本文關(guān)鍵詞：雷洛昔芬對(duì)鎘染毒大鼠成骨細(xì)胞維生素D受體的影響

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【摘要】：目的:本研究通過(guò)體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞及建立鎘染毒細(xì)胞模型,觀察染鎘及雷洛昔芬干預(yù)后成骨細(xì)胞的存活率以及雌激素受體α(Estrogen receptorα,ERα)和維生素D受體(vitamin D receptor,VDR)在細(xì)胞中的表達(dá),探討雷洛昔芬(raloxifene,RAL)對(duì)鎘染毒成骨細(xì)胞(osteoblast,OB)的作用及機(jī)制,為臨床治療慢性鎘中毒所致骨損害提供新的方法。方法:選取出生不足24h的新生大鼠5只,通過(guò)胰酶和Ⅰ型膠原酶消化,從顱頂骨中分離提取出成骨細(xì)胞,對(duì)所提取的成骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定。進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。所有實(shí)驗(yàn)檢測(cè)均選用第4代細(xì)胞。用CCK-8法檢測(cè)不同濃度鎘染毒和雷洛昔芬干預(yù)后各組成骨細(xì)胞的存活率,選取適宜的鎘和雷洛昔芬濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。將成骨細(xì)胞分為對(duì)照組,氯化鎘組及雷洛昔芬組。用Trizol法提取各組成骨細(xì)胞總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增出目的片段,測(cè)定各組成骨細(xì)胞中ERα和VDR基因表達(dá)情況;提取細(xì)胞總蛋白,通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)鎘染毒后以及雷洛昔芬干預(yù)后成骨細(xì)胞中VDR蛋白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,以P㩳0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:原代成骨細(xì)胞貼壁前呈均勻球形,約24h開(kāi)始貼壁,48~96h完全貼壁,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或多角形,與其他文獻(xiàn)報(bào)道一致;對(duì)照組成骨細(xì)胞形態(tài)正常,與培養(yǎng)皿底貼合緊密;氯化鎘組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,與培養(yǎng)皿底貼合不緊密,約50%細(xì)胞死亡;與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組少數(shù)細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變,與培養(yǎng)皿底貼合較為緊密,約20%細(xì)胞死亡。CCK-8實(shí)驗(yàn)顯示:與對(duì)照組相比,氯化鎘組細(xì)胞活力明顯下降(P㩳0.01),細(xì)胞存活率與鎘濃度呈反比(24h:r=㧟0.956,P㩳0.01;48h:r=㧟0.992,P㩳0.01),1μmol/L CdCl2作用24h即可使成骨細(xì)胞存活率由100.00%下降至85.49%,8μmol/L CdCl2作用24h后,成骨細(xì)胞存活率下降至50.22%;與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細(xì)胞活力顯著增加(P㩳0.01),細(xì)胞存活率與雷洛昔芬濃度呈正比(24h:r=0.877,P㩳0.01;48h:r=0.965,P㩳0.01),1mg/L RAL干預(yù)24h細(xì)胞存活率無(wú)明顯改變,而8mg/L RAL干預(yù)24h后細(xì)胞存活率可高達(dá)152.67%。RT-PCR顯示:與對(duì)照組相比,氯化鎘組成骨細(xì)胞內(nèi)ERα表達(dá)上調(diào)(P㩳0.05),VDR基因表達(dá)明顯下降(P㩳0.05);而與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細(xì)胞內(nèi)ERα表達(dá)下降(P㩳0.05),VDR基因表達(dá)顯著增高(P㩳0.05)。蛋白印跡結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,氯化鎘組成骨細(xì)胞內(nèi)VDR蛋白表達(dá)明顯下降(P㩳0.05);與氯化鎘組相比,雷洛昔芬組成骨細(xì)胞內(nèi)VDR蛋白表達(dá)顯著增高(P㩳0.05),結(jié)果與RT-PCR一致。結(jié)論:鎘可以通過(guò)其類(lèi)雌激素作用對(duì)成骨細(xì)胞產(chǎn)生直接毒性,其機(jī)制可能是通過(guò)與ERα結(jié)合下調(diào)成骨細(xì)胞內(nèi)VDR的表達(dá);而雷洛昔芬可以干預(yù)鎘的類(lèi)雌激素作用,通過(guò)拮抗鎘下調(diào)成骨細(xì)胞內(nèi)VDR的表達(dá)對(duì)鎘染毒成骨細(xì)胞起保護(hù)作用,改善慢性鎘中毒骨質(zhì)疏松。
【關(guān)鍵詞】：成骨細(xì)胞 維生素D受體 氯化鎘 雷洛昔芬
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 英漢縮略詞對(duì)照表9-11
• 前言11-13
• 1 材料與方法13-31
• 1.1 主要實(shí)驗(yàn)試劑及儀器13-19
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法19-30
• 1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法30-31
• 2 結(jié)果31-37
• 2.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)鑒定31
• 2.2 成骨細(xì)胞的一般情況31-32
• 2.3 CCK-8 測(cè)定成骨細(xì)胞活力32-34
• 2.4 RT-PCR檢測(cè)三組細(xì)胞VDR基因的相對(duì)表達(dá)34-35
• 2.5 蛋白印跡法檢測(cè)三組細(xì)胞VDR蛋白的相對(duì)表達(dá)35-37
• 3 討論37-40
• 4 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 附錄（綜述）46-56
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 致謝56

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1 楊欣,鄭淑蓉;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬的臨床研究進(jìn)展[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2003年04期

