本文關(guān)鍵詞：環(huán)孢素誘導(dǎo)肝損傷患者血清脂質(zhì)組學(xué)研究

  更多相關(guān)文章： 環(huán)孢素 藥物性肝損傷 脂質(zhì)組學(xué) GC-MS HPLC-MS/MS

【摘要】：目的：1.建立適用于人血清脂質(zhì)組學(xué)研究的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)方法。2.使用GC-MS法和LC-MS/MS法分別對環(huán)孢素誘導(dǎo)藥物性肝損傷組(CILI組)和正常對照組(non-CILI組)的血清樣本進行檢測。3.采用NIST11和HMDB數(shù)據(jù)庫對上述質(zhì)譜圖進行檢索比對,鑒定血清中的脂質(zhì),以脂質(zhì)/內(nèi)標峰面積比作為相對定量指標。4.使用多維數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法,進行組間判別模型的建立,尋找兩組間差異性代謝脂質(zhì)。通過使用Metabo Anlayst和KEGG進行在線分析,探索CILI的潛在生物標記物和相關(guān)代謝通路,以期對疾病的發(fā)病機制有進一步了解并實現(xiàn)其早期診斷和及時治療。方法：1.樣本使用正己烷提取,氮氣吹干后復(fù)溶,選擇VF-WAXms毛細管色譜柱(0.25mm×30m×0.25μm)在Agilent 7890A-5975C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行測定。載氣(高純氦氣)壓力為20 psi；程序升溫：70℃,保持1min;以20℃/min升溫至180℃；然后以6℃/min升溫至230℃,保持20min。進樣量：1μL,分流比：50：1。質(zhì)譜進樣口溫度：250℃；接口溫度：270℃；離子源溫度：230℃；電離電壓：70 eV；四極桿溫度：150℃；載氣：高純氦氣,1.0 mL/min;選擇全掃描模式,30-450m/z。2.樣本使用二氯甲烷-甲醇-水三相(v/v/v=1：2：1)提取,氮氣吹干后復(fù)溶,選擇JADE-PAK二醇基色譜柱(250 mm×4.6 mm×5μm)在Agilent 1200-6410液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀進行測定。流動相A：20%異丙醇-20mM甲酸銨,流動相B：20%異丙醇-80%乙腈。流速為0.3mL/min,梯度洗脫：0-2 min,92%B; 2-6 min, 86%B; 6-12 min,80%B; 12-18 min,75%B; 18-24min,65%B; 24-30min, 92%B; 31-45 min,92%B。在線脫氣；柱溫30℃；進樣量20μL。離子源為ESI,選用正離子模式檢測；干燥氣(N2)流速為10.0 L/min,干燥氣壓力為40 psi,干燥氣溫度為325℃,毛細管電壓為4000V。選擇全掃描模式(SCAN), m/z范圍：200-1300。3. GC-MS圖譜使用MSD化學(xué)工作站軟件自帶的NIST11數(shù)據(jù)庫進行自動檢索匹配,定義相似度大于80%且保留時間漂移小于0.5min的組分為可靠結(jié)果。HPLC-MS/MS圖譜的解析采用HMDB數(shù)據(jù)庫進行精確分子量檢索,定義質(zhì)量數(shù)差異小于0.5 Da且保留時間漂移小于0.5min的組分為可靠結(jié)果。4.使用內(nèi)標峰面積校正GC-MS和HPLC-MS/MS峰面積數(shù)據(jù),進行多維數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析,包括主成分分析(PCA)、偏最小二乘判別分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)。通過PCA法對數(shù)據(jù)整體進行降維處理,實現(xiàn)組間分離。通過獨立監(jiān)督判別模型PLS-DA,進行組件判別,尋找差異性代謝脂質(zhì)。最后建立雙獨立監(jiān)督的OPLS-DA模型,排除其他干擾因素,選擇VIP值1且曼-惠特尼U檢驗中P值0.05的組分,定義為兩組間的差異性代謝脂質(zhì)。使用LIPDMAPS數(shù)據(jù)庫對差異性脂質(zhì)進行進一步結(jié)構(gòu)鑒定。導(dǎo)入Metabo Analyst網(wǎng)站進行代謝通路分析,定義得分大于0.01的為CILI相關(guān)代謝通路。結(jié)合差異性代謝物和相關(guān)通路對CILI的作用機制和潛在生物標記物進行分析探討。結(jié)果：本課題共入組103個受試者,根據(jù)CIOMS標準分為CILI組(n=43)和non-CILI組(n=60)。通過建立人血清的GC-MS和HPLC-MS/MS檢測方法,對血清中的脂質(zhì)進行了分析,該方法分離度和重現(xiàn)性良好,適用于脂質(zhì)組學(xué)的研究。通過檢索比對并限定保留時間漂移后,能夠?qū)?5種脂質(zhì)代謝物進行檢測。其中14種由GC-MS圖譜分析獲得,61種由HPLC-MS/MS圖譜分析獲得。樣本數(shù)據(jù)使用PCA、PLS-DA和OPLS-DA模型進行多元數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。選擇VIP值1且P值0.05的脂質(zhì)組分,最終確定23種脂質(zhì),包括5種脂肪酸(FA)、8種磷脂酰膽堿(PC)、3種磷脂酰乙醇胺(PE)和6種鞘磷脂(SM)和1種膽固醇酯,為CILI組與non-CILI組的差異性脂質(zhì)。導(dǎo)入Metabo Analyst網(wǎng)站進行通路分析,獲得4條相關(guān)代謝通路：甘油磷脂代謝、花生四烯酸代謝、脂肪酸代謝和鞘脂代謝,相關(guān)性得分分別為0.23,0.22,0.05和0.03。結(jié)論：本課題通過建立人血清脂質(zhì)組學(xué)的GC-MS和HPLC-MS/MS方法,應(yīng)用多維數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析方法和代謝通路分析,對CILI組與non-CILI組的血清脂質(zhì)代謝物進行了研究。獲得與CILI發(fā)生密切相關(guān)的23種差異性脂質(zhì)代謝物和4條相關(guān)脂質(zhì)代謝通路。研究發(fā)現(xiàn),CILI組的血清中的PC/PE水平有所降低,FA、SM和AA水平有所升高。這些脂質(zhì)變化可能與脂質(zhì)蓄積以及肝細胞膜的完整性損傷有關(guān)。這些研究結(jié)果有助于進一步了解CILI的作用機制并探索其生物標記物。
【關(guān)鍵詞】：環(huán)孢素 藥物性肝損傷 脂質(zhì)組學(xué) GC-MS HPLC-MS/MS
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R969
【目錄】：

