發(fā)布時(shí)間：2017-07-19 07:06

  本文關(guān)鍵詞：葡萄糖剝奪通過上調(diào)ATF4誘導(dǎo)結(jié)直腸癌耐藥的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的:化療耐藥是腫瘤化療失敗的主要原因之一。最近研究表明腫瘤微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展與腫瘤耐藥中起到重要的作用。腫瘤微環(huán)境發(fā)生改變,如缺氧、葡萄糖剝奪(glucose deprivation,GD),可以促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展與耐藥。然而,人們關(guān)于GD誘導(dǎo)結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)耐藥的機(jī)制知之甚少。因此,我們探討了GD在CRC細(xì)胞耐藥中的作用和內(nèi)在機(jī)制。方法:在GD的條件下檢測(cè)CRC細(xì)胞的耐藥與調(diào)亡。在GD處理CRC的細(xì)胞和轉(zhuǎn)錄激活因子4(activating transcription factor 4,ATF4)過表達(dá)的CRC細(xì)胞中,通過sh RNA敲降A(chǔ)TF4,探討ATF4在GD誘導(dǎo)耐藥中的作用。通過q RT-PCR和Western blotting檢測(cè)MDR1 m RNA和蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果:在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)GD能夠保護(hù)CRC細(xì)胞抵制抗腫瘤藥奧沙利鉑(oxaliplatin,LOHP)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,并且誘導(dǎo)未折疊蛋白反應(yīng)中重要的基因ATF4表達(dá)。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)在GD處理CRC細(xì)胞中敲降A(chǔ)TF4可以促進(jìn)藥敏、誘導(dǎo)凋亡。同樣,在ATF4過表達(dá)的CRC細(xì)胞中敲降A(chǔ)TF4也可以促進(jìn)藥敏與誘導(dǎo)凋亡。除此之外,MDR1表達(dá)上調(diào)在GD處理CRC的細(xì)胞中。結(jié)論:GD通過上調(diào)ATF4促進(jìn)CRC細(xì)胞耐藥,ATF4可作為抵抗CRC細(xì)胞耐藥的作用新靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：葡萄糖剝奪 ATF4 LOHP 5-FU 化療耐藥
【學(xué)位授予單位】：江南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 縮寫詞表7-8
• 第一章 前言8-16
• 1.1 研究背景8-9
• 1.2 綜述9-14
• 1.2.1 UPR與腫瘤10-12
• 1.2.2 UPR與腫瘤耐藥12-13
• 1.2.3 UPR相關(guān)其他的信號(hào)通路參與腫瘤耐藥13-14
• 1.2.4 結(jié)語14
• 1.3 研究意義14-15
• 1.4 研究?jī)?nèi)容15-16
• 第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑16
• 2.1.2 儀器與耗材16-17
• 2.1.3 細(xì)胞株17
• 2.1.4 質(zhì)粒、引物、抗體17-18
• 2.1.5 主要試劑配制18-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)20
• 2.2.2 質(zhì)粒擴(kuò)增20
• 2.2.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建20-21
• 2.2.4 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染21
• 2.2.5 CCK-8 測(cè)藥敏21-23
• 2.2.6 Hochest染色測(cè)凋亡23
• 2.2.7 qRT-PCR23-25
• 2.2.8 Western blot25
• 2.2.9 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)凋亡25-26
• 2.2.10 CCK-8 測(cè)增殖26-27
• 2.2.11 統(tǒng)計(jì)分析27-28
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論28-39
• 3.1 GD誘導(dǎo)CRC細(xì)胞耐藥28-30
• 3.1.1 GD誘導(dǎo)CRC細(xì)胞耐藥28-29
• 3.1.2 GD抵抗抗腫瘤藥誘導(dǎo)的CRC細(xì)胞凋亡29
• 3.1.3 GD誘導(dǎo)CRC細(xì)胞耐藥基因的表達(dá)29-30
• 3.2 GD激活CRC細(xì)胞中Grp78/PERK/ATF4通路30-31
• 3.3 GD通過上調(diào)ATF4誘導(dǎo)CRC細(xì)胞耐藥31-34
• 3.3.1 敲降A(chǔ)TF4能逆轉(zhuǎn)GD誘導(dǎo)的CRC細(xì)胞耐藥31-32
• 3.3.2 敲降A(chǔ)TF4能逆轉(zhuǎn)GD誘導(dǎo)的CRC細(xì)胞抗凋亡32-34
• 3.3.3 在GD處理的CRC細(xì)胞中敲降A(chǔ)TF4導(dǎo)致耐藥基因的表達(dá)下調(diào)34
• 3.4 敲降A(chǔ)TF4增加CRC細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性和促進(jìn)藥物誘導(dǎo)的凋亡34-36
• 3.4.1 敲降A(chǔ)TF4增加CRC細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性34-35
• 3.4.2 敲降A(chǔ)TF4能促進(jìn)藥物誘導(dǎo)的凋亡35-36
• 3.4.3 敲降A(chǔ)TF4降低耐藥基因的表達(dá)36
• 3.5 ATF4促進(jìn)CRC細(xì)胞增殖36-39
• 主要結(jié)論與展望39-41
• 主要結(jié)論39
• 展望39-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附錄A：攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文46-48
• 附錄B：本研究獲得的資金資助48

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