本文關(guān)鍵詞：麥角菌Cp-1菌株遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立

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【摘要】：麥角菌Cp-1菌株是本實(shí)驗(yàn)室篩選獲得的工業(yè)生產(chǎn)菌株,能產(chǎn)生多種麥角生物堿。為了實(shí)現(xiàn)該菌株定向生物合成某種特定的藥用麥角堿,遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立不可或缺,但由于麥角菌本身存在遺傳異質(zhì)性,現(xiàn)有的遺傳轉(zhuǎn)化體系不能滿足Cp-1菌株的需要。本文研究了菌絲體濃度、溶壁酶濃度和酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體形成的影響,并考察了該菌株對(duì)不同抗生素的敏感性,以期建立其遺傳轉(zhuǎn)化體系。結(jié)果表明,使用1%溶壁酶(5 mL)25℃酶解菌絲體(1g)2 h后,即可產(chǎn)生大量的原生質(zhì)體。在PEG的介導(dǎo)下,以1.5 mg·mL~(-1)的潮霉素B為篩選標(biāo)記,轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pAN7-1于原生質(zhì)體,可獲得大量轉(zhuǎn)化子,PCR診斷證明外源基因已成功地整合到Cp-1菌株的基因組上。本研究為進(jìn)一步改良Cp-1生產(chǎn)菌株奠定了重要的基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥物研究所天然藥物活性物質(zhì)與功能國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室&國家衛(wèi)生計(jì)生委天然藥物生物合成重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 麥角菌 麥角生物堿 原生質(zhì)體制備 遺傳轉(zhuǎn)化
【基金】：藥物研究所基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)(2015CX07)
【分類號(hào)】：R915
【正文快照】： 麥角菌(Claviceps)能夠產(chǎn)生多種天然的、具有藥用活性的麥角生物堿(ergot alkaloid),具有廣泛的臨床用途[1]。很多天然或者半合成的麥角生物堿在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中普遍使用,如麥角新堿用于催產(chǎn)和治療產(chǎn)后出血;麥角胺及其衍生物用于治療偏頭痛、產(chǎn)后止血;麥角毒堿類用于治療高泌乳素血

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10 郭e，

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