本文關(guān)鍵詞：Dll4靶向納米藥物抗血管生成治療腫瘤的研究

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【摘要】：腫瘤血管生成是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜病理過(guò)程,以腫瘤血管生成信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)抗腫瘤藥物是目前藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。現(xiàn)階段已有近十種抑制腫瘤血管生成的分子靶向藥物成功轉(zhuǎn)化應(yīng)用于癌癥的臨床治療。然而,這些分子靶向藥物臨床使用一段時(shí)間后常常出現(xiàn)低響應(yīng)和耐藥的現(xiàn)象,尋找新的抗腫瘤血管生成治療靶點(diǎn)顯得尤為迫切。近年來(lái),Delta樣配體4(Delta-like ligand 4,Dll4)被發(fā)現(xiàn)在腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá),Dll4-Notch信號(hào)通路在腫瘤血管生成中起著非常重要的調(diào)節(jié)作用,包括調(diào)控腫瘤血管的萌芽、分支和影響血流灌注功能等。Dll4在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的選擇性高表達(dá)提示其是一個(gè)潛在的抗腫瘤血管生成靶向納米藥物的新的遞送靶點(diǎn)。本研究首次構(gòu)建了一種GD16多肽(H2N-GRCTNFHNFIYICFPD-CONH2)修飾的紫杉醇(PTX)納米遞送系統(tǒng)(GD16-PTX-NP),該納米藥物可特異性地靶向內(nèi)皮細(xì)胞表面高表達(dá)的Dll4配體。進(jìn)一步以荷人頭頸癌FaDu(Dll4陰性表達(dá))腫瘤裸鼠為模型,研究該納米藥物的靶向抗血管生成治療腫瘤的作用和機(jī)制。采用乳化-溶劑揮發(fā)法制備裝載PTX的納米粒(PTX-NP),通過(guò)氨基末端PEG化修飾法將GD16多肽連接到PTX-NP表面制得GD16多肽修飾的紫杉醇納米粒(GD16-PTX-NP)。透射電鏡(TEM)圖像顯示納米粒表面形態(tài)圓整,大小均一,無(wú)聚集粘附現(xiàn)象。采用Malvern Zetasizer Nano ZS納米粒度儀測(cè)得GD16-PTX-NP的粒徑為189.2 nm,Zeta電位為-14.2 mv。HPLC測(cè)得GD16-PTX-NP的載藥量為3.9%,包封率為35.3%。納米粒在PBS中的釋放表現(xiàn)為先突釋和后緩釋的雙相釋放過(guò)程,在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)中顯示出良好的長(zhǎng)循環(huán)特性。采用高內(nèi)涵藥物篩選技術(shù)考察了人臍靜脈內(nèi)細(xì)胞(HUVEC)對(duì)香豆素6標(biāo)記的納米粒的攝取情況。GD16多肽修飾的納米�？赏ㄟ^(guò)與HUVEC表面高表達(dá)的Dll4配體特異性結(jié)合促進(jìn)納米粒內(nèi)吞進(jìn)入血管內(nèi)皮細(xì)胞,游離多肽、低溫、菲律賓菌素和氧化苯砷等可顯著抑制內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)納米粒的攝取。GD16多肽的靶向性可顯著增加GD16-PTX-NP對(duì)HUVEC增殖、遷移、小管形成和運(yùn)動(dòng)性的抑制作用。GD16-PTX-NP可有效地抑制裸鼠體內(nèi)Matrigel種植體的微血管密度。采用Xenogen小動(dòng)物成像技術(shù)觀(guān)察到DiR標(biāo)記的GD16-NP可在腫瘤組織中靶向性高蓄積,并且該效應(yīng)可被游離GD16多肽阻斷。這一結(jié)果提示GD16多肽修飾可顯著增強(qiáng)納米粒對(duì)腫瘤組織的靶向性。激光共聚焦顯微鏡圖片顯示香豆素6標(biāo)記的GD16-PTX-NP可準(zhǔn)確靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞并進(jìn)一步誘導(dǎo)其凋亡。以荷FaDu腫瘤裸鼠為模型,考察了GD16-PTX-NP體內(nèi)抗血管生成治療腫瘤的活性。GD16-PTX-NP能夠通過(guò)減少腫瘤組織中的微血管密度和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡,有效地延緩腫瘤體積的生長(zhǎng),并且無(wú)體重減輕等明顯毒副作用。本研究首次構(gòu)建了靶向腫瘤血管Dll4配體的納米藥物(GD16-PTX-NP),較為系統(tǒng)地評(píng)價(jià)了GD16-PTX-NP對(duì)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的靶向性和抗血管生成活性,揭示了納米藥物靶向腫瘤血管Dll4配體在腫瘤抗血管生成治療中的潛能和意義。
【關(guān)鍵詞】：Dll4 納米藥物 腫瘤抗血管生成治療 GD16 FaDu腫瘤
