本文關(guān)鍵詞：人體血漿中miR-148a表達(dá)水平與氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)的相關(guān)性研究

  更多相關(guān)文章： miR-148a 表達(dá)水平 氟伐他汀 藥代動(dòng)力學(xué) PXR OATP1B1

【摘要】：背景:微小RNA(miRNA)是一類(lèi)內(nèi)源性非編碼單鏈RNA,約20~24nt,普遍存在于真核生物中。miRNA通過(guò)參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控,不僅在細(xì)胞分化、增殖、代謝和凋亡等生理病理過(guò)程,而且在藥物轉(zhuǎn)運(yùn)代謝的調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。有研究已表明miR-148a可與核受體PXR 3’-UTR的miR-148a識(shí)別元件(PXR-MRE-148a)結(jié)合,進(jìn)而抑制PXR mRNA的翻譯,使得PXR蛋白水平降低,其下游CYP3A4表達(dá)量隨之減少;證明miRNA可通過(guò)對(duì)靶基因mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,引起PXR的翻譯抑制,最終減少其下游靶蛋白的表達(dá)。本課題組前期研究也發(fā)現(xiàn),同樣作為PXR下游靶基因的OATP1B1的活性隨著PXR表達(dá)的增加而升高且PXR的表達(dá)量受miR-148a轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的影響,即miR-148a確能夠基于PXR介導(dǎo)調(diào)控OATP1B1的表達(dá)。那么國(guó)人血漿中miR-148a的分布是否存在差異?若有,此種差異與OATP1B1底物氟伐他汀體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程是否有關(guān)聯(lián)?確值得我們深入研究,以期為他汀類(lèi)藥物顯著的個(gè)體差異提供新的理論依據(jù)。目的:1.探明人血漿中miR-148a的分布情況;2.探明人血漿中miR-148a的表達(dá)水平與氟伐他汀主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)之間的關(guān)聯(lián),以期揭示miR-148a對(duì)人體內(nèi)氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)的確切影響。方法:1.建立人血漿中miR-148a表達(dá)水平的RT-qPCR檢測(cè)方法;2.按臨床試驗(yàn)方案,招募健康受試者、采集血漿樣本并以RT-qPCR測(cè)定miR-148a的表達(dá)水平;以Shapiro-Wilk test對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn),按血漿中miR-148a表達(dá)水平進(jìn)行四分位數(shù)分組,考察組間差異,探明人血漿中miR-148a的分布情況;3.建立人血漿中氟伐他汀LC-MS/MS檢測(cè)方法;4.篩選血漿中miR-148a高表達(dá)(△Ct值小于第一四分位數(shù))和低表達(dá)(△Ct值大于第三四分位數(shù))的受試者各8人入組氟伐他汀人體藥代動(dòng)力學(xué)研究;單劑量口服給藥氟伐他汀40mg,LC-MS/MS法測(cè)定不同時(shí)刻(0,0.25,0.5,0.75,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12h)血藥濃度并繪制藥-時(shí)曲線;采用das2.1求算主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)(auc0-12、auc0-∞、cmax、tmax、cl、vd、t1/2),比較mir-148a高、低表達(dá)組間氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)特征的差異,揭示人血漿中mir-148a的表達(dá)水平與氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)的相關(guān)性。5.數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析:實(shí)驗(yàn)組的數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±sd)表示,采用spss13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),p0.05的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.建立了穩(wěn)定的血漿中mir-148a表達(dá)水平的測(cè)定方法:同一樣本批內(nèi)重復(fù)性檢驗(yàn)結(jié)果分別為9.51±0.11、8.85±0.24和0.74±0.07;批間重復(fù)性檢驗(yàn)結(jié)果分別是9.90±0.51,8.90±0.91和0.79±0.10,rsd在±15%以內(nèi),符合要求。2.shapiro-wilk檢驗(yàn)得statistic=0.98,sig=0.17,p0.05,即77例健康受試者血漿中mir-148a表達(dá)水平呈正態(tài)分布;按四分位數(shù)分組,各組mir-148a表達(dá)水平分別是1.34±0.78,3.70±0.77,5.69±0.66和8.33±1.27,dunnett’st3法檢驗(yàn)顯示各組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01),提示人體血漿中mir-148a的表達(dá)水平存在差異。3.建立了血漿中氟伐他汀lc-ms/ms檢測(cè)方法:標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.0320x+0.0066(r=0.9960),線性范圍為0.5-500ng·ml-1,定量下限為0.5ng·ml-1;低、中、高三種濃度(1.2,50,400ng·ml-1)的氟伐他汀批內(nèi)精密度分別是1.17±0.16、49.08±3.68和420.63±17.93ng·ml-1,批間精密度分別為1.12±0.15,48.76±3.91和411.24±15.23ng·ml-1,rsd均符合要求(高濃度在±15%以內(nèi),低濃度在±20%以內(nèi));提取回收率分別為81.40±7.14,75.38±4.48,74.73±1.86,都在66%以上;介質(zhì)效應(yīng)及其穩(wěn)定性考察均與生物樣本的測(cè)定要求一致。