發(fā)布時(shí)間：2017-07-01 21:15

  本文關(guān)鍵詞：多藥耐藥abcb4:EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚系的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:目前癌癥化療失敗的主要原因是多藥耐藥的產(chǎn)生,其產(chǎn)生的機(jī)制則是與ATP結(jié)合盒(ATP-binding cassette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)體家族表達(dá)增高有關(guān)。選擇新型模式生物斑馬魚作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)阿霉素(Doxorubicin,DOX)藥物暴露實(shí)驗(yàn),進(jìn)一步了解abcb4基因在腫瘤多藥耐藥中的機(jī)制。并建立Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,為最終建立斑馬魚藥物篩選模型提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將正常發(fā)育的4~16個(gè)細(xì)胞期斑馬魚胚胎隨機(jī)分為四組。分別以Eggwater,2ml/L二甲基亞砜(DMSO),10μmol DOX及含2ml/L DMSO的10μmol DOX對(duì)斑馬魚胚胎進(jìn)行暴露處理,并以Eggwater處理的胚胎作為對(duì)照組。暴露處理至120hpf,收集暴露處理下的斑馬魚不同時(shí)期胚胎運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR和胚胎原位雜交技術(shù),檢測(cè)abcb4基因在斑馬魚中的表達(dá)變化情況。同時(shí),對(duì)abcb4基因的啟動(dòng)子進(jìn)行預(yù)測(cè)、克隆,并通過(guò)熒光素酶活性檢測(cè)對(duì)啟動(dòng)子進(jìn)行活性測(cè)效。將具有活性的啟動(dòng)子,構(gòu)建入Tol2-abcb4:EGFP重組質(zhì)粒。通過(guò)轉(zhuǎn)座子Tol2系統(tǒng),建立Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,并運(yùn)用表觀分析,基因組PCR測(cè)序?qū)ζ溥M(jìn)行鑒定。結(jié)果:相較于對(duì)照組,DMOS組、DOX組以及DMSO+DOX組的斑馬魚胚胎在96,120hpf時(shí),abcb4基因m RNA表達(dá)水平均有明顯升高(p0.05),而abcb5基因m RNA表達(dá)情況則無(wú)明顯變化。通過(guò)斑馬魚胚胎原位雜交,均在斑馬魚120hpf胚胎小腸部位發(fā)現(xiàn)有abcb4基因陽(yáng)性雜交信號(hào),且藥物處理的斑馬魚胚胎在腦及心臟部位發(fā)現(xiàn)abcb4基因陽(yáng)性雜交信號(hào)。克隆的斑馬魚abcb4基因啟動(dòng)子熒光素酶活性檢測(cè)明顯高于對(duì)照組(p0.05)。建立的Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚能在腦、小腸穩(wěn)定遺傳和表達(dá)綠色熒光蛋白,且基因組PCR測(cè)序正確。結(jié)論:阿霉素能誘導(dǎo)斑馬魚abcb4基因表達(dá)水平增高,且在心臟部位有特異性增高表現(xiàn)。首次發(fā)現(xiàn)二甲基亞砜也能誘導(dǎo)增加斑馬魚abcb4基因表達(dá)水平。相較于abcb5基因,abcb4基因的表達(dá)模式更近似于人類ABCB1基因。同時(shí)成功地預(yù)測(cè)、克隆出斑馬魚abcb4基因啟動(dòng)子,并證實(shí)了其具有驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄活性。以及成功建立了Tg(abcb4:EGFP)轉(zhuǎn)基因斑馬魚系,為下一步abcb4基因在斑馬魚多藥耐藥機(jī)制中的研究,以及斑馬魚多藥耐藥性篩藥模型的建立奠定了重要實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：斑馬魚 多藥耐藥 abcb4 啟動(dòng)子 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
【學(xué)位授予單位】：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R965
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 略縮詞表9-10
• 引言10-14
• 材料與方法14-29
• 結(jié)果29-40
• 討論40-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 作者簡(jiǎn)歷59-60
• 致謝60-61
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集61

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本文編號(hào)：507504