本文關(guān)鍵詞：人MB-MSCs保護表柔比星致卵巢顆粒細胞損傷的實驗研究

  更多相關(guān)文章： 化療損傷性卵巢早衰 月經(jīng)血 子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞 表柔比星

【摘要】：目的:分離培養(yǎng)GCs,探討表柔比星致GCs損傷的機制的研究;分離培養(yǎng)MB-MSCs,并體外擴增、鑒定;應(yīng)用分離培養(yǎng)出的MB-MSCs與表柔比星誘導(dǎo)凋亡的GCs共培養(yǎng),以觀察MB-MSCs對GCs凋亡的保護情況。探討MB-MSCs對表柔比星致GCs損傷的修復(fù)作用,為干細胞治療化療損傷性卵巢早衰提供理論依據(jù)。方法:應(yīng)用密度離心法分別培養(yǎng)GCs、MB-MSCs;應(yīng)用FSHR細胞免疫組織化學(xué)染色鑒定GCs;應(yīng)用流式細胞術(shù)鑒定MB-MSCs的表面標記物;油紅O染色、堿性磷酸酶染色、阿爾辛蘭染色檢測其成脂、成骨、成軟骨能力;采用ELISA檢測分析MB-MSCs的VEGF、IGF-1、HGF分泌水平;為檢測表柔比星對GCs的影響及MB-MSCs是否對表柔比星作用的GCs損傷有修復(fù)作用,實驗分3組,Control組,GCs;G+E組,GCs加0.025 mg/ml表柔比星;G+E+M組,GCs加0.025 mg/ml表柔比星再與MB-MSCs共培養(yǎng)。使用Transwell小室實現(xiàn)G+E+M組GCs與MB-MSCs間共培養(yǎng)。分別干預(yù)48小時后,應(yīng)用倒置顯微鏡觀察GCs形態(tài)學(xué)變化。應(yīng)用流式細胞儀采用Annexion v和7AAD對GCs凋亡率進行檢測。El ISA檢測分析GCs的E2、孕激素、AMH、抑制素A、抑制素B分泌水平。結(jié)果:應(yīng)用密度梯度離心法成功的分離培養(yǎng)GCs、MB-MSCs;FSHR免疫組織化學(xué)染色結(jié)果示GCs胞膜和胞質(zhì)呈棕色著染;流式細胞儀結(jié)果示MB-MSCs高表達CD45、CD31、CD44、CD29、CD105、CD73,不表達CD31、CD45;油紅O染色、堿性磷酸酶染色、阿爾辛蘭染色陽性;MB-MSCs可以分泌VEGF(4.926.938±0.890.475 ng/ml);HGF(122.953±4.377 pg/ml);IGF-1(1.77±0.027ng/ml)這3種抗凋亡因子。表柔比星可引起GCs凋亡,與對照組相比,G+E組濃度為0.025 mg/ml表柔比星作用GCs后,GCs凋亡率由4.58%增加至36.14%,然而在G+B+M組使用濃度為0.025 mg/L表柔比星作用GCs 24h后與MSCs共培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn),GCs凋亡率減少至27.24%,而細胞存活率上升至71.7%。其中早期細胞凋亡率(32.40±7.21%),晚期細胞凋亡率(16.61±8.11%)較Control組(2.18±2.042%)(6.29±0.260%)均明顯增加(P0.05)。ELISA結(jié)果示0.025mg/ml表柔比星作用GCs24h后,GCs分泌的激素E2,孕激素,AMH抑制素A和抑制素B與Control組相比均減少,而與MB-MSCs共培養(yǎng)后,GCs分泌E2、孕激素、AMH、抑制素A、抑制素B激素的水平與Control組相比,明顯增加(P0.05),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:應(yīng)用密度梯度離心法成功地分離培養(yǎng)出GCs、MB-MSCs。表柔比星可誘導(dǎo)GCs凋亡,且MB-MSCs可對化療藥物表柔比星誘導(dǎo)的GCs凋亡可起保護作用。其機制MB-MSCs可能通過分泌抗凋亡因子減少GCs凋亡。
【關(guān)鍵詞】：化療損傷性卵巢早衰 月經(jīng)血 子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞 表柔比星
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-16
• 一、表柔比星致人卵巢顆粒細胞損傷的機制的研究16-33
• 1.1 對象和方法16-22
• 1.1.1 實驗材料16-17
• 1.1.2 實驗方法17-22
• 1.1.3 統(tǒng)計學(xué)處理22
• 1.2 結(jié)果22-28
• 1.2.1 卵巢顆粒細胞的分離與鑒定22-23
• 1.2.2 表柔比星濃度的確定23-25
• 1.2.3 卵巢顆粒細胞凋亡的測定結(jié)果25-27
• 1.2.4 表柔比星處理后卵巢顆粒細胞激素的測定結(jié)果27-28
• 1.3 討論28-32
• 1.3.1 蒽環(huán)類抗生素的應(yīng)用28-29
• 1.3.2 蒽環(huán)類抗生素對卵巢功能的損傷29
• 1.3.3 蒽環(huán)類抗生素致卵巢功能損傷的機制29
• 1.3.4 表柔比星致卵巢顆粒細胞損傷機制的研究29-31
• 1.3.5 卵巢早衰儲備功能的評價31-32
• 1.4 小結(jié)32-33
• 二、經(jīng)血源性子宮內(nèi)膜間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)與鑒定33-51
• 2.1 對象和方法33-42
• 2.1.1 實驗材料33-35
• 2.1.2 實驗方法35-42
• 2.2 結(jié)果42-47
• 2.2.1 MB-MSCs的分離與培養(yǎng)42-43
• 2.2.2 MB-MSCs細胞表面標記物的檢測43-44
• 2.2.3 MB-MSCs的分化功能44-46
• 2.2.4 MB-MSCs的分泌功能46
• 2.2.5 MB-MSCs的增殖能力46-47
• 2.3 討論47-50
• 2.3.1 干細胞的分類47-48
• 2.3.2 MB-MSCs的分離、培養(yǎng)與鑒定48-49
• 2.3.3 MB-MSCs的增殖及分泌能力49-50
• 2.4 小結(jié)50-51
• 三、經(jīng)血源性間充質(zhì)干細胞保護卵巢顆粒細胞的體外研究51-62
• 3.1 對象和方法51-55
• 3.1.1 實驗材料51-52
• 3.1.2 實驗方法52-54
• 3.1.3 統(tǒng)計學(xué)處理54-55
• 3.2 結(jié)果55-58
• 3.2.1 卵巢顆粒細胞形態(tài)學(xué)變化55
• 3.2.2 卵巢顆粒細胞凋亡的測定結(jié)果55-57
• 3.2.3 卵巢顆粒細胞分泌激素的測定結(jié)果57-58
• 3.3 討論58-61
• 3.3.1 干細胞治療疾病的應(yīng)用58-59
• 3.3.2 MB-MSCs對表柔比星致卵巢功能損傷的保護作用59-61
• 3.4 小結(jié)61-62
• 結(jié)論62-63
• 參考文獻63-70
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明70-71
• 綜述71-85
• 綜述參考文獻81-85
• 致謝85-86
• 個人簡歷86

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 宋阿霞;楊棟林;魏嘉t，

本文編號：910871