4.篩選出的高、低表達(dá)組中mir-148a表達(dá)水平分別為0.51±0.38和8.13±0.85,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01);das2.1求算出mir-148a高、低表達(dá)組的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并比較:auc0-12分別775.61±136.59、520.53±122.11ng·h·ml-1,高表達(dá)組明顯高于低表達(dá)組,p0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;auc0-∞分別為779.88±137.90、524.43±121.64ng·h·ml-1,高表達(dá)組明顯高于低表達(dá)組,p0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;cmax分別為727.56±150.61、457.86±103.56ng·ml-1,高表達(dá)組明顯高于低表達(dá)組,p0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;vd分別為185.29±70.06、317.12±93.08 L,高表達(dá)組明顯低于低表達(dá)組,P0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;CL分別為52.81±9.92、79.48±16.25 L·h-1,高表達(dá)組明顯低于低表達(dá)組,P0.01,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Tmax分別為0.47±0.21、0.5±0.13 h,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;t1/2分別為2.55±1.13、2.75±0.65 h,P0.05,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.miR-148a在人血漿中的表達(dá)呈正態(tài)分布,且存在較大的個(gè)體間差異。2.人血漿中miR-148a的表達(dá)水平與氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程確有相關(guān)性,miR-148a高表達(dá)組的AUC0-12、AUC0-∞、Cmax明顯高于低表達(dá)組,而CL、Vd低于低表達(dá)組,而Tmax、t1/2未見(jiàn)明顯差異。提示miR-148a有可能成為影響氟伐他汀體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)過(guò)程和調(diào)脂療效的另一關(guān)鍵因子。
【關(guān)鍵詞】：miR-148a 表達(dá)水平 氟伐他汀 藥代動(dòng)力學(xué) PXR OATP1B1
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R969
【目錄】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-14
• 第1章 引言14-17
• 第2章 miR-148a在健康受試者血漿中的分布研究17-29
• 2.1 材料17-18
• 2.1.1 人血漿樣品17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要儀器設(shè)備18
• 2.2 方法18-23
• 2.2.1 建立人血漿中miR-148a表達(dá)水平的測(cè)定方法18-22
• 2.2.2 健康受試者的招募22-23
• 2.2.3 健康受試者血漿中miR-148a表達(dá)水平的測(cè)定23
• 2.2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析23
• 2.3 結(jié)果23-27
• 2.3.1 人血漿中miR-148a測(cè)定方法的評(píng)價(jià)23-26
• 2.3.2 健康受試者血漿中miR-148a表達(dá)水的分布情況26-27
• 2.4 討論27-29
• 第3章 健康受試者血漿中miR-148a與氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)的相關(guān)性研究29-48
• 3.1 材料29-30
• 3.1.1 主要藥品29
• 3.1.2 主要試劑29
• 3.1.3 主要儀器設(shè)備29-30
• 3.2 方法30-33
• 3.2.1 建立人血漿中氟伐他汀LC-MS/MS檢測(cè)方法30-32
• 3.2.2 血漿中miR-148a高、低表達(dá)組受試者的篩選32-33
• 3.2.3 氟伐他汀藥代動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)給藥方案33
• 3.2.4 血樣的采集及處理33
• 3.2.5 臨床觀察33
• 3.2.6 血漿樣品的測(cè)定33
• 3.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析33
• 3.3 結(jié)果33-46
• 3.3.1 氟伐他汀LC-MS/MS方法學(xué)評(píng)價(jià)33-40
• 3.3.2 血漿中miR-148a高、低表達(dá)組受試者的篩選結(jié)果40-42
• 3.3.3 miR-148a高、低表達(dá)組受試者血漿中氟伐他汀的測(cè)定結(jié)果42-44
• 3.3.4 miR-148a高、低表達(dá)組受試者氟伐他汀的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)44-46
• 3.4 討論46-48
• 第4章 結(jié)論與展望48-49
• 4.1 結(jié)論48
• 4.2 展望48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果54-55
• 綜述55-65
• 參考文獻(xiàn)61-65

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