本文關(guān)鍵詞：雷洛昔芬對鎘染毒大鼠成骨細胞維生素D受體的影響

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【摘要】：目的:本研究通過體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞及建立鎘染毒細胞模型,觀察染鎘及雷洛昔芬干預(yù)后成骨細胞的存活率以及雌激素受體α(Estrogen receptorα,ERα)和維生素D受體(vitamin D receptor,VDR)在細胞中的表達,探討雷洛昔芬(raloxifene,RAL)對鎘染毒成骨細胞(osteoblast,OB)的作用及機制,為臨床治療慢性鎘中毒所致骨損害提供新的方法。方法:選取出生不足24h的新生大鼠5只,通過胰酶和Ⅰ型膠原酶消化,從顱頂骨中分離提取出成骨細胞,對所提取的成骨細胞進行細胞形態(tài)學鑒定。進行細胞原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。所有實驗檢測均選用第4代細胞。用CCK-8法檢測不同濃度鎘染毒和雷洛昔芬干預(yù)后各組成骨細胞的存活率,選取適宜的鎘和雷洛昔芬濃度進行后續(xù)實驗。將成骨細胞分為對照組,氯化鎘組及雷洛昔芬組。用Trizol法提取各組成骨細胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,RT-PCR技術(shù)擴增出目的片段,測定各組成骨細胞中ERα和VDR基因表達情況;提取細胞總蛋白,通過蛋白質(zhì)印跡法檢測鎘染毒后以及雷洛昔芬干預(yù)后成骨細胞中VDR蛋白的表達情況。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學處理,以P㩳0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:原代成骨細胞貼壁前呈均勻球形,約24h開始貼壁,48~96h完全貼壁,細胞呈長梭形或多角形,與其他文獻報道一致;對照組成骨細胞形態(tài)正常,與培養(yǎng)皿底貼合緊密;氯化鎘組細胞形態(tài)發(fā)生改變,與培養(yǎng)皿底貼合不緊密,約50%細胞死亡;與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組少數(shù)細胞發(fā)生形態(tài)改變,與培養(yǎng)皿底貼合較為緊密,約20%細胞死亡。CCK-8實驗顯示:與對照組相比,氯化鎘組細胞活力明顯下降(P㩳0.01),細胞存活率與鎘濃度呈反比(24h:r=㧟0.956,P㩳0.01;48h:r=㧟0.992,P㩳0.01),1μmol/L CdCl2作用24h即可使成骨細胞存活率由100.00%下降至85.49%,8μmol/L CdCl2作用24h后,成骨細胞存活率下降至50.22%;與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細胞活力顯著增加(P㩳0.01),細胞存活率與雷洛昔芬濃度呈正比(24h:r=0.877,P㩳0.01;48h:r=0.965,P㩳0.01),1mg/L RAL干預(yù)24h細胞存活率無明顯改變,而8mg/L RAL干預(yù)24h后細胞存活率可高達152.67%。RT-PCR顯示:與對照組相比,氯化鎘組成骨細胞內(nèi)ERα表達上調(diào)(P㩳0.05),VDR基因表達明顯下降(P㩳0.05);而與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細胞內(nèi)ERα表達下降(P㩳0.05),VDR基因表達顯著增高(P㩳0.05)。蛋白印跡結(jié)果顯示:與對照組相比,氯化鎘組成骨細胞內(nèi)VDR蛋白表達明顯下降(P㩳0.05);與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細胞內(nèi)VDR蛋白表達顯著增高(P㩳0.05),結(jié)果與RT-PCR一致。結(jié)論:鎘可以通過其類雌激素作用對成骨細胞產(chǎn)生直接毒性,其機制可能是通過與ERα結(jié)合下調(diào)成骨細胞內(nèi)VDR的表達;而雷洛昔芬可以干預(yù)鎘的類雌激素作用,通過拮抗鎘下調(diào)成骨細胞內(nèi)VDR的表達對鎘染毒成骨細胞起保護作用,改善慢性鎘中毒骨質(zhì)疏松。
【關(guān)鍵詞】：成骨細胞 維生素D受體 氯化鎘 雷洛昔芬
【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英漢縮略詞對照表9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-31
• 1.1 主要實驗試劑及儀器13-19
• 1.2 實驗方法19-30
• 1.3 統(tǒng)計學方法30-31
• 2 結(jié)果31-37
• 2.1 細胞形態(tài)學鑒定31
• 2.2 成骨細胞的一般情況31-32
• 2.3 CCK-8 測定成骨細胞活力32-34
• 2.4 RT-PCR檢測三組細胞VDR基因的相對表達34-35
• 2.5 蛋白印跡法檢測三組細胞VDR蛋白的相對表達35-37
• 3 討論37-40
• 4 結(jié)論40-41
• 參考文獻41-46
• 附錄（綜述）46-56
• 參考文獻52-56
• 致謝56

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本文編號：704311