本文關(guān)鍵詞：化合物H057鎮(zhèn)靜催眠作用機(jī)制研究

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【摘要】：本科室與北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所藥化室張純貞研究員課題組合作,從一系列哌嗪類化合物中定向篩選出化合物H057,其結(jié)構(gòu)新穎且具有較強的鎮(zhèn)靜催眠作用。本論文旨在對H057的鎮(zhèn)靜催眠作用進(jìn)行藥效學(xué)評價,并對其機(jī)制進(jìn)行初步探索。腹腔注射H057(≥5mg/kg)5min后,即可觀察到小鼠出現(xiàn)明顯的鎮(zhèn)靜現(xiàn)象。給藥15 min后,利用開場實驗測定小鼠自主活動。結(jié)果表明,H057(5和25 mg/kg, i.p.)能顯著抑制小鼠的自主活動,抑制率分別為25%和66%。腹腔注射H057(≥60mg/kg)能直接誘導(dǎo)100%小鼠翻正反射消失,60 mg/kg和80 mg/kg組小鼠睡眠潛伏期分別為(24±11)min和(20±7)min,睡眠時間分別為(96±±15)min和(124+64)min。協(xié)同閾下劑量戊巴比妥鈉實驗結(jié)果顯示,H057能顯著增加閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠的入睡率,5 mg/kg和25 mg/kg組小鼠的入睡率分別增加為87.5%和100%。同時,直接經(jīng)側(cè)腦室給予H057 (20 μg,1 min/只),也能引起小鼠翻正反射消失,顯示H057能夠以原型起效。以上實驗結(jié)果表明H057具有顯著的鎮(zhèn)靜催眠作用。通過懸掛實驗測試H057對小鼠肌張力的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn)給藥40 min后,溶劑對照組小鼠全部能懸掛于繩上超過1 min,10 mg/kg和20mg/kg組小鼠只有1/2能懸掛于繩上超過1 min。測定給予H057前后不同時間點小鼠的肛溫,結(jié)果顯示H057(5和10 mg/kg, i.p.)能分別引起小鼠體溫下降0.9℃和1.8℃。攝食實驗結(jié)果顯示,H057 (25 mg/kg, i.p.)給藥16小時內(nèi)對小鼠攝食的抑制率為26%。通過合并給予GABAA受體拮抗劑荷包牡丹堿,測定小鼠自主活動以檢測荷包牡丹堿對H057鎮(zhèn)靜作用的影響。實驗結(jié)果表明,荷包牡丹堿不能拮抗H057對小鼠自主活動的抑制作用。利用印防己毒素、戊四唑和NMDA誘導(dǎo)小鼠致驚厥模型,來評價H057對小鼠驚厥潛伏期的影響。實驗結(jié)果顯示,H057 (20 mg/kg, i.p.)對印防己毒素和NMDA誘導(dǎo)小鼠驚厥的潛伏期有顯著延長作用,驚厥潛伏期分別延長51%和500%。采用高效液相-電化學(xué)檢測法測定H057對小鼠大腦皮層、紋狀體、下丘腦和海馬腦勻漿中抑制性氨基酸GABA含量的影響。結(jié)果表明,H057對不同腦區(qū)腦勻漿中GABA含量無顯著影響。應(yīng)用微透析技術(shù)在體動態(tài)監(jiān)測H057對大鼠大腦皮層細(xì)胞外液GABA含量的影響。實驗結(jié)果顯示H057能顯著升高大腦皮層細(xì)胞外液GABA水平,給藥后10min升高26%。采用離體孵育腦片的方法測定H057對小鼠大腦皮層和下丘腦細(xì)胞外液GABA含量的影響。結(jié)果顯示H057 (10-5moL/L)能顯著升高下丘腦和大腦皮層細(xì)胞外液GABA水平,分別升高了160%和130%。前期研究發(fā)現(xiàn)H057能顯著抑制小鼠的攝食,因此,我們推測H057發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用可能跟Orexin能神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)。通過評價側(cè)腦室注射Orexin受體激動劑Orexin A對H057 (80 mg/kg, i.p.)誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響,我們發(fā)現(xiàn)側(cè)腦室注射Orexin A (0.10、0.15和0.20 nmol, i.c.v..)能劑量依賴性的縮短H057誘導(dǎo)小鼠的睡眠持續(xù)時間,各劑量組的縮短率為37%、55%和95%。同時,我們發(fā)現(xiàn)H057 (80mg/kg, i.p.)不能引起預(yù)先側(cè)腦室注射Orexin A的小鼠翻正反射消失。以上兩個實驗結(jié)果提示H057可能是Orexin受體的拮抗劑。Orexin主要通過激活單胺能神經(jīng)系統(tǒng)來促進(jìn)覺醒。采用高效液相-電化學(xué)檢測法測定H057對小鼠大腦皮層、紋狀體、下丘腦和海馬腦勻漿中單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。