本文關(guān)鍵詞：雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的作用和機制研究

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【摘要】：研究背景及意義在纖維化疾病中,mTOR (mammalian target of rapamycin,哺乳動物雷帕霉素靶蛋白)信號通路的異常激活不僅參與成纖維細(xì)胞的的增殖、死亡、細(xì)胞周期等進(jìn)程的調(diào)控,而且可能與纖維化疾病治療中的耐藥性相關(guān)。之前的研究已經(jīng)證實mTOR信號通路的關(guān)鍵分子可以作為多種纖維化疾病治療的靶點,所以我們推測mTOR的靶向抑制劑雷帕霉素(Rapamycin)對于瘢痕疙瘩這類纖維化疾病的治療具有一定的臨床應(yīng)用意義。因此本研究以瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞為實驗對象,探討mTOR抑制劑雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的作用及表觀遺傳學(xué)機理,為雷帕霉素在瘢痕疙瘩的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。研究目的1、明確雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性(增殖、凋亡、細(xì)胞周期)及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)相關(guān)基因表達(dá)的影響及可能的作用機理。2、明確雷帕霉素對于瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自噬發(fā)生的影響,進(jìn)一步探究雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞mTOR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控。3、明確不同濃度雷帕霉素誘導(dǎo)瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自噬發(fā)生過程中,自噬相關(guān)非編碼RNA表達(dá)的變化。研究方法以瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞為實驗?zāi)Ｐ?雷帕霉素藥物處理后,采用MTT法檢測的細(xì)胞增殖情況；應(yīng)用DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期情況；透射電鏡觀察雷帕霉素處理后的自噬體形成情況,Western blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)；Real-time PCR檢測細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)基因、自噬相關(guān)非編碼RNA的表達(dá)。研究結(jié)果1、雷帕霉素能夠抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的增殖,但對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的凋亡并無明顯影響,其可致痕疙瘩成纖維細(xì)胞處于G1期的細(xì)胞增多,并下調(diào)c-Myc,上調(diào)P27 mRNA的表達(dá)。并且,雷帕霉素能夠抑制瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)相關(guān)基因(collagen-1、a-SMA和Fibronectin)的表達(dá),下調(diào)其mRNA的表達(dá)水平。2、雷帕霉素處理后,透射電鏡下瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞中可見腫脹的線粒體、自噬小體的雙層膜結(jié)構(gòu)、染色質(zhì)聚集等細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化,并伴有自噬相關(guān)蛋白LC3的表達(dá)增加。并且,mTOR下游通路基因4EBP1和p70S6K的表達(dá)均有下調(diào)。3、雷帕霉素能引起自噬相關(guān)非編碼RNA (miR-885-3p、miR-30a、miR-630、miR-101、 miR-375、IncRNA FLJ11812 和 HULC5)表達(dá)的變化。結(jié)論雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞的生長具有抑制作用,使其發(fā)生G1期周期阻滯。雖然對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞凋亡無顯著影響,但雷帕霉素卻能夠激活其自噬的發(fā)生,并下調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)相關(guān)基因的表達(dá)；雷帕霉素可抑制痕瘢疙瘩成纖維細(xì)mTOR信號通路的活化；雷帕霉素可能通過對痕疙瘩成纖維細(xì)中部分自噬相關(guān)非編碼RNA表達(dá)的影響發(fā)揮其藥理學(xué)功能。
【關(guān)鍵詞】：瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞 雷帕霉素 細(xì)胞周期 自噬 細(xì)胞外基質(zhì) 非編碼RNA
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 引言8-14
• 第一章 雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性的影響14-27
• 前言14-15
• 材料與方法15-20
• 研究結(jié)果20-25
• 結(jié)果討論25-26
• 研究結(jié)論26-27
• 第二章 雷帕霉素對痕疙瘩成纖維細(xì)胞自噬和mTOR信號通路的影響27-39
• 前言27-28
• 材料與方法28-34
• 研究結(jié)果34-37
• 結(jié)果討論37
• 研究結(jié)論37-39
• 第三章 雷帕霉素對瘢痕疙瘩成纖維細(xì)胞自噬相關(guān)非編碼RNA表達(dá)的影響39-48
• 前言39-41
• 材料與方法41-44
• 研究結(jié)果44-46
• 結(jié)果討論46-47
• 研究結(jié)論47-48
• 全文總結(jié)48-49
• 參考文獻(xiàn)49-60
• 文獻(xiàn)綜述60-86
• 參考文獻(xiàn)72-86
• 縮略詞表86-87
• 附圖87-89
• 致謝89-90

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Yun Jeung Kim;Eaum Seok Lee;Seok Hyun Kim;Heon Young Lee;Seung Moo Noh;Dae Young Kang;Byung Seok Lee;;Inhibitory effects of rapamycin on the different stages of hepatic fibrosis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年23期

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本文編號：689658