本文關(guān)鍵詞：一種主動(dòng)靶向活化態(tài)肝星狀細(xì)胞的葉酸納米膠束的制備及功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝星狀細(xì)胞(HSC)從靜息態(tài)到活化態(tài)的轉(zhuǎn)化是促使其在肝臟中快速擴(kuò)增、大量合成和過(guò)度累積細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)、進(jìn)而導(dǎo)致肝纖維化病變的重要原因。因此抑制HSC的活化和活化態(tài)HSC的增殖是治療肝纖維化的主要靶點(diǎn)。許多抗纖維化藥物水溶性低、穩(wěn)定性差、且缺乏靶向性,在臨床使用時(shí)存在療效低下、毒副作用較高等不足。為改善藥物的治療效果,引入納米載體對(duì)藥物進(jìn)行包載；在載體上引入特異性配體以提供藥物的主動(dòng)靶向性,從而以降低藥物對(duì)正常組織和細(xì)胞的毒副作用。為制備特異性靶向活化態(tài)HSC的納米載送藥物體系,我們首次嘗試了以葉酸分子和聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(PEG-PCL)兩親性嵌段聚合物進(jìn)行偶聯(lián)來(lái)制備主動(dòng)靶向活化態(tài)HSC的納米膠束。通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)成功驗(yàn)證了其對(duì)活化態(tài)HSC的特異靶向性；最后利用該載體包載藥物喜樹(shù)堿(CPT),實(shí)現(xiàn)了其對(duì)活化態(tài)HSC的增殖和肌纖維樣表型的抑制作用。首先,我們合成了FA-PEG-PCL兩親性聚合物,并利用溶劑揮發(fā)法制備了聚合物納米膠束。隨后通過(guò)1HNMR, FT-IR,DLS,TEM等對(duì)聚合物材料和膠束的理化性質(zhì)進(jìn)行了考察,證實(shí)材料結(jié)構(gòu)符合預(yù)期,膠束粒徑形貌均一,且穩(wěn)定性良好。對(duì)空白膠束的細(xì)胞和血液相容性進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明所制備的空白膠束載體具有優(yōu)異的生物相容性。其次,通過(guò)熒光顯微鏡觀察和流式細(xì)胞儀分析,研究了活化態(tài)肝星狀細(xì)胞對(duì)包載尼羅紅熒光染料的納米膠束的細(xì)胞攝取情況。我們首次證實(shí)大鼠活化態(tài)肝星狀細(xì)胞株(HSC-T6)和原代大鼠活化態(tài)HSC對(duì)偶聯(lián)葉酸的納米膠束具有更高的細(xì)胞攝取行為,表明納米膠束所偶聯(lián)的葉酸配體可有效地促進(jìn)活化態(tài)HSC對(duì)納米膠束載體的吞噬。隨后,我們將載尼羅紅的納米膠束通過(guò)尾靜脈注射入四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠、進(jìn)一步考察納米膠束在小鼠體內(nèi)的組織分布。結(jié)果發(fā)現(xiàn),偶聯(lián)葉酸的納米膠束在藥物損傷的小鼠肝臟中有更高的富集。這些體內(nèi)體外的實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示偶聯(lián)葉酸的納米膠束可以有效地主動(dòng)靶向活化態(tài)的HSC和其富集的肝纖維化部位。最后,我們制備了載喜樹(shù)堿的納米膠束并對(duì)理化性質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。體外藥物釋放顯示納米膠束具有一定的pH響應(yīng)性和藥物緩釋功能。體外細(xì)胞毒性和基因分析結(jié)果顯示相比于未偶聯(lián)葉酸的載藥膠束,偶聯(lián)葉酸的載藥膠束對(duì)活化態(tài)HSC的增殖和肝纖維化標(biāo)志基因(α-Sma, Collagen lal)的表達(dá)呈現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制效果。這些結(jié)果表明偶聯(lián)葉酸配體的載喜樹(shù)堿納米膠束是一種新型潛在的用于肝纖維化治療的納米藥物系統(tǒng)。
【關(guān)鍵詞】：葉酸 膠束 主動(dòng)靶向 活化態(tài)肝星狀細(xì)胞 喜樹(shù)堿