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 前言12-14
• 第一部分 Dll4靶向納米藥物的構(gòu)建與表征14-28
• 1 試劑和儀器14-15
• 1.1 儀器14
• 1.2 材料和試劑14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.1 GD16多肽修飾的載紫杉醇納米粒（GD16-PTX-NP）的構(gòu)建15
• 2.2 GD16-PTX-NP的表征15-17
• 2.3 GD16-PTX-NP體外釋放特性的研究17
• 2.4 GD16-PTX-NP大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的研究17-18
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析18
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果18-24
• 3.1 GD16-PTX-NP的理化性質(zhì)的表征18-20
• 3.2 納米粒中紫杉醇HPLC檢測(cè)方法的建立20
• 3.3 GD16-PTX-NP的體外釋特性20-22
• 3.4 GD16-PTX-NP體內(nèi)長(zhǎng)循環(huán)特性22-24
• 4 討論24-26
• 5 小結(jié)26-28
• 第二部分 GD16-PTX-NP腫瘤血管靶向性和抗血管生成活性研究28-50
• 1 儀器和材料28-30
• 1.1 主要儀器28
• 1.2 材料和試劑28-30
• 1.3 細(xì)胞和動(dòng)物30
• 2 實(shí)驗(yàn)方法30-35
• 2.1 GD16-PTX-NP體外內(nèi)皮細(xì)胞靶向性研究30-31
• 2.2 GD16-PTX-NP體外抗血管生成活性研究31-33
• 2.3 GD16-PTX-NP抗小鼠體內(nèi)Matrigel種植體血管生成的研究33
• 2.4 GD16-PTX-NP對(duì)FaDu腫瘤組織靶向性的研究33
• 2.5 GD16-PTX-NP對(duì)FaDu腫瘤血管靶向性和抗血管生成活性的研究33-34
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析34-35
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-46
• 3.1 GD16-PTX-NP體外內(nèi)皮細(xì)胞靶向性35-36
• 3.2 GD16-PTX-NP體外抗血管生成活性36-40
• 3.3 GD16-PTX-NP對(duì)小鼠體內(nèi)Matrigel膠中血管生成的抑制作用40-42
• 3.4 GD16多肽修飾的納米粒對(duì)腫瘤組織的靶向性42-44
• 3.5 GD16-PTX-NP對(duì)Fadu腫瘤的血管靶向性和抗血管生成活性44-46
• 4 討論46-49
• 5 小結(jié)49-50
• 第三部分 GD16-PTX-NP靶向抗血管生成治療腫瘤的研究50-57
• 1 儀器和試劑50-51
• 1.1 主要試劑50-51
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器51
• 1.3 細(xì)胞和動(dòng)物51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-53
• 2.1 GD16-PTX-NP治療FaDu腫瘤的藥效學(xué)研究51-53
• 2.2 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析53
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果53-56
• 3.1 GD16-PTX-NP對(duì)FaDu腫瘤的治療作用53-54
• 3.2 GD16-PTX-NP治療FaDu腫瘤的免疫組化染色分析54-56
• 4 討論56
• 5 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻(xiàn)58-66
• 綜述 Dll4-Notch 信號(hào)通路作為腫瘤抗血管生成 治療靶點(diǎn)的研究進(jìn)展66-80
• 參考文獻(xiàn)73-80
• 碩士期間論文80-82
• 致謝82

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 ZHANG Ping;YAN XianChun;CHEN Yan;YANG ZiYan;HAN Hua;;Notch signaling in blood vessels: from morphogenesis to homeostasis[J];Science China(Life Sciences);2014年08期

2 丁新宇;徐志飛;;Dll4/Notch通路與腫瘤血管形成[J];中國(guó)肺癌雜志;2009年11期

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本文編號(hào)：659205