46.2%,且載PMX-53明膠納米微粒的藥物釋放時間可達(dá)到7d。2.MTT檢測結(jié)果MTT檢測結(jié)果顯示0.025%、0.05%、0.1%、0.2%、0.4%材料浸提液組細(xì)胞毒性均為1級,均在安全范圍內(nèi);0.8%浸提液組隨著細(xì)胞培養(yǎng)天數(shù)的增加,逐漸呈現(xiàn)出低細(xì)胞毒性。3.體外抗炎效果觀察結(jié)果ELISA檢測結(jié)果顯示牙齦素組IL-1β和IL-6的分泌量較陰性對照組增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);牙齦素+PMX-53組和牙齦素+載藥微粒治療組IL-1β和IL-6均較牙齦素組減少(P0.05),但牙齦素+載藥微粒治療組IL-6明顯減少(P0.01)。4.體內(nèi)抗炎效果觀察結(jié)果4.1肉眼觀察建模7周時小型豬實驗牙牙齦充血紅腫明顯,色鮮紅,齦緣厚頓,Bop(+),用藥4周后,各實驗組牙齦紅腫等炎癥均明顯減輕。4.2牙周探診檢查顯示藥物治療4周后所測得的牙周探診深度和牙齦出血指數(shù),與建模第7周的數(shù)據(jù)相比,各組均有顯著改善(P0.01),而載藥微粒治療組改善最為明顯(P0.01)。4.3 X線片顯示,建模7周各實驗組牙槽骨均出現(xiàn)明顯吸收,藥物治療4周后,載PMX-53明膠納米微粒治療組骨密度和高度增加,改善最明顯;派麗奧治療組骨密度與陰性對照組相近,用藥前后變化不明顯。結(jié)論:1.通過兩步去溶劑法成功制備了載PMX-53明膠納米微粒,制備工藝簡單易行;2.制備的載PMX-53明膠納米微粒細(xì)胞毒性低,具有良好的生物相容性;3.在體外細(xì)胞實驗中,載PMX-53明膠納米微粒對促炎因子IL-1β和IL-6有較明顯的抑制作用,表明載PMX-53明膠納米微粒具有較好的抗炎作用;4.成功建立了小型豬牙周炎動物模型,同時在體內(nèi)小型豬牙周炎動物模型中,載PMX-53明膠納米微粒表現(xiàn)出良好的抗炎效果。
【關(guān)鍵詞】：PMX-53 明膠納米微粒 牙周炎 動物模型
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-13
• 英文縮略詞表13-14
• 第1章 緒論14-19
• 1.1 前言14-15
• 1.2 文獻綜述15-19
• 1.2.1 牙周炎15
• 1.2.2 補體與牙周炎15-16
• 1.2.3 C5a-C5aR信號通路與牙周炎16-17
• 1.2.4 C5aR拮抗劑治療牙周炎17-18
• 1.2.5 明膠納米微粒作為藥物載體的優(yōu)點18-19
• 第2章 材料與方法19-24
• 2.1 材料19-20
• 2.1.1 主要材料和試劑19
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備19-20
• 2.1.3 試劑配制20
• 2.2 實驗方法20-24
• 2.2.1 載PMX-53明膠納米微粒的制備與表征20-22
• 2.2.2 載PMX-53明膠納米微粒生物安全性評價22
• 2.2.3 載PMX-53明膠納米微粒的體外抗炎效果觀察22
• 2.2.4 載PMX-53明膠納米微粒的體內(nèi)抗炎效果觀察22-23
• 2.2.5 統(tǒng)計學(xué)分析23-24
• 第3章 實驗結(jié)果24-29
• 3.1 載PMX-53明膠納米微粒的性能表征24-25
• 3.1.1 載PMX-53明膠納米微粒形態(tài)學(xué)觀察24
• 3.1.2 載PMX-53明膠納米微粒的載藥量、包封率24-25
• 3.1.3 載PMX-53明膠納米微粒的體外釋放25
• 3.2 細(xì)胞毒性檢驗結(jié)果25-26
• 3.3 載PMX-53明膠納米微粒體外抗炎效果26
• 3.4 載PMX-53明膠納米微粒體內(nèi)抗炎效果26-29
• 3.4.1 肉眼觀察小型豬牙周炎癥表現(xiàn)26-27
• 3.4.2 牙周探診深度27
• 3.4.3 牙齦出血指數(shù)27-28
• 3.4.4 影像學(xué)觀察28-29
• 第4章 討論29-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 參考文獻32-35
• 作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果35-36
• 致謝36

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1 李娜;載PMX-53明膠納米微粒的制備及抗炎效果的初步觀察[D];吉林大學(xué);2016年

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本文編號：947529