本文關(guān)鍵詞：阿司匹林對(duì)TNF-α誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中MMP-9表達(dá)的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 阿司匹林 動(dòng)脈粥樣硬化 基質(zhì)金屬蛋白酶 巨噬細(xì)胞

【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是冠脈綜合征的病理基礎(chǔ),嚴(yán)重危害人類健康。據(jù)統(tǒng)計(jì)約有15.4萬人患有心腦血管疾病和動(dòng)脈粥樣硬化。在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展過程中伴隨炎癥的侵襲,導(dǎo)致斑塊處活化的巨噬細(xì)胞分泌大量的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),后者可以降解細(xì)胞外基質(zhì)增加心腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率�；|(zhì)金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9),是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的一員,不僅可以過度降解基底膜IV型膠原,而且促進(jìn)炎癥反應(yīng)和血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的增殖和遷移,導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定形成血栓。由巨噬細(xì)胞分泌的MMP-9是影響動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成及穩(wěn)定性的重要因素,抑制動(dòng)脈粥樣硬化炎癥細(xì)胞分泌的MMP-9的產(chǎn)生對(duì)預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化疾病的發(fā)生和發(fā)展可能是一個(gè)新的藥物靶點(diǎn)。阿司匹林是常見的非甾體抗炎藥,在預(yù)防血管動(dòng)脈硬化中發(fā)揮著重要作用。研究表明阿司匹林抑制動(dòng)脈粥樣硬化患者斑塊的血管炎癥及環(huán)氧酶-2的活性,也抑制核因子κB p65(nuclear factor,NF-κBp65)核轉(zhuǎn)錄表達(dá)。有文獻(xiàn)報(bào)道,阿司匹林穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣斑塊可能與抑制MMP-9表達(dá)有關(guān),但相關(guān)的作用機(jī)制尚未完全清楚。本文以RAW264.7細(xì)胞為研究對(duì)象,體外研究阿司匹林對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中MMP-9的表達(dá)及其可能的作用機(jī)制。目的:觀察阿司匹林對(duì)TNF-α誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中MMP-9的表達(dá),并探討其可能的作用機(jī)制。1.阿司匹林對(duì)tnf-α誘導(dǎo)raw264.7細(xì)胞中mmp-9的表達(dá)和活性影響阿司匹林(75、150、300、600μm)預(yù)處理raw264.7細(xì)胞1h,加tnf-α(10ng/ml)作用24h,應(yīng)用mtt法檢測(cè)阿司匹林對(duì)raw264.7的細(xì)胞毒性。westernblot和rt-pcr檢測(cè)阿司匹林對(duì)mmp-9蛋白和基因表達(dá)情況,明膠酶譜法檢測(cè)阿司匹林對(duì)mmp-9酶活性表達(dá)。結(jié)果顯示,不同濃度的阿司匹林對(duì)raw264.7細(xì)胞無毒性作用。阿司匹林劑量依賴性地抑制tnf-α誘導(dǎo)的raw264.7細(xì)胞中mmp-9的表達(dá)和酶活性。2.阿司匹林對(duì)mapk信號(hào)通路中各磷酸化蛋白的影響及抑制mapk信號(hào)通路后mmp-9表達(dá)的影響阿司匹林(600μm)預(yù)處理raw264.7細(xì)胞1h后,加tnf-α(10ng/ml)分別作用60min、30min、20min和10min。westernblot檢測(cè)mapk信號(hào)通路中各蛋白的表達(dá)情況:p-erk1/2、erk1/2、p-jnk、jnk、p-p38、p38。結(jié)果顯示,阿司匹林分別在20min、60min和30min降低p-erk1/2、p-p38和p-jnk蛋白的表達(dá)。erk1/2、p38和jnk非磷酸化蛋白表達(dá)無明顯變化。用特異性阻斷劑pd98059(10μm)、sb203580(10μm)和sp600125(20μm)阻斷mapk信號(hào)通路中erk1/2、p38和jnk通路。以上阻斷劑提前1h加入,再加tnf-α(10ng/ml)作用24h。應(yīng)用westernblot和q-rt-pcr檢測(cè)mmp-9的蛋白和基因表達(dá)情況。結(jié)果顯示,在mapk信號(hào)通路特異性阻斷劑存在下,mmp-9的表達(dá)明顯下降。3.阿司匹林對(duì)nf-κbp65核蛋白表達(dá)的影響及抑制nf-κb信號(hào)通路后mmp-9表達(dá)的影響用阿司匹林(75、150、300、600μ)預(yù)處理raw264.7細(xì)胞1h后,加tnf-α(10ng/ml)作用1h。應(yīng)用westernblot檢測(cè)核內(nèi)p65蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示,阿司匹林降低核內(nèi)p65蛋白的表達(dá)。用nf-κb通路特異性阻斷劑pdtc(10μm)提前預(yù)處理細(xì)胞1h后,加tnf-α(10ng/ml)作用1h,應(yīng)用westernblot和q-rt-pcr檢測(cè)mmp-9的蛋白和基因表達(dá)。結(jié)果顯示,加pdtc阻斷劑后,mmp-9的蛋白和基因表達(dá)均下降。結(jié)論:阿司匹林對(duì)細(xì)胞無毒性作用且抑制tnf-α誘導(dǎo)的raw264.7細(xì)胞中mmp-9的表達(dá)。另外,阿司匹林抑制TNF-α誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞中MMP-9表達(dá)的機(jī)制可能與調(diào)節(jié)MAPK和NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)蛋白有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：阿司匹林 動(dòng)脈粥樣硬化 基質(zhì)金屬蛋白酶 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中英文縮略詞對(duì)照5-7
• 摘要7-10
• Abstract10-13
• 前言13-14
• 1.實(shí)驗(yàn)材料14-19
• 2.實(shí)驗(yàn)方法19-31
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19
• 2.2 MTT試驗(yàn)19-21
• 2.3 PCR21-24
• 2.4 Western Blot24-29
• 2.5 明膠酶譜試劑盒檢測(cè) MMP-9 酶活性29-30
• 2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理30-31
• 3.結(jié)果31-44
• 3.1 阿司匹林對(duì)RAW264.7 細(xì)胞的毒性作用31-32
• 3.2 阿司匹林對(duì)TNF-α 誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞中MMP-9 的抑制作用32-35
• 3.3 阿司匹林對(duì)MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)35-38
• 3.4 MAPK信號(hào)通路各抑制劑對(duì)MMP-9 表達(dá)的影響38-40
• 3.5 阿司匹林對(duì)p65 蛋白表達(dá)的影響40-42
• 3.6 NF-κB通路抑制劑對(duì)MMP-9 表達(dá)的影響42-44
• 4.討論44-47
• 5.結(jié)論47
• 參考文獻(xiàn)47-54
• 附錄54-55
• 致謝55-57
• 綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)62-66

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本文編號(hào)：560706