本文關(guān)鍵詞：1、化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)β-淀粉樣蛋白致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用 2、清道夫受體Marco在α-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿爾茲海默氏病 化合物WYD1-8和WYD7-6 β-淀粉樣蛋白 神經(jīng)炎癥 帕金森氏病 星形膠質(zhì)細(xì)胞 清道夫受體Marco α-突觸核蛋白 脂多糖 神經(jīng)炎癥 FLZ Morris水迷宮

【摘要】：第一部分：化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)β-淀粉樣蛋白致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用阿爾茲海默氏病(Alzheimer's disease, AD)是一種主要發(fā)生在老年人中的神經(jīng)退行性疾病,在老年癡呆中最為常見(jiàn)。近年來(lái)的研究表明,炎癥與AD發(fā)病關(guān)系密切。AD病變顯著特征是中晚期腦內(nèi)出現(xiàn)大量被β淀粉樣蛋白(β-amyloid protein, Aβ)激活的膠質(zhì)細(xì)胞,并伴有炎癥因子表達(dá)增加和補(bǔ)體系統(tǒng)的激活�；衔颳YD1-8和WYD7-6為間苯三酚類(lèi)衍生物,前期研究結(jié)果顯示W(wǎng)YD1-8和WYD7-6對(duì)Aβ和脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)刺激原代海馬混合培養(yǎng)體系引起的神經(jīng)炎癥具有明顯的抑制作用,對(duì)海馬神經(jīng)元具有明顯的保護(hù)作用。由此我們推測(cè)化合物WYD1-8和WYD7-6可能通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥而保護(hù)神經(jīng)元和治療AD。本研究采用側(cè)腦室注射Aβ1-42建立AD小鼠模型,研究化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用,并對(duì)相關(guān)機(jī)制進(jìn)行探討。結(jié)果顯示,化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)側(cè)腦室注射Aβ1-42引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙具有明顯的改善作用,且可抑制乙酰膽堿酯酶(Acetylcholine esterase, AChE),提高膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(Choline acetyltransferase, ChAT)的活性和乙酰膽堿(Acetylcholine, ACh)的含量�；衔颳YD1-8和WYD7-6可明顯抑制小鼠海馬小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化,降低腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β)、環(huán)氧合酶2(Cyclooxygenase-2, Cox-2)的含量和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS)的活性,提高超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)的活性。此外,化合物WYD1-8和WYD7-6還可抑制Bax,提高Bcl-2的表達(dá)和抑制半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Cystein-asparate protease 3, Caspase-3)的活化。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),Aβ引起抑制性κB (Inhibitory κB,IκB)和IκB激酶(IκB kinase,IKK)的磷酸化水平明顯提高,化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)其均具有明顯的抑制作用,同時(shí)也可明顯抑制核轉(zhuǎn)錄因子κB (Nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65亞基的核轉(zhuǎn)位�；衔颳YD1-8和WYD7-6可明顯抑制Aβ引起的p38與c-Jun氨基末端激酶(C-Jun NH2-terminal kinase, JNK)的高磷酸化水平,而細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(Extracellular regulated kinase, ERK)的磷酸化水平?jīng)]有受到明顯影響,提示W(wǎng)YD1-8和WYD7-6可通過(guò)抑制NF-κB和JNK/p38 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而抑制炎癥。以上結(jié)果表明化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)Aβ引起的學(xué)習(xí)記憶障礙有明顯的改善作用,這可能與其抑制神經(jīng)炎癥和神經(jīng)元凋亡有關(guān)。本研究表明化合物WYD1-8和WYD7-6是治療AD有良好前景的候選化合物。第二部分：清道夫受體Marco在a-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究帕金森氏病(Parkinson's disease, PD)是一種與衰老密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的炎癥是PD發(fā)病的重要原因。星形膠質(zhì)細(xì)胞作為腦中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞,可被a-突觸核蛋白(a-synuclein)等刺激因子激活,將感知的信號(hào)傳遞給神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞,在PD發(fā)生中處于重要地位。但a-synuclein介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞引起炎癥的機(jī)制尚不十分明確。清道夫受體Marco (Scavenger receptor Marco, SR-Marco)在活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上大量表達(dá),可與Aβ、LPS等結(jié)合引起炎癥反應(yīng)。為此,我們推測(cè)α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞可能與SR-Marco有關(guān)。本研究用α-synuclein (A53T)刺激原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化及SR-Marco在介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥中的作用,并對(duì)由此引起的相關(guān)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化進(jìn)行探討。