發(fā)布時間：2017-09-01 07:40

  本文關(guān)鍵詞：喜樹CMCs和DDCs體系對香豆素類成分的生物轉(zhuǎn)化

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【摘要】：喜樹(Camptotheca acuminate Decne.)是藍(lán)果樹科(Nyssaceae)喜樹屬(Camptotheca)植物。本實(shí)驗(yàn)室以喜樹的幼莖和嫩葉作為外植體分別誘導(dǎo)出形成層分生組織(Cambial meristematic cells,CMCs)和愈傷組織(Dedifferentiated plant cells,DDCs)。DDCs是經(jīng)細(xì)胞脫分化所形成的細(xì)胞系,而CMCs則是具有持續(xù)性分裂能力的未脫分化的細(xì)胞系。本文考察了喜樹CMCs懸浮培養(yǎng)體系和DDCs懸浮培養(yǎng)體系的顯微鏡特性差異、對γ射線及類輻射藥物的敏感度差異,進(jìn)一步確定了誘導(dǎo)所得喜樹CMCs具有植物干細(xì)胞的特性。喜樹堿(Camptothecin,CPT)和10-羥基喜樹堿(10-Hydroxycamptothecin,10-OH-CPT)是喜樹中的有效成分,它們的合成途徑涉及到很多酶和基因。本文對喜樹CMCs和DDCs中4個關(guān)鍵酶:色氨酸脫羧酶(tryptophan decarboxylase,TDC)、異胡豆苷合成酶(strictosidine synthase,STR)、色氨酸合成酶(tryptophan synthetase,TSB)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylgutaryl-coenzyme A reductase,HMGR)的相關(guān)基因tdc1、tdc2、str、tsb、hmg2、hmg3的表達(dá)量進(jìn)行了對比,結(jié)果發(fā)現(xiàn)喜樹CMCs2中tdc2、str基因的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于CMCs1和DDCs中的表達(dá)量。香豆素是存在于自然界中具有抗腫瘤、抗真菌以及抗凝血作用的一類化合物。然而,香豆素類衍生物水溶性低且毒性大,限制了其臨床應(yīng)用。本文以Pechmann法合成4個甲基取代的香豆素:4,8-二甲基-7-羥基香豆素(I)、4,7-二甲基-6-羥基香豆素(II)、4-甲基-6,7-二羥基香豆素(III)和4,7-二甲基-5-羥基香豆素(IV),并首次利用喜樹DDCs體系和CMCs體系對這4個香豆素進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化,以期得到其高效低毒的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)中,經(jīng)分離純化得到4個轉(zhuǎn)化產(chǎn)物,分別為4,8-二甲基香豆素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ia)、4,7-二甲基香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IIa)、4-甲基-6-羥基-7-甲氧基香豆素(IIIa)和4,7-二甲基香豆素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IVa),其中Ia、IIa和IVa為新化合物。本文還考察了4個底物的最佳投底量、最佳共培養(yǎng)時間;檢測了底物和轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的單胺氧化酶(monoamine,MAO)抑制活性。
【關(guān)鍵詞】：CMCs DDCs 喜樹 香豆素 生物轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R91
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 第一章 前言9-26
• 1.1 喜樹堿(CPT)生物合成途徑以及相關(guān)的酶和基因9-11
• 1.1.1 喜樹堿9
• 1.1.2 喜樹堿的生物合成途徑9-10
• 1.1.3 相關(guān)的酶和基因10-11
• 1.2 植物分生組織11-12
• 1.2.1 植物分生組織概述11
• 1.2.2 植物分生組織特征11-12
• 1.2.3 植物分生組織研究進(jìn)展12
• 1.2.4 植物分生組織研究意義12
• 1.3 香豆素簡介12-19
• 1.3.1 香豆素的生物活性12-16
• 1.3.2 香豆素的應(yīng)用16-17
• 1.3.3 香豆素苷的應(yīng)用17-18
• 1.3.4 香豆素苷的制備18-19
• 1.4 生物轉(zhuǎn)化簡介19-24
• 1.4.1 生物轉(zhuǎn)化系統(tǒng)19-21
• 1.4.2 生物轉(zhuǎn)化的反應(yīng)類型21-24
• 1.4.3 生物轉(zhuǎn)化技術(shù)的應(yīng)用24
• 1.5 本研究的目的和意義24-26
• 第二章 喜樹CMCs特性驗(yàn)證26-36
• 2.1 材料與儀器26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料26
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑26
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器26
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法26-27
• 2.2.1 細(xì)胞形態(tài)26-27
• 2.2.2 抗輻射實(shí)驗(yàn)27
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-34
• 2.3.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)驗(yàn)證27-28
• 2.3.2 細(xì)胞輻射死亡率驗(yàn)證28-34
• 2.4 小結(jié)34-36
• 第三章 喜樹堿生物合成相關(guān)酶的基因表達(dá)36-42
• 3.1 材料與儀器36
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑36
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器36
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法36-39
• 3.2.1 Real time PCR檢測mRNA的表達(dá)變化37-38
• 3.2.2 喜樹堿(CPT)和 10-羥基喜樹堿(HCPT)含量的測定38-39
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-41
• 3.3.1 喜樹CMCs體系和DDCs體系中相關(guān)酶的表達(dá)量39-40
• 3.3.2 喜樹堿(CPT)和 10-羥基喜樹堿(HCPT)的含量40-41
• 3.4 小結(jié)41-42
• 第四章 喜樹CMCs和DDCs對香豆素的生物轉(zhuǎn)化42-75
• 4.1 材料與儀器42
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑42
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器42
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法42-49
• 4.2.1 生物轉(zhuǎn)化底物的制備42-47
• 4.2.2 轉(zhuǎn)化體系培養(yǎng)47
• 4.2.3 生物轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)47-49
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果49-74
• 4.3.1 底物(I)生物轉(zhuǎn)化結(jié)果49-55
• 4.3.2 底物(II)生物轉(zhuǎn)化結(jié)果55-62
• 4.3.3 底物(III)生物轉(zhuǎn)化結(jié)果62-68
• 4.3.4 底物(IV)生物轉(zhuǎn)化結(jié)果68-74
• 4.4 小結(jié)74-75
• 第五章 單胺轉(zhuǎn)化酶(MAO)抑制活性的測定75-78
• 5.1 材料與儀器75
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料75
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑75
• 5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器75
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法75-76
• 5.2.1 單胺氧化酶的制備75
• 5.2.2 MAO蛋白質(zhì)含量測定75-76
• 5.2.3 MAO活性的測定76
• 5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果76-77
• 5.3.1 MAO蛋白質(zhì)含量測定76
• 5.3.2 MAO活性的測定76-77
• 5.4 小結(jié)77-78
• 第六章 結(jié)論與展望78-79
• 參考文獻(xiàn)79-90
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文90-91
• 附錄 化合物圖譜91-99
• 致謝99

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 王華磊;趙致;唐平;劉紅昌;李金玲;羅春麗;;喜樹種子適宜采收期研究[J];中國現(xiàn)代中藥;2011年08期

2 李s，

本文編號：770812