本文關(guān)鍵詞：藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的制備及評價

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【摘要】：研究目的:課題選用親水性的天然多糖低分子肝素與藤黃酸共價結(jié)合,在溶液中自組裝形成兩親性聚合物膠束,改善藤黃酸的水溶性以及穩(wěn)定性;建立體內(nèi)藥物含量分析方法,考察膠束在小鼠體內(nèi)的分布及靶向性;建立小鼠原位肝癌移植模型,考察膠束的抗腫瘤作用。實驗方法:(1)藤黃酸-低分子肝素接枝物(GA-LMWH)的制備及表征:通過藤黃酸與低分子肝素反應,得到GA-LMWH兩親性共聚物;經(jīng)單因素考察和正交試驗確定最優(yōu)合成工藝;利用紫外分光光度計測定藤黃酸接枝低分子肝素的取代度,通過紅外、DSC、電鏡、粒度儀等對自組裝膠束的結(jié)構(gòu)、粒徑、電位、CMC值等方面進行表征。(2)GA-LMWH膠束在小鼠體內(nèi)的組織分布研究:考察膠束在離體血漿中的穩(wěn)定性,評價GA-LMWH膠束在小鼠體內(nèi)的靶向作用,以FITC標記肝素,得到粒徑范圍在200nm左右的GA-LMWH-FITC膠束;經(jīng)鼠尾靜脈注射后,利用多功能酶標儀檢測不同時間點各組織中的熒光強度,根據(jù)統(tǒng)計距藥動學參數(shù)得到各組織的藥時曲線下面積、靶向效率、平均滯留時間等,評價自組裝膠束的靶向性。(3)GA-LMWH自組裝膠束的抗腫瘤作用研究:利用H22腹水瘤細胞建立肝癌原位移植瘤模型,通過肝功能檢測與組織切片病理學觀察以及存活時間曲線比較藤黃酸溶液與GA-LMWH膠束的抗腫瘤療效差異。實驗結(jié)果:(1)肝素-藤黃酸接枝物(GA-LMWH)的制備及表征:經(jīng)單因素考察及正交試驗得出最優(yōu)處方,其具體條件為活化中間體酯的溫度為0℃、乙二胺的加入量為200mL(藤黃酸的投料量為0.3mmol時)、反應物的摩爾數(shù)投料比為n(肝素鈉):n(藤黃酸):n(EDCI)=1:20:10。紅外及DSC圖譜表明產(chǎn)物成功合成,通過紫外檢測,GA-LMWH的取代度為(27.45±0.22913)%;電鏡觀察膠束的形態(tài)均一,利用納米粒度儀檢測其粒徑范圍在200nm左右,電位-30m V,說明膠束結(jié)構(gòu)穩(wěn)定;熒光分光光度計測得CAC值為(0.0024±0.00019)mg×m L-1。(2)GA-LMWH自組裝膠束在小鼠體內(nèi)的藥動學研究:血漿穩(wěn)定性試驗表明,膠束在血漿中穩(wěn)定存在24小時。將低分子肝素用FITC標記,得到具有熒光特性的GA-LMWH-FITC膠束,尾靜脈注射小鼠體內(nèi)后,膠束的肝臟富集效應顯著,且體內(nèi)平均滯留時間MRT是GA溶液MRT的6倍。(3)GA-LMWH的抗腫瘤效應研究:抗腫瘤試驗表明,低分子肝素組與模型組在肝功能評價和生存時間上比較并沒有顯著性差異(p0.05),表明本實驗中低分子肝素溶液對腫瘤沒有直接抑制作用,雖然GA-LMWH膠束組和GA溶液組的肝功能指標均沒有恢復至正常值,但與模型組和低分子肝素組比較均有明顯降低(p0.05),GA-LMWH膠束組在谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶AST這兩項肝功能指標與GA溶液組比較有顯著性差異的降低(p0.05),生命曲線較GA溶液組有所延長(p0.05)。結(jié)論:通過化學合成的方法將藤黃酸接枝到低分子肝素上形成兩親性共聚物,其水溶液中自組裝成納米級膠束;能夠被動富集于肝臟部位的作用顯著,且延長了體內(nèi)滯留時間,GA-LMWH膠束保留了藤黃酸的抗腫瘤活性,原位移植瘤實驗也表現(xiàn)出較藤黃酸溶液更好的抗腫瘤效果。
【關(guān)鍵詞】：藤黃酸 自組裝膠束 肝靶向 組織分布 抗腫瘤
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943
【目錄】：