研究發(fā)現(xiàn)α-synuclein (A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞48h后,可明顯提高膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acid protein, GFAP)和SR-Marco的表達(dá),TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯提高。通過(guò)SR-Marco小干擾RNA (Small interfering RNA, siRNA)沉默SR-Marco后,GFAP的表達(dá)明顯降低,TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯降低。我們進(jìn)一步對(duì)相關(guān)的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)α-synuclein (A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞引起IKK和IκB的磷酸化、NF-κB p65亞基的轉(zhuǎn)位入核均明顯提高,提示NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化。同時(shí)Janus激酶2(Janus kinase 2, JAK2)的表達(dá)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄活化子3(Signal transducer and transcription activator 3, STAT3)的磷酸化也明顯提高。沉默SR-Marco后,NF-κB和JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到明顯抑制。綜上所述,SR-Marco參與了α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞引起的神經(jīng)炎癥,提示SR-Marco可能是治療神經(jīng)炎癥引起的神經(jīng)退行性疾病如PD的藥物靶點(diǎn)。第二部分：清道夫受體Marco在a-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究帕金森氏病(Parkinson's disease, PD)是一種與衰老密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病,神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞激活引起的炎癥是PD發(fā)病的重要原因。星形膠質(zhì)細(xì)胞作為腦中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞,可被a-突觸核蛋白(a-synuclein)等刺激因子激活,將感知的信號(hào)傳遞給神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞,在PD發(fā)生中處于重要地位。但a-synuclein介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞引起炎癥的機(jī)制尚不十分明確。清道夫受體Marco (Scavenger receptor Marco, SR-Marco)在活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上大量表達(dá),可與Aβ、LPS等結(jié)合引起炎癥反應(yīng)。為此,我們推測(cè)α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞可能與SR-Marco有關(guān)。本研究用α-synuclein (A53T)刺激原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞,觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化及SR-Marco在介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥中的作用,并對(duì)由此引起的相關(guān)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的變化進(jìn)行探討。研究發(fā)現(xiàn)α-synuclein (A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞48h后,可明顯提高膠質(zhì)纖維酸性蛋白(Glial fibrillary acid protein, GFAP)和SR-Marco的表達(dá),TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯提高。通過(guò)SR-Marco小干擾RNA (Small interfering RNA, siRNA)沉默SR-Marco后,GFAP的表達(dá)明顯降低,TNF-α、IL-1β、Cox-2的含量和iNOS的活性也明顯降低。我們進(jìn)一步對(duì)相關(guān)的炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)α-synuclein (A53T)刺激星形膠質(zhì)細(xì)胞引起IKK和IκB的磷酸化、NF-κB p65亞基的轉(zhuǎn)位入核均明顯提高,提示NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化。同時(shí)Janus激酶2(Janus kinase 2, JAK2)的表達(dá)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄活化子3(Signal transducer and transcription activator 3, STAT3)的磷酸化也明顯提高。沉默SR-Marco后,NF-κB和JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到明顯抑制。綜上所述,SR-Marco參與了α-synuclein激活星形膠質(zhì)細(xì)胞引起的神經(jīng)炎癥,提示SR-Marco可能是治療神經(jīng)炎癥引起的神經(jīng)退行性疾病如PD的藥物靶點(diǎn)。第三部分：FLZ通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥減輕側(cè)腦室注射LPS引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙LPS是革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分,可作為炎性刺激物引起機(jī)體的免疫反應(yīng)。我們課題組已畢業(yè)龐紅艷同學(xué)的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),FLZ能顯著抑制側(cè)腦室注射LPS引起的神經(jīng)炎癥的發(fā)生,從而減輕炎癥反應(yīng)引起的學(xué)習(xí)記憶功能損傷。通道式水迷宮實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)均能檢測(cè)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力,在龐紅艷同學(xué)的實(shí)驗(yàn)中選用的是通道式水迷宮檢測(cè)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,而經(jīng)典的Morris水迷宮對(duì)于動(dòng)物而言學(xué)習(xí)過(guò)程較為簡(jiǎn)單,能更敏感地反映出動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶能力,因此兩種水迷宮最好結(jié)合使用,以便得到更客觀的結(jié)果。在本實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步采用Morris水迷宮進(jìn)行學(xué)習(xí)記憶方面測(cè)定,以比較兩種方法的異同,從而得到更為客觀的結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),FLZ對(duì)側(cè)腦室注射LPS誘發(fā)的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙具有明顯的改善作用,同時(shí)可明顯降低TNF-α的含量和抑制AChE的活性。
