本文關鍵詞：染料木黃酮對宿主和HCMV編碼的IE基因相關microRNA表達的影響

  更多相關文章： 人巨細胞病毒 人星形膠質細胞 染料木黃酮 染色質免疫共沉淀 microRNA

【摘要】：目的:1應用染料木黃酮(genistein,Gen)作藥物,探討在人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人星形膠質細胞(human astrocyte,AS)中,Gen對HCMV IE基因的作用及對與主要即刻早期啟動子(major immediate early promoter,MIEP)結合的組蛋白H3乙�；挠绊�。2探討宿主和HCMV的micro RNA(mi RNA)在Gen抗HCMV感染AS中的作用。方法:1 ASs由人神經干細胞(human neural stem cell,NSC)分化而來,HCMV于人胚肺中(human embryonic lung fibroblast,HELFs)擴增,TCID50法測其滴度。2 Cell counting kit-8(CCK-8)實驗測不同藥物濃度下的細胞活性與細胞毒性,以選出合適的藥物濃度。3 RT-q PCR測IE1、IE2基因及細胞mi RNA200家族、病毒mi R-UL112的表達變化。4染色質免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation assay,Ch IP)檢測與HCMV MIEP結合的組蛋白H3乙�；母淖�。結果:1 CCK-8結果顯示,10μmol/L G+V組的cck-8值均高于同時間組的V組。2形態(tài)學觀察,G組與對照組無明顯差別,V組細胞病變明顯,V+G組與G+V組的細胞狀態(tài)相對V組要好,先加藥的G+V組的細胞狀態(tài)相對后加藥的V+G組要好。3 RT-q PCR結果表明,同V組相比,10μmol/L G+V與V+G組會降低IE1、IE2基因的表達。4 RT-q PCR結果表明,同V組相比,10μmol/L G+V與V+G組能逆轉部分hsami R-200 mi RNA家族及mi R-UL112的下降。5 Ch IP結果顯示,10μmol/L G+V與V+G組會降低MIEP結合的組蛋白H3的乙酰化。結論:1 10μmol/L的Gen能一定程度抑制HCMV感染AS所致的增殖異常。2 Gen能一定程度抑制IE1、IE2基因的表達,降低病毒MIEP結合的組蛋白H3的乙�；�,并能逆轉部分宿主hsa-mi R200家族及病毒mi R-UL112的下調。Gen可能通過這些作用機理,實現(xiàn)了其抑制病毒IE蛋白的效應。
【關鍵詞】：人巨細胞病毒 人星形膠質細胞 染料木黃酮 染色質免疫共沉淀 microRNA
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 實驗材料9-13
• 1.1 細胞9
• 1.2 病毒9
• 1.3 藥物9
• 1.4 實驗儀器及設備9-10
• 1.5 主要實驗試劑10-11
• 1.6 主要試劑配制11-13
• 第二章 實驗方法13-25
• 2.1 取材與細胞培養(yǎng)13-15
• 2.2 病毒制備15-16
• 2.3 實驗分組16
• 2.4 CCK-8 實驗16-17
• 2.5 RT-qPCR測IE1、IE2基因及細胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表達變化17-22
• 2.6 ChIP實驗22-24
• 2.7 統(tǒng)計學分析24-25
• 第三章 結果25-34
• 3.1 細胞培養(yǎng)與擴病毒25-27
• 3.2 CCK-8 實驗27-28
• 3.3 形態(tài)學觀測28-29
• 3.4 RT-qPCR檢測IE1、IE2基因的表達變化29-30
• 3.5 RT-qPCR檢測細胞miRNA200家族、病毒miR-UL112的表達變化30-33
• 3.6 ChIP實驗33-34
• 第四章 討論34-37
• 參考文獻37-40
• 文獻綜述40-52
• 參考文獻47-52
• 攻讀學位期間的研究成果52-53
• 致謝53-54

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