結(jié)果表明,H057能顯著降低小鼠紋狀體內(nèi)DA和下丘腦內(nèi)NE的含量,分別降低了43%和28%。應(yīng)用微透析技術(shù)在體實時動態(tài)監(jiān)測H057對大鼠大腦皮層細(xì)胞外液單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。結(jié)果顯示H057能顯著降低大鼠大腦皮層細(xì)胞外液的NE和5-HT水平,分別降低38%和50%。采用離體孵育腦片的方法測定H057對小鼠大腦皮層和下丘腦細(xì)胞外液單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響。實驗結(jié)果表明H057(10"5 moL/L)能降低兩個腦區(qū)的DA和5-HT水平,大腦皮層分別降低80%和64%,下丘腦分別降低79%和66%。我們利用熒光假神經(jīng)遞質(zhì)FFN102標(biāo)記DA神經(jīng)元來測定H057是否對單胺囊泡轉(zhuǎn)運體2 (VMAT2)有抑制作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)H057能顯著性降低FFN102的熒光強度,推測H057對VAMT2可能有抑制作用。以上結(jié)果提示,化合物H057發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用的可能通路為：1)H057能夠拮抗Orexin受體,阻斷Orexin神經(jīng)元對單胺神經(jīng)的激活,降低單胺神經(jīng)遞質(zhì)水平；2)Orexin能神經(jīng)系統(tǒng)對單胺能神經(jīng)系統(tǒng)的抑制使GABA能神經(jīng)系統(tǒng)間接激活,增加了細(xì)胞外液的GABA含量；3)H057能夠抑制VMAT2的活性,破壞DA的儲存,降低DA的水平。
【關(guān)鍵詞】：鎮(zhèn)靜催眠 H057 自主活動 高效液相-電化學(xué) 微透析 γ氨基丁酸 單胺類神經(jīng)遞質(zhì) 囊泡單胺轉(zhuǎn)運體2
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮略詞表(ABBREVIATION)10-12
• 前言12-20
• 實驗材料與方法20-30
• 實驗結(jié)果30-51
• 一、化合物H057鎮(zhèn)靜催眠作用藥效學(xué)評價30-37
• 1. 化合物H057對小鼠自主活動的影響30-31
• 2. 化合物H057直接誘導(dǎo)小鼠翻正反射消失31-32
• 3. 化合物H057能增加閾下劑量戊巴比妥鈉誘導(dǎo)小鼠入睡率的影響32
• 4. 側(cè)腦室注射化合物H057直接誘導(dǎo)小鼠睡眠32-33
• 5. 化合物H057對小鼠肌張力的影響33
• 6. 化合物H057對小鼠體溫的影響33-35
• 7. 化合物H057對小鼠攝食的影響35-36
• 小結(jié)一36-37
• 二、化合物H057對腦內(nèi)GABA能神經(jīng)系統(tǒng)的影響37-43
• 1. GABA_A受體拮抗劑荷包牡丹堿對化合物H057鎮(zhèn)靜作用的影響37-38
• 2. 化合物H057對致驚劑誘導(dǎo)小鼠驚厥的保護(hù)作用38-39
• 3. 化合物H057對不同腦區(qū)GABA含量的影響39-40
• 4. 在體條件下，化合物H057對大鼠大腦皮層細(xì)胞外液GABA含量的影響40-41
• 5. 離體條件下，化合物H057對小鼠下丘腦和大腦皮層細(xì)胞外液GABA含量影響41-42
• 小結(jié)二42-43
• 三、化合物H057對腦內(nèi)Orexin能神經(jīng)系統(tǒng)的影響43-51
• 1. Orexin受體激動劑Orexin A對H057誘導(dǎo)小鼠睡眠時間的影響43-44
• 2. 化合物H057對小鼠離體腦勻漿中單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響44-45
• 3. 在體條件下，，化合物H057對大鼠大腦皮層細(xì)胞外液單胺神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響45-46
• 4. 離體條件下，化合物H057對小鼠下丘腦和大腦皮層細(xì)胞外液單胺含量的影響46-47
• 5. 化合物H057對紋狀體和大腦皮層單胺氧化酶活性的影響47
• 6. 化合物H057能抑制單胺囊泡轉(zhuǎn)運體2(VMA17)的活性47-50
• 小結(jié)三50-51
• 討論51-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-63
• 綜述63-71
• 參考文獻(xiàn)68-71
• 致謝71-73
• 個人簡歷73-74

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