【關(guān)鍵詞】：阿爾茲海默氏病 化合物WYD1-8和WYD7-6 β-淀粉樣蛋白 神經(jīng)炎癥 帕金森氏病 星形膠質(zhì)細(xì)胞 清道夫受體Marco α-突觸核蛋白 脂多糖 神經(jīng)炎癥 FLZ Morris水迷宮
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R965
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 第一部分 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)β-淀粉樣蛋白致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用13-41
• 前言13
• 材料與方法13-20
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-33
• 1. 化合物WYD1-8和WYD7-6改善Aβ_(1-42)誘發(fā)的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙20-22
• 2. 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)側(cè)腦室注射Aβ_(1-42)小鼠海馬膽堿能系統(tǒng)的影響22-23
• 3. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的炎癥反應(yīng)23-26
• 3.1. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞的活化23-25
• 3.2. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的炎癥因子和炎癥蛋白的釋放25-26
• 4. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)26
• 5. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的凋亡反應(yīng)26-30
• 5.1. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的Caspase-3活性的升高26-27
• 5.2. 化合物WYD1-8和WYD7-6抑制Aβ_(1-42)引起的凋亡蛋白的表達(dá)27-28
• 5.3. 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)側(cè)腦室注射Aβ_(1-42)小鼠海馬神經(jīng)元的影響(尼氏和TUNEL染色)28-30
• 6. 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)炎癥信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響30-33
• 6.1. 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響30-31
• 6.2. 化合物WYD1-8和WYD7-6對(duì)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響31-33
• 討論33-35
• 小結(jié)35-37
• 參考文獻(xiàn)37-41
• 第二部分 清道夫受體Marco在α-synuclein引起神經(jīng)炎癥中的作用和機(jī)制研究41-62
• 前言41
• 材料與方法41-46
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-56
• 1. α-synuclein(A53T)對(duì)原代培養(yǎng)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活作用46-48
• 2. α-synuclein(A53T)提高星形膠質(zhì)細(xì)胞SR-Marco的表達(dá)48-50
• 3. SR-Marco在星形膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)神經(jīng)炎癥中的作用50-53
• 4. α-synuclein(A53T)通過(guò)激活SR-Marco影響細(xì)胞內(nèi)NF-κB和JAK2/STAT3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路53-56
• 討論56-58
• 小結(jié)58-59
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 第三部分 FLZ通過(guò)抑制神經(jīng)炎癥減輕側(cè)腦室注射LPS引起的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙62-72
• 前言62
• 材料與方法62-65
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果65-68
• 1. FLZ改善LPS誘發(fā)的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙65
• 2. FLZ抑制LPS引起的TNF-α的釋放65-66
• 3. FLZ對(duì)側(cè)腦室注射LPS小鼠海馬膽堿能系統(tǒng)的影響66-68
• 討論68-69
• 小結(jié)69-70
• 參考文獻(xiàn)70-72
• 文獻(xiàn)綜述72-82
• 參考文獻(xiàn)79-82
• 致謝82-84
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷84-85

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 Yan Qiu;Shan Liu;Hong-Tan Chen;Chao-Hui Yu;Xiao-Dong Teng;Hong-Tian Yao;Guo-Qiang;;Upregulation of caveolin-1 and SR-B1 in mice with non-alcoholic fatty liver disease[J];Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International;2013年06期

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本文編號(hào)：588413