• 中文摘要10-13
• 英文摘要13-16
• 縮略語說明16-20
• 第一章 前言20-32
• 1 脂質(zhì)組學(xué)概述20-28
• 1.1 脂質(zhì)的分類20
• 1.2 脂質(zhì)的生化過程20-22
• 1.3 脂質(zhì)組學(xué)分析方法22-24
• 1.4 脂質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)庫24-26
• 1.5 脂質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)處理方法26-27
• 1.6 脂質(zhì)組學(xué)應(yīng)用27-28
• 2 藥物性肝損傷與環(huán)孢素28-30
• 3 研究意義和主要內(nèi)容30-32
• 3.1 研究意義30
• 3.2 研究內(nèi)容30-32
• 第二章 人血清脂質(zhì)組學(xué)的GC-MS方法建立32-40
• 1 前言32
• 2 實驗部分32-34
• 2.1 藥品與試劑32
• 2.2 標準溶液配制32-33
• 2.3 樣本前處理33
• 2.4 實驗儀器及實驗條件33-34
• 3 結(jié)果與討論34-39
• 3.1 樣品前處理方法優(yōu)化34-36
• 3.2 儀器條件優(yōu)化36
• 3.3 血清脂質(zhì)組GC-MS圖譜的結(jié)構(gòu)鑒定36-39
• 4 結(jié)論39-40
• 第三章 人血清脂質(zhì)組學(xué)的HPLC-MS/MS方法建立40-48
• 1 前言40
• 2 實驗部分40-42
• 2.1 藥品與試劑40-41
• 2.2 標準溶液制備41
• 2.3 樣本前處理41
• 2.4 實驗儀器及實驗條件41-42
• 3 結(jié)果與討論42-47
• 3.1 樣品前處理方法優(yōu)化42
• 3.2 儀器條件優(yōu)化42-43
• 3.3 清脂質(zhì)組HPLC-MS/MS圖譜的結(jié)構(gòu)鑒定43-47
• 4 結(jié)論47-48
• 第四章 基于GC-MS和HPLC-MS/MS方法對環(huán)孢素誘導(dǎo)肝損傷患者血清脂質(zhì)進行研究48-70
• 1 前言48-49
• 2 實驗部分49-51
• 2.1 受試者49
• 2.2 樣本采集49
• 2.3 樣本前處理49-50
• 2.4 實驗儀器與條件50-51
• 2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法51
• 3 結(jié)果51-61
• 3.1 GC-MS和HPLC-MS/MS分析52-53
• 3.2 潛在生物標記物分析53-60
• 3.3 相關(guān)代謝通路分析60-61
• 4 討論61-69
• 4.1 甘油磷脂代謝62-64
• 4.2 花生四烯酸代謝64-65
• 4.3 脂肪酸代謝65-67
• 4.4 鞘脂代謝67-68
• 4.5 特例68-69
• 5 結(jié)論69-70
• 第五章 總結(jié)70-72
• 參考文獻72-83
• 致謝83-84
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文84-85
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表85

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曾樂;肝損傷的保守治療[J];中國急救醫(yī)學(xué);2002年05期

2 岳蘭竹;付蓉;阮二寶;梁勇;劉鴻;瞿文;宋嘉;關(guān)晶;王曉明;王國錦;王化泉;邢莉民;吳玉紅;王s，

本文編號：756011