本文關(guān)鍵詞：沙利度胺對人真皮成纖維細胞Caspase-3、Bcl-2和BAX mRNA的表達影響

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【摘要】：背景:成纖維細胞的異常增生或膠原蛋白的代謝異常是病理性瘢痕和纖維化疾病致病原因之一。目前因其在治療及預防方面尚缺乏有效辦法,困擾著醫(yī)生及患者。沙利度胺,最初于1956年前聯(lián)邦德國用于失眠癥及妊娠反應,不久便風靡歐洲,但因其明顯致畸作用而于1961年被限制使用并退出市場。1965年以色列皮膚病學家Sheski發(fā)現(xiàn)其可以迅速控制及改善麻風病人病情,從而開創(chuàng)了沙利度胺在皮膚科疾病中應用的先河,而后國內(nèi)外的研究也已證實沙利度胺通過抑制VEGF及TNF-a而產(chǎn)生有抗血管生成、抗炎、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)的作用,而被廣泛應用于風濕免疫、血液疾病及一些難治性皮膚病,并且已有學者研究表明沙利度胺通過抑制炎癥因子活性通路而產(chǎn)生具有抑制肝纖維化、肺纖維化及通過干擾p38/Smad3通路從而抑制正常及瘢痕疙瘩成纖維細胞纖連蛋白的生成[1]。但關(guān)于沙利度胺直接作用于真皮成纖維細胞,對其細胞凋亡相關(guān)基因的研究甚少。細胞凋亡的研究是當今生命科學中最為活躍的領(lǐng)域之一,其中Caspase-3、Bcl-2及BAX的研究為凋亡因子熱點,Caspase-3是細胞凋亡的執(zhí)行者,對細胞凋亡起促進作用,而Bcl-2及BAX通過形成同源或異源二聚體而調(diào)控細胞的凋亡,當Bcl-2表達增多時,表現(xiàn)凋亡抑制,而當BAX表達增多時,則促進細胞凋亡。因此本課題通過研究沙利度胺對正常人真皮成纖維細胞中凋亡相關(guān)基因Caspase-3及Bcl-2/BAX m RNA表達的影響,從而為開發(fā)沙利度胺在皮膚科,尤其是成纖維細胞相關(guān)疾病的臨床應用及關(guān)于其在細胞凋亡方面更進一步的研究提供可靠的參考依據(jù)。目的:探索沙利度胺直接作用于正常人真皮成纖維細胞對凋亡相關(guān)基因Caspase-3及Bcl-2、BAX m RNA表達的影響。方法:1使用含體積分數(shù)20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基,通過消化-組織塊混合法進行人真皮成纖維細胞原代培養(yǎng)。2波形蛋白免疫組化染色,進行細胞鑒定。3傳代后取第5代細胞進行熒光定量PCR測定凋亡相關(guān)因子(Caspase-3、Bcl-2、BAX)m RNA的表達情況。成纖維細胞經(jīng)傳代后隨機分為5組,分別加入0(對照組)、10-4 mol/L(-4組),10-5 mol/L(-5組),10-6 mol/L(-6組),10-7mol/L(-7組)含沙利度胺的培養(yǎng)基,每組設三個樣本。均接種在25m L培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),24h后提取各組總RNA。應用熒光定量PCR對Caspase-3、Bcl-2、BAXm RNA的表達量進行測定。4統(tǒng)計學分析:采用SPSS15.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理,實驗數(shù)據(jù)首先經(jīng)正態(tài)性檢驗,符合正態(tài)分布的可采用單因素方差分析,否則按照非參數(shù)檢驗中的Mann-Whitney檢驗,P0.05有統(tǒng)計學意義。結(jié)果:1成功培養(yǎng)人真皮成纖維細胞,形態(tài)學觀察細胞呈長梭形,呈束狀或旋渦狀排布于瓶底。2免疫組化對所培養(yǎng)細胞鑒定,結(jié)果顯示:波形蛋白(Vimentin)陽性,為人皮膚成纖維細胞。3 Caspase-3 m RNA表達水平測定RQ值(對照組):0.976±0.007(-4組:)1.165±0.053(-5組):2.756±0.029(-6組):1.131±0.040(-7組):1.125±0.043。Caspase-3 m RNA在10-5mol/L濃度沙利度胺刺激下表達高于對照組,且差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。其余各沙利度胺濃度組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示10-5mol/L濃度沙利度胺可促進人真皮成纖維細胞Caspase-3 m RNA的表達。4 Bcl-2 m RNA表達水平測定RQ值(對照組):0.941±0.034(-4組):0.385±0.009(-5組):0.713±0.030(-6組):0.928±0.011(-7組):0.958±0.022。Bcl-2 m RNA在10-4mol/L及10-5mol/L濃度組中的表達低于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),且兩試驗組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),10-4mol/L組中RNA的表達低于10-5mol/L組。其余兩組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示10-4mol/L及10-5mol/L濃度沙利度胺可抑制人真皮成纖維細胞Bcl-2 m RNA的表達。5 BAX m RNA表達水平測定RQ值(對照組):0.997±0.007(-4組):1.343±0.039(-5組):1.280±0.023(-6組):0.968±0.018(-7組):1.050±0.065。BAX-m RNA在10-4及10-5mol/L濃度組中的表達高于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),但兩試驗組間比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。其余兩組與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示10-4mol/L及10-5mol/L濃度沙利度胺可促進人真皮成纖維細胞BAX m RNA的表達。結(jié)論:沙利度胺在10-5mol/L濃度作用下,直接作用人真皮成纖維細胞可升高Caspase-3及BAX m RNA的表達,同時降低Bcl-2 m RNA的表達;而在10-4mol/L濃度下僅對Bcl-2及BAX m RNA表達產(chǎn)生上述影響,說明一定濃度的沙利度胺直接作用人真皮成纖維細胞可促進3凋亡因子促凋亡表達。
【關(guān)鍵詞】：沙利度胺 人真皮成纖維細胞 凋亡 Casepase-3 Bcl-2 BAX
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-16
• 結(jié)果16-19
• 附圖19-23
• 附表23-24
• 討論24-27
• 結(jié)論27
• 參考文獻27-30
• 綜述 沙利度胺在皮膚科治療中的應用30-55
• 參考文獻45-55
• 致謝55-56
• 個人簡歷56

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：683977