發(fā)布時間：2017-08-12 01:40

  本文關(guān)鍵詞：Dll4靶向納米藥物抗血管生成治療腫瘤的研究

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【摘要】：腫瘤血管生成是一個多因素、多步驟的復(fù)雜病理過程,以腫瘤血管生成信號通路中的關(guān)鍵分子為靶點開發(fā)抗腫瘤藥物是目前藥物研發(fā)的熱點。現(xiàn)階段已有近十種抑制腫瘤血管生成的分子靶向藥物成功轉(zhuǎn)化應(yīng)用于癌癥的臨床治療。然而,這些分子靶向藥物臨床使用一段時間后常常出現(xiàn)低響應(yīng)和耐藥的現(xiàn)象,尋找新的抗腫瘤血管生成治療靶點顯得尤為迫切。近年來,Delta樣配體4(Delta-like ligand 4,Dll4)被發(fā)現(xiàn)在腫瘤新生血管內(nèi)皮細胞中高度表達,Dll4-Notch信號通路在腫瘤血管生成中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用,包括調(diào)控腫瘤血管的萌芽、分支和影響血流灌注功能等。Dll4在腫瘤血管內(nèi)皮細胞表面的選擇性高表達提示其是一個潛在的抗腫瘤血管生成靶向納米藥物的新的遞送靶點。本研究首次構(gòu)建了一種GD16多肽(H2N-GRCTNFHNFIYICFPD-CONH2)修飾的紫杉醇(PTX)納米遞送系統(tǒng)(GD16-PTX-NP),該納米藥物可特異性地靶向內(nèi)皮細胞表面高表達的Dll4配體。進一步以荷人頭頸癌FaDu(Dll4陰性表達)腫瘤裸鼠為模型,研究該納米藥物的靶向抗血管生成治療腫瘤的作用和機制。采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備裝載PTX的納米粒(PTX-NP),通過氨基末端PEG化修飾法將GD16多肽連接到PTX-NP表面制得GD16多肽修飾的紫杉醇納米粒(GD16-PTX-NP)。透射電鏡(TEM)圖像顯示納米粒表面形態(tài)圓整,大小均一,無聚集粘附現(xiàn)象。采用Malvern Zetasizer Nano ZS納米粒度儀測得GD16-PTX-NP的粒徑為189.2 nm,Zeta電位為-14.2 mv。HPLC測得GD16-PTX-NP的載藥量為3.9%,包封率為35.3%。納米粒在PBS中的釋放表現(xiàn)為先突釋和后緩釋的雙相釋放過程,在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)實驗中顯示出良好的長循環(huán)特性。采用高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)考察了人臍靜脈內(nèi)細胞(HUVEC)對香豆素6標記的納米粒的攝取情況。GD16多肽修飾的納米�？赏ㄟ^與HUVEC表面高表達的Dll4配體特異性結(jié)合促進納米粒內(nèi)吞進入血管內(nèi)皮細胞,游離多肽、低溫、菲律賓菌素和氧化苯砷等可顯著抑制內(nèi)皮細胞對納米粒的攝取。GD16多肽的靶向性可顯著增加GD16-PTX-NP對HUVEC增殖、遷移、小管形成和運動性的抑制作用。GD16-PTX-NP可有效地抑制裸鼠體內(nèi)Matrigel種植體的微血管密度。采用Xenogen小動物成像技術(shù)觀察到DiR標記的GD16-NP可在腫瘤組織中靶向性高蓄積,并且該效應(yīng)可被游離GD16多肽阻斷。這一結(jié)果提示GD16多肽修飾可顯著增強納米粒對腫瘤組織的靶向性。激光共聚焦顯微鏡圖片顯示香豆素6標記的GD16-PTX-NP可準確靶向腫瘤血管內(nèi)皮細胞并進一步誘導(dǎo)其凋亡。以荷FaDu腫瘤裸鼠為模型,考察了GD16-PTX-NP體內(nèi)抗血管生成治療腫瘤的活性。GD16-PTX-NP能夠通過減少腫瘤組織中的微血管密度和誘導(dǎo)腫瘤細胞的凋亡,有效地延緩腫瘤體積的生長,并且無體重減輕等明顯毒副作用。本研究首次構(gòu)建了靶向腫瘤血管Dll4配體的納米藥物(GD16-PTX-NP),較為系統(tǒng)地評價了GD16-PTX-NP對腫瘤血管內(nèi)皮細胞的靶向性和抗血管生成活性,揭示了納米藥物靶向腫瘤血管Dll4配體在腫瘤抗血管生成治療中的潛能和意義。