• 中文摘要10-12
• ABSTRACT12-14
• 英文縮略詞表14-15
• 前言15-20
• 第一章 藤黃酸接枝低分子肝素（GA-LMWH）自組裝膠束的制備及表征20-38
• 1.儀器與試藥20-21
• 1.1 儀器20
• 1.2 試藥20-21
• 2.GA-LMWH的制備與結(jié)果21-28
• 2.1 GA-LMWH合成總路線21
• 2.2 藤黃酸乙二胺單酰胺的合成21
• 2.3 藤黃酸-低分子肝素接枝物的合成21-22
• 2.4 GA-LMWH膠束的制備22
• 2.5 GA-LMWH膠束合成條件的單因素考察及工藝篩選22-26
• 2.5.1 催化劑的選擇22-23
• 2.5.2 反應溶劑的選擇23
• 2.5.3 合成GA-LMWH載體的選擇23-24
• 2.5.4 合成活性中間體溫度的選擇24-25
• 2.5.5 藤黃酸乙二胺單酰胺的合成中乙二胺的用量25
• 2.5.6 反應物投料比的選擇25-26
• 2.6 單因素考察得到出的制備條件26-28
• 3.GA-LMWH自組裝膠束的表征28-37
• 3.1 傅里葉紅外吸收光譜(FTIR)28-29
• 3.2 差示掃描量熱分析29-30
• 3.3 膠束的形態(tài)粒徑與電位30-31
• 3.4 自組裝膠束臨界聚集濃度的測定31-33
• 3.4.1 自組裝膠束臨界聚集濃度的測定原理31-32
• 3.4.2 臨界聚集濃度的測定32
• 3.4.3 自組裝膠束的CAC值的測定結(jié)果32-33
• 3.5 GA-LMWH取代度的測定33-37
• 3.5.1 藤黃酸分析方法的建立33-35
• 3.5.2 藤黃酸標準曲線的繪制35
• 3.5.3 重現(xiàn)性實驗35-36
• 3.5.4 藤黃酸取代度的測定36
• 3.5.5 藤黃酸取代度的測定結(jié)果36-37
• 4.討論37
• 5.本章小結(jié)37-38
• 第二章 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的藥動學組織分布實驗38-69
• 第一節(jié) 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的血漿穩(wěn)定性38-47
• 1 儀器、試藥與動物38-39
• 1.1 儀器38
• 1.2 試劑與藥品38
• 1.3 實驗動物38-39
• 2.方法與結(jié)果39-45
• 2.1 分析方法的建立39-43
• 2.1.1 色譜條件39
• 2.1.2 實驗所需血漿樣品的收集39
• 2.1.3 標準曲線制備39-40
• 2.1.4 方法專屬性考察40-42
• 2.1.5 藤黃酸在血漿中的精密度實驗42
• 2.1.6 方法回收率實驗42-43
• 2.2 血漿穩(wěn)定性試驗43-45
• 2.2.1 血漿穩(wěn)定性實驗步驟43-44
• 2.2.2 統(tǒng)計學分析44
• 2.2.3 血漿穩(wěn)定性實驗結(jié)果44-45
• 3 討論45-47
• 第二節(jié) 熒光物質(zhì)標記藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的制備47-54
• 1 儀器與試藥47
• 1.1 儀器47
• 1.2 試劑與藥品47
• 2 方法與結(jié)果47-52
• 2.1 熒光物質(zhì)的選擇、熒光標記GA-LMWH的原理及流程圖47-49
• 2.2.GA-LMWH-FITC合成步驟49-50
• 2.2.1 低分子肝素的活化49
• 2.2.2 FITC標記低分子肝素鈉的制備49-50
• 2.2.3 FITC標記GA-LMWH的合成50
• 2.3 GA-LMWH-FITC的合成結(jié)果50-52
• 2.3.1 GA-LMWH-FITC的紅外圖譜50-51
• 2.3.2 GA-LMWH-FITC的粒徑分布51-52
• 3 討論52-54
• 第三節(jié) 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束在小鼠體內(nèi)的組織分布研究54-69
• 1 儀器、試藥與動物54-55
• 1.1 儀器54
• 1.2 藥品與試劑54
• 1.3 實驗動物54-55
• 2 方法與結(jié)果55-68
• 2.1 熒光檢測條件55
• 2.2 實驗數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計學分析55
• 2.3 血漿樣品的制備55
• 2.3.1 空白血漿的制備55
• 2.3.2 含熒光膠束的血漿樣品制備55
• 2.3.3 給藥后血漿樣品的制備55
• 2.4 組織樣品的制備55-56
• 2.4.1 空白組織樣品的制備55-56
• 2.4.2 含熒光膠束組織樣品的制備56
• 2.4.3 給藥小鼠的組織處理56
• 2.5 血漿及各組織標準曲線的制備56-59
• 2.6 精密度實驗59
• 2.7 相對回收率實驗59
• 2.8 穩(wěn)定性實驗59-62
• 2.9 給藥方法與生物樣品的采集62-64
• 2.10 藥動學分析及靶向性研究64-68
• 2.10.1 利用藥動學參數(shù)分析組織靶向性64-67
• 2.10.2 GA-LMWH-FITC體內(nèi)分布的熒光切片觀察67-68
• 3 討論68
• 4 本章小結(jié)68-69
• 第三章 藤黃酸接枝低分子肝素自組裝膠束的體內(nèi)抗腫瘤作用研究69-79
• 1.儀器、材料與動物69
• 1.1 儀器69
• 1.2 材料69
• 1.3 實驗動物69
• 2.方法與結(jié)果69-77
• 2.1 小鼠原位肝癌移植69-71
• 2.1.1 體內(nèi)H22細胞傳代69-70
• 2.1.2 小鼠原位肝癌模型建立70-71
• 2.2 體內(nèi)抗腫瘤實驗71-77
• 2.2.1 分組與給藥71
• 2.2.2 肝功能檢測71-72
• 2.2.3 體重變化及器官指數(shù)變化趨勢72-73
• 2.2.4 肝臟組織的病理觀察73-76
• 2.2.5 存活時間與生存率分析76-77
• 3.討論77-78
• 4.本章小結(jié)78-79
• 全文總結(jié)79-81
• 參考文獻81-85
• 綜述85-97
• 參考文獻91-97
• 個人簡介97
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表論文情況97-98
• 致謝98

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