本文關(guān)鍵詞：吉非羅齊參與細胞脂代謝調(diào)控的分子作用機制研究

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【摘要】：血脂是血漿中的中性脂肪(甘油三酯和膽固醇)和類脂(磷脂、脂、固醇、類固醇)的總稱,是細胞基礎(chǔ)代謝的必需物質(zhì)。近來,由于飲食生活不當(dāng)或者缺乏鍛煉造成的肥胖患者越來越多,由此引發(fā)的高血脂癥受到廣泛關(guān)注。常用的降脂藥物主要有膽酸結(jié)合樹脂、他汀類、煙酸類和苯氧芳酸衍生物。其中吉非羅齊屬于苯氧芳酸類,是一種較新的血脂調(diào)節(jié)劑,其作用機理主要是抑制極低密度脂蛋白(VLDL)在肝臟的合成,增加脂蛋白脂酶的活性,促進VLDL的分解代謝,從而降低TG和低密度脂蛋白的形成。但其在細胞內(nèi)對脂代謝的調(diào)控機制尚不清楚,因此我們利用模式生物酵母探究吉非羅齊在細胞內(nèi)對脂類代謝的調(diào)控機制。吉非羅齊處理野生型釀酒酵母by4741a后,與我們預(yù)測相反,TAG含量和脂滴數(shù)目均有顯著增加。然后我們逐一檢測細胞中性脂代謝通路中關(guān)鍵基因缺失(pah1△、tgl3△、tgl4△、tgl3△tgl4△、lro1△、are1△、are2△、dga1△、dgk1△等)后吉非羅齊的升脂效應(yīng),對比發(fā)現(xiàn),DGK1敲除之后細胞內(nèi)TAG和脂滴數(shù)目不再受藥物的影響。初步確定DGK1p可能是吉非羅齊細胞內(nèi)靶向調(diào)控的酶。由于DGK1p調(diào)控DAG生成PA,因此進一步檢測吉非羅齊對細胞PA含量的影響,結(jié)果表明其可以抑制DGK1p的活性。RT-PCR檢測吉非羅齊處理顯著下調(diào)DGK1的表達,并且下調(diào)依賴于轉(zhuǎn)錄因子TUP1和CYC8;隨后,實驗數(shù)據(jù)表明吉非羅齊通過TUP1p-CYC8p與DGK1啟動子-TATA-高度保守元件(-400bp—-200bp)結(jié)合起調(diào)控作用;同時,發(fā)現(xiàn)藥物也可以通過上調(diào)具有轉(zhuǎn)錄抑制作用的轉(zhuǎn)錄因子TUP1、CYC8基因的表達,增強對DGK1基因啟動子的抑制作用,從而降低DGK1基因的表達量,進而升高細胞內(nèi)TAG的含量。最后,我們對pah1△背景下酵母必需基因超表達文庫進行吉非羅齊耐受篩選鑒定,發(fā)現(xiàn)過表達NAF1、KIN28、RPL15A等能明顯提高細胞的藥物抗性,其中大部分與蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與翻譯息息相關(guān),為進一步研究吉非羅齊通過TUP1、CYC8調(diào)控DGK1對細胞內(nèi)中性脂肪代謝調(diào)節(jié)機制奠定基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：吉非羅齊 脂代謝 二酰甘油酯酶 轉(zhuǎn)錄因子
【學(xué)位授予單位】：東華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 縮略語10-11
• 1 緒論11-18
• 2 實驗設(shè)計方案18-19
• 2.1 實驗?zāi)康摹⒁饬x18
• 2.2 實驗創(chuàng)新點18
• 2.3 實驗內(nèi)容18-19
• 3. 吉非羅齊對脂質(zhì)代謝的影響19-34
• 3.1 材料與試劑19-20
• 3.2 方法20-21
• 3.3 結(jié)果21-32
• 3.4 討論32-34
• 4 吉非羅齊對DGK1蛋白表達的影響34-41
• 4.1 材料與試劑34-35
• 4.2 方法35-37
• 4.3 結(jié)果37-39
• 4.4 討論39-41
• 5 吉非羅齊對DGK1基因m RNA轉(zhuǎn)錄的影響41-58
• 5.1 材料與試劑41-42
• 5.2 方法42-49
• 5.3 結(jié)果49-57
• 5.4 討論57-58
• 6 抗吉非羅齊脅迫基因篩選58-65
• 6.1 材料與試劑58-60
• 6.2 方法60-61
• 6.3 結(jié)果61-64
• 6.4 討論64-65
• 總結(jié)65-66
• 參考文獻66-72
• 學(xué)位期間的研究成果72-73
• 致謝73

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本文編號：523032