本文關(guān)鍵詞：阿托伐他汀鈣導(dǎo)致膽紅素水平升高的相關(guān)因素分析及Plin5在其中的主要作用研究

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【摘要】：研究背景:隨著社會(huì)的發(fā)展和人民生活水平的提高,動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的發(fā)病率近年來迅速增加,目前認(rèn)為,血管內(nèi)皮損傷和內(nèi)皮下粥樣斑塊的形成,是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(Coronary heart disease,CHD)的病理學(xué)基礎(chǔ)。他汀類藥物(Statins)作為HMGCR的抑制劑,能夠有效的降低膽固醇水平,已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床動(dòng)脈粥樣硬化的患者。阿托伐他汀鈣(Atorvastatin calcium,ATRO)是一種脂溶性強(qiáng)效他汀類藥物,但是隨著使用的增多,肝損傷、肌肉損傷等不良反應(yīng)隨之被人們發(fā)現(xiàn),尤其是轉(zhuǎn)氨酶(Transaminases)的升高。近年來,人們發(fā)現(xiàn)他汀類藥物誘發(fā)膽紅素(Bilirubin)升高,具有抗氧化和心肌保護(hù)作用。盡管可能與肝臟損傷相關(guān),但是深入認(rèn)識(shí)他汀類導(dǎo)致膽紅素升高的相關(guān)因素和可能機(jī)制,對(duì)他汀類藥物的臨床應(yīng)用具有重要意義。我們前期研究發(fā)現(xiàn),Plin5敲除小鼠血中膽紅素水平明顯升高。但是Plin5在他汀類藥物誘發(fā)血中膽紅素水平升高的具體作用仍有待進(jìn)一步深入。因此,本研究旨在探討阿托伐他汀鈣對(duì)膽紅素水平的影響及其相關(guān)因素,分析膽紅素水平和相關(guān)因素之間的關(guān)系,并利用Plin5敲除小鼠,探索肝臟脂質(zhì)代謝異常與膽紅素升高的相關(guān)機(jī)制研究,希望找出阿托伐他汀鈣對(duì)膽紅素影響的可能機(jī)制。目的:1、探討不同劑量阿托伐他汀鈣的短期應(yīng)用,對(duì)冠心病患者血清中膽紅素水平的影響,并分析膽紅素升高水平和轉(zhuǎn)氨酶、體質(zhì)指數(shù)(Body mass index,BMI)等的相關(guān)性。確定阿托伐他汀鈣導(dǎo)致血清中膽紅素水平升高的主要相關(guān)因素。2、通過分析他汀類藥物對(duì)Plin5敲除小鼠肝臟脂質(zhì)代謝、血清中膽紅素水平的影響,確定Plin5在阿托伐他汀鈣誘發(fā)膽紅素水平升高的作用和可能機(jī)制。方法:第一部分:1、按照詳細(xì)的納入及排除標(biāo)準(zhǔn),篩選了264例初次服用阿托伐他汀鈣的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者,按照臨床常用的劑量分為20 mg/d和40 mg/d治療劑量組,觀察患者用藥前后及高劑量組和低劑量的膽紅素水平變化和其他生化指標(biāo)變化水平。2、按照標(biāo)準(zhǔn)納入的264例服藥患者,進(jìn)行亞組分析,觀察體質(zhì)指數(shù)(BMI)、轉(zhuǎn)氨酶等指標(biāo)與膽紅素水平變化的關(guān)系。第二部分:1、使用對(duì)照野生型(Plin5+/+)小鼠和Plin5敲除(Plin5-/-)小鼠兩組總40只,在小鼠4周齡時(shí)開始給予高脂飲食(High fat diet,HFD),喂養(yǎng)時(shí)間為8周。在此期間每天監(jiān)測(cè)小鼠攝食情況,每周測(cè)體重1次,每周測(cè)血糖1次(血糖儀取血檢測(cè))。第10周開始兩組分別給予10mg/kg/d阿托伐他汀鈣混懸液和生理鹽水,灌胃10天。2、將小鼠采血送檢,測(cè)各種血液生化指標(biāo)。分析各主要器官的重量,取肝臟、心臟、骨骼肌做組織切片,提取蛋白做蛋白印跡(Western blot)檢測(cè),對(duì)肝臟組織做氧化應(yīng)激水平檢測(cè)。確定他汀類藥物對(duì)Plin5缺失小鼠主要代謝指標(biāo)的影響。結(jié)果:1、與服藥前的相比,服用阿托伐他汀鈣的患者血清天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alamine aminotransferse,ALT)、總膽紅素(Total bilirubin,TB)、直接膽紅素水平(Direct bilirubin,DB)均顯著性升高(P0.05),而間接膽紅素(Indirect bilirubin,IB)水平比較差異無顯著性;同時(shí),服用40 mg組患者血清AST、ALT、TB、DB水平升高也較服用20 mg患者更為顯著(P0.05)。此外,服用阿托伐他汀鈣的CHD患者血清中TB升高水平變化,與血清中總膽固醇(Totalcholesterol,TC)水平變化之間具有顯著相關(guān)性(其20 mg組皮爾森相關(guān)分析r值為0.419,40 mg組r值為0.4875,其P值0.0001),但肌酐、尿酸、甘油三酯等水平與TB、DB及IB水平變化無相關(guān)性。2、將服藥患者,分為BMI≤24和BMI24兩組。與服藥前相比,服用阿托伐他汀鈣的兩組患者AST、ALT、膽紅素均顯著性上升(P0.05)。但是,BMI24組的ALT和TB升高較BMI≤24組更顯著(P0.05)。這些結(jié)果顯示,阿托伐他汀鈣導(dǎo)致的血中膽紅素水平升高與脂質(zhì)代謝密切相關(guān)。3、阿托伐他汀鈣能夠減低Plin5敲除小鼠的肝臟重量。同時(shí),與對(duì)照相比,阿托伐他汀鈣灌胃后小鼠血清中AST、ALT、TB、DB含量均明顯升高;且與野生小鼠組相比,Plin5敲除小鼠血清ALT、AST、TB、DB升高更為明顯。4、肝臟組織油紅O染色結(jié)果顯示,阿托伐他汀鈣能夠降低野生小鼠和Plin5敲除小鼠肝細(xì)胞中脂滴數(shù)目縮小脂滴體積。