【關(guān)鍵詞】：Dll4 納米藥物 腫瘤抗血管生成治療 GD16 FaDu腫瘤
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-14
• 第一部分 Dll4靶向納米藥物的構(gòu)建與表征14-28
• 1 試劑和儀器14-15
• 1.1 儀器14
• 1.2 材料和試劑14-15
• 2 實驗方法15-18
• 2.1 GD16多肽修飾的載紫杉醇納米粒（GD16-PTX-NP）的構(gòu)建15
• 2.2 GD16-PTX-NP的表征15-17
• 2.3 GD16-PTX-NP體外釋放特性的研究17
• 2.4 GD16-PTX-NP大鼠體內(nèi)藥動學(xué)的研究17-18
• 2.5 統(tǒng)計學(xué)分析18
• 3 實驗結(jié)果18-24
• 3.1 GD16-PTX-NP的理化性質(zhì)的表征18-20
• 3.2 納米粒中紫杉醇HPLC檢測方法的建立20
• 3.3 GD16-PTX-NP的體外釋特性20-22
• 3.4 GD16-PTX-NP體內(nèi)長循環(huán)特性22-24
• 4 討論24-26
• 5 小結(jié)26-28
• 第二部分 GD16-PTX-NP腫瘤血管靶向性和抗血管生成活性研究28-50
• 1 儀器和材料28-30
• 1.1 主要儀器28
• 1.2 材料和試劑28-30
• 1.3 細胞和動物30
• 2 實驗方法30-35
• 2.1 GD16-PTX-NP體外內(nèi)皮細胞靶向性研究30-31
• 2.2 GD16-PTX-NP體外抗血管生成活性研究31-33
• 2.3 GD16-PTX-NP抗小鼠體內(nèi)Matrigel種植體血管生成的研究33
• 2.4 GD16-PTX-NP對FaDu腫瘤組織靶向性的研究33
• 2.5 GD16-PTX-NP對FaDu腫瘤血管靶向性和抗血管生成活性的研究33-34
• 2.6 統(tǒng)計學(xué)分析34-35
• 3 實驗結(jié)果35-46
• 3.1 GD16-PTX-NP體外內(nèi)皮細胞靶向性35-36
• 3.2 GD16-PTX-NP體外抗血管生成活性36-40
• 3.3 GD16-PTX-NP對小鼠體內(nèi)Matrigel膠中血管生成的抑制作用40-42
• 3.4 GD16多肽修飾的納米粒對腫瘤組織的靶向性42-44
• 3.5 GD16-PTX-NP對Fadu腫瘤的血管靶向性和抗血管生成活性44-46
• 4 討論46-49
• 5 小結(jié)49-50
• 第三部分 GD16-PTX-NP靶向抗血管生成治療腫瘤的研究50-57
• 1 儀器和試劑50-51
• 1.1 主要試劑50-51
• 1.2 實驗儀器51
• 1.3 細胞和動物51
• 2 實驗方法51-53
• 2.1 GD16-PTX-NP治療FaDu腫瘤的藥效學(xué)研究51-53
• 2.2 統(tǒng)計學(xué)分析53
• 3 實驗結(jié)果53-56
• 3.1 GD16-PTX-NP對FaDu腫瘤的治療作用53-54
• 3.2 GD16-PTX-NP治療FaDu腫瘤的免疫組化染色分析54-56
• 4 討論56
• 5 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-66
• 綜述 Dll4-Notch 信號通路作為腫瘤抗血管生成 治療靶點的研究進展66-80
• 參考文獻73-80
• 碩士期間論文80-82
• 致謝82

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 ZHANG Ping;YAN XianChun;CHEN Yan;YANG ZiYan;HAN Hua;;Notch signaling in blood vessels: from morphogenesis to homeostasis[J];Science China(Life Sciences);2014年08期

2 丁新宇;徐志飛;;Dll4/Notch通路與腫瘤血管形成[J];中國肺癌雜志;2009年11期

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本文編號：659205