2 陳小明;吳可貴;;雷洛昔芬對(duì)心血管的保護(hù)作用[J];中國(guó)藥房;2006年17期

3 陳蓉;;雷洛昔芬對(duì)絕經(jīng)后猴子冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的影響[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2008年05期

4 王金科,郭翠玲,馬素華;雷洛昔芬[J];中國(guó)新藥雜志;2000年02期

5 杜海玲,邢淑敏;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑——雷洛昔芬的藥理及臨床應(yīng)用[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);2002年01期

6 楊欣 ,鄭淑蓉;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬的臨床研究進(jìn)展[J];中國(guó)鄉(xiāng)村醫(yī)藥;2003年11期

7 王佩,李玉珍;雷洛昔芬——選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑[J];藥物不良反應(yīng)雜志;2004年05期

8 畢崇萍;張紹芬;朱漢民;;雷洛昔芬對(duì)大鼠成骨細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響[J];中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志;2006年06期

9 陳鐘林;;雷洛昔芬對(duì)絕經(jīng)后婦女血漿同型半胱氨酸的影響[J];醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐;2012年08期

10 魏郁暉;陳威;;雷洛昔芬和阿伐他汀對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的干預(yù)效果研究[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2013年08期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 陳小明;張廷星;王華軍;許昌聲;吳可貴;;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬對(duì)雌激素受體的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第八次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2006年

2 李瑞霞;金慰芳;李斌;;p38MAPK在17β-雌二醇和雷洛昔芬促成骨細(xì)胞增殖和分化中的作用[A];第二次全國(guó)絕經(jīng)相關(guān)問(wèn)題高級(jí)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

3 楊發(fā)林;;雌激素和雷洛昔芬對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖及cyclinD1基因表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2008年

4 馮力民;;聯(lián)合應(yīng)用雷洛昔芬和結(jié)合雌激素對(duì)去勢(shì)大鼠血栓前狀態(tài)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國(guó)婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會(huì)議婦科內(nèi)分泌會(huì)場(chǎng)（婦科內(nèi)分泌學(xué)組、絕經(jīng)學(xué)組、計(jì)劃生育學(xué)組）論文匯編[C];2012年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 傅德明;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

2 白毅;我國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)新型雷洛昔芬衍生物[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

3 馮友根;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

4 孫華君;雷洛昔芬治療對(duì)絕經(jīng)后婦女心血管事件和乳腺癌發(fā)生的影響[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2006年

5 本報(bào)記者 孫晨 中國(guó)金藥網(wǎng)聯(lián)合報(bào)道;“第一”——禮來(lái)追求的競(jìng)爭(zhēng)高標(biāo)[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

6 知陶;雷洛昔芬會(huì)影響甲狀腺激素類(lèi)藥物吸收？[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

7 姜艷;防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的新藥[N];健康報(bào);2005年

8 陸志城;雷洛昔芬——有助改善女性AD患者記憶力[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2001年

9 守瑤;治療乳腺癌新化合物誕生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

10 新華;中國(guó)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)治療乳腺癌新化合物[N];健康報(bào);2007年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 奚水;聯(lián)合應(yīng)用雷洛昔芬和雌激素對(duì)去勢(shì)大鼠骨組織和其他靶器官的效應(yīng)[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

2 楊發(fā)林;雷洛昔芬的心血管作用及相關(guān)分子生物學(xué)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2007年

3 高輝;聯(lián)合應(yīng)用雷洛昔芬和雌激素對(duì)去勢(shì)大鼠血栓前狀態(tài)的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

4 吳琴;雷洛昔芬對(duì)人乳腺和卵巢影響的體外研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

5 劉慧;蛋白酪氨酸激酶及雷洛昔芬對(duì)心肌離子通道調(diào)控作用的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

6 周光居;[~（18）F]FDG microPET在大鼠急性肺損傷中的應(yīng)用及雷洛昔芬對(duì)其保護(hù)作用的研究[D];浙江大學(xué);2008年

7 盧翔;殼聚糖修飾表面以及雷洛昔芬對(duì)細(xì)胞形態(tài)、增殖、分化、遷移的影響[D];南京大學(xué);2011年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫維言;雷洛昔芬對(duì)鎘染毒大鼠成骨細(xì)胞維生素D受體的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

2 陳小明;選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑雷洛昔芬對(duì)去卵巢大鼠血壓、血脂、纖維蛋白原和雌激素受體的作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2006年

3 毋亞男;雷洛昔芬對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖基因表達(dá)的影響研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

4 蘇文華;雷洛昔芬對(duì)卵巢切除大鼠骨質(zhì)疏松癥的防治作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2003年

5 唐婉容;流體剪切力和雷洛昔芬對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響及作用機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

6 李茜茜;雷洛昔芬的電化學(xué)與光譜電化學(xué)研究[D];合肥工業(yè)大學(xué);2013年

7 肖敏;雷洛昔芬對(duì)鎘染毒去卵巢大鼠腎臟及腎小管上皮細(xì)胞的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2014年

8 陳建;黃酮類(lèi)成分Apigenin影響腸吸收屏障網(wǎng)絡(luò)及其提高雷洛昔芬生物利用度的研究[D];江蘇大學(xué);2008年

9 王銳;雷洛昔芬對(duì)去卵巢大鼠骨組織TGF-β_1基因表達(dá)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

10 劉立朝;雷洛昔芬對(duì)去勢(shì)大鼠骨組織ER-α mRNA表達(dá)水平的研究及其防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的臨床觀察[D];天津醫(yī)科大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：704311