此外,阿托伐他汀鈣能夠增加野生型和Plin5敲除小鼠肝臟組織中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和4-羥基壬烯醛(4-Hydroxy-2-Nonenal,4HNE)水平;同時(shí),降低超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性。5、Western blot結(jié)果顯示,阿托伐他汀鈣能夠明顯降低肝臟Plin5表達(dá)水平,但對(duì)心臟和骨骼肌Plin5表達(dá)降低不明顯。同時(shí),阿托伐他汀鈣能夠進(jìn)一步增加Plin5敲除小鼠給予灌胃后肝臟過氧化物酶增值體激活受體(Peroxisome proliferation activated receptor-α,PPARα)及其下游分子升高水平。結(jié)論:通過對(duì)服用阿托伐他汀鈣藥物患者的臨床分析,我們發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀鈣可以升高AST、ALT、TB和DB水平,而且具有明確劑量依賴關(guān)系。對(duì)其相關(guān)因素的分析結(jié)果顯示,血中膽紅素升高水平與總膽固醇變化、體質(zhì)指數(shù)等之間具有明顯相關(guān)性。這些結(jié)果顯示,阿托伐他汀鈣導(dǎo)致血中膽紅素水平的升高與肝臟脂質(zhì)代謝過程密切相關(guān)。阿托伐他汀鈣能夠降低肝臟Plin5表達(dá)水平,且在Plin5缺失小鼠體內(nèi),阿托伐他汀鈣也能夠增加血中膽紅素水平,同時(shí)進(jìn)一步激活PPARα,并增加Plin5敲除小鼠肝臟的ROS水平。這些結(jié)果表明,阿托伐他汀鈣能夠降低Plin5表達(dá)和激活PPARα,導(dǎo)致血中膽紅素水平升高和影響肝臟脂質(zhì)代謝,Plin5在其過程中發(fā)揮重要的作用。本研究有助于我們進(jìn)一步認(rèn)識(shí)他汀類藥物的心血管保護(hù)作用機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供了研究基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：阿托伐他汀鈣 膽紅素 動(dòng)脈粥樣硬化 脂肪儲(chǔ)存滴蛋白5
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略語表5-8
• 中文摘要8-12
• ABSTRACT12-16
• 前言16-18
• 文獻(xiàn)回顧18-30
• 第一部分 他汀類藥物誘發(fā)膽紅素升高的相關(guān)因素分析30-41
• 引言30-31
• 1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象31
• 1.1 研究對(duì)象31
• 1.2 病史資料及生化檢查31
• 1.3 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)31
• 2 實(shí)驗(yàn)方法31-32
• 2.1 血液樣本采集和檢測(cè)31-32
• 2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法32
• 3 結(jié)果32-38
• 3.1 基本資料32-34
• 3.2 阿托伐他汀鈣對(duì)患者主要生化指標(biāo)的影響34-35
• 3.3 轉(zhuǎn)氨酶水平變化35
• 3.4 血膽紅素水平變化的相關(guān)因素分析35-38
• 4 討論38-41
• 第二部分 PLIN5在他汀類藥物誘發(fā)膽紅素升高的作用41-56
• 引言41
• 1 實(shí)驗(yàn)材料41-42
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物41
• 1.2 主要試劑41-42
• 1.3 主要設(shè)備42
• 2 實(shí)驗(yàn)方法42-46
• 2.1 小鼠的飼養(yǎng)、繁殖和喂養(yǎng)42
• 2.2 小鼠的基因型鑒定和檢測(cè)42-43
• 2.3 小鼠高脂飼料喂養(yǎng)43
• 2.4 小鼠的阿托伐他汀鈣灌胃43
• 2.5 小鼠體重和主要器官重量分析43
• 2.6 小鼠血液生化主要指標(biāo)分析43-44
• 2.7 小鼠組織取材44
• 2.8 常規(guī)HE染色44
• 2.9 油紅O染色44
• 2.10 他汀類藥物對(duì)小鼠肝臟氧化應(yīng)激水平的影響44-45
• 2.11 小鼠肝臟Plin5的表達(dá)水平檢測(cè)45-46
• 2.12 統(tǒng)計(jì)分析46
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-53
• 3.1 Plin5敲除小鼠的基因型鑒定46
• 3.2 小鼠體重檢測(cè)和重要器官重量的分析46-48
• 3.3 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠血生化指標(biāo)的影響48-50
• 3.4 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠主要器官的形態(tài)學(xué)影響50-51
• 3.5 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠肝臟脂肪含量的影響51
• 3.6 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠肝臟Plin5表達(dá)水平的影響51-52
• 3.7 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠肝臟脂質(zhì)過氧化相關(guān)檢測(cè)52
• 3.8 阿托伐他汀鈣對(duì)小鼠肝臟PPARα的影響52-53
• 4 討論53-56
• 小結(jié)56-58
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 附錄 臨床規(guī)范培訓(xùn)輪轉(zhuǎn)科室64-65
• 個(gè)人簡歷和研究成果65-66
• 致謝66

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本文編號(hào)：679431