發(fā)布時(shí)間：2017-07-02 01:09

  本文關(guān)鍵詞：人血清白蛋白-干擾素α2b融合蛋白在CHO細(xì)胞中的表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：干擾素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一種用于病毒性疾病和腫瘤性疾病治療的多功能細(xì)胞因子,因其在體內(nèi)的半衰期短限制了其在臨床上的應(yīng)用。將IFNα2b連接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,構(gòu)建融合蛋白HSA-IFNα2b。構(gòu)建含融合蛋白的真核表達(dá)質(zhì)粒p MH3/HSA-IFNa2b,經(jīng)電轉(zhuǎn)的方法轉(zhuǎn)入中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)細(xì)胞中。經(jīng)G418抗性壓力篩選和目的蛋白的表達(dá)量篩選,最終獲得一株高表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株(CHO/p MH3/HSA-IFNa2b)。表達(dá)的目的蛋白經(jīng)Western blot驗(yàn)證顯示,產(chǎn)物具有IFNα2b和HSA的雙抗原性。經(jīng)懸浮馴化穩(wěn)定后,通過批次篩選得到一株穩(wěn)定的高克隆表達(dá)株,產(chǎn)量約為65mg/L,進(jìn)一步選取高表達(dá)克隆株在懸浮馴化中不同代數(shù)進(jìn)行批次培養(yǎng),不同代數(shù)之間蛋白質(zhì)的表達(dá)量和生長情況沒有明顯的差異,獲得一株穩(wěn)定遺傳表達(dá)的單克隆細(xì)胞株,3L搖瓶的流加培養(yǎng)結(jié)果顯示,最佳發(fā)酵時(shí)間為15天,蛋白質(zhì)表達(dá)量為121mg/L。經(jīng)離心獲得的發(fā)酵液,經(jīng)兩步純化后獲得蛋白質(zhì)純度高達(dá)96.8%的目的蛋白,總回收率為22.3%。參照《中國藥典》2015版對(duì)IFNα2b的檢測(cè)方法,結(jié)果顯示,CHO表達(dá)的HSA-IFNα2b比活性為4.16×106IU/mg。首次將HSA-IFNα2b在哺乳動(dòng)物細(xì)胞CHO中構(gòu)建表達(dá),表達(dá)獲得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白。
【作者單位】： 江南大學(xué)藥學(xué)院;溫州大學(xué)生命與環(huán)境科學(xué)學(xué)院;蘇州大學(xué)唐仲英血液學(xué)研究中心;蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 人血清白蛋白 干擾素αb 中國倉鼠卵巢細(xì)胞
【基金】：“重大新藥創(chuàng)制”國家科技重大專項(xiàng)(2013ZX09102033) 國家“863”計(jì)劃(2014AA021003,2015AA020802) 國家自然科學(xué)基金(81273437)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R915;Q78
【正文快照】：

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本文編號(hào)：508081