【學(xué)位授予單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R943
【目錄】：

• 摘要7-8
• Abstract8-13
• 第1章 緒論13-25
• 1.1 引言13
• 1.2 肝纖維化概述13-14
• 1.3 肝纖維化的治療策略14-16
• 1.4 活化態(tài)肝星狀細(xì)胞是肝纖維化形成的中心環(huán)節(jié)16-17
• 1.5 用于治療肝纖維化的納米藥物載體研究進(jìn)展17-20
• 1.5.1 納米載體概述17-18
• 1.5.2 用于治療活化態(tài)肝星狀細(xì)胞的納米載體18-20
• 1.6 偶聯(lián)葉酸配體的納米載體研究進(jìn)展20-22
• 1.6.1 葉酸配體在納米藥物載體研制上的應(yīng)用20-21
• 1.6.2 偶聯(lián)葉酸配體的納米膠束的研究進(jìn)展21-22
• 1.7 課題的提出和研究思路22-25
• 第2章 兩親性聚合物膠束的合成及表征25-36
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑25-26
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器26
• 2.2 兩親性聚合物的合成26-29
• 2.2.1 單端Boc保護(hù)的單羧基化聚乙二醇的合成27-28
• 2.2.2 單端Boc保護(hù)的聚己內(nèi)酯的合成28
• 2.2.3 聚乙二醇-聚己內(nèi)酯聚合物的合成28
• 2.2.4 偶聯(lián)葉酸的聚乙二醇-聚己內(nèi)酯聚合物的合成28-29
• 2.3 聚合物材料的表征29
• 2.3.1 核磁共振氫譜(~1H-NMR)29
• 2.3.2 傅里葉變換紅外光譜(FTIR)29
• 2.4 膠束的制備及表征29-31
• 2.4.1 聚合物膠束的制備29-30
• 2.4.2 膠束的粒徑測(cè)定30
• 2.4.3 膠束的形貌測(cè)定30
• 2.4.4 臨界膠束濃度(CMC)測(cè)定30
• 2.4.5 膠束穩(wěn)定性測(cè)試30-31
• 2.5 結(jié)果與討論31-35
• 2.5.1 聚合物材料的表征31-33
• 2.5.2 膠束的粒徑和形貌考察33-34
• 2.5.3 聚合物膠束的CMC表征34-35
• 2.5.4 聚合物膠束穩(wěn)定性考察35
• 2.6 本章小結(jié)35-36
• 第3章 兩親性聚合物膠束生物學(xué)表征36-53
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料36-38
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑36-37
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器37
• 3.1.3 細(xì)胞模型及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物37-38
• 3.2 空白膠束生物相容性評(píng)價(jià)38
• 3.2.1 空白膠束細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)38
• 3.2.2 空白膠束溶血率實(shí)驗(yàn)38
• 3.3 載尼羅紅膠束制備及表征38-39
• 3.3.1 載尼羅紅膠束制備38-39
• 3.3.2 載尼羅紅膠束的載藥量及包封率39
• 3.3.3 載尼羅紅膠束的體外藥物釋放39
• 3.4 A549細(xì)胞和海拉細(xì)胞對(duì)載尼羅紅膠束的吞噬研究39-40
• 3.4.1 腫瘤細(xì)胞吞噬載尼羅紅膠束的熒光顯微鏡觀察39-40
• 3.4.2 腫瘤細(xì)胞吞噬載尼羅紅膠束的流式細(xì)胞儀分析40
• 3.5 HSC-T6、原代HSC及HC細(xì)胞對(duì)載尼羅紅膠束的吞噬研究40-41
• 3.5.1 HSC-T6細(xì)胞吞噬載尼羅紅膠束的熒光觀察及流式細(xì)胞儀分析40
• 3.5.2 原代HSC和原代HC細(xì)胞分離和培養(yǎng)40-41
• 3.5.3 原代HSC和HC細(xì)胞吞噬載尼羅紅膠束的熒光觀察41
• 3.6 載尼羅紅膠束體內(nèi)靶向性研究41-45
• 3.6.1 小鼠急性肝損傷模型的建立41
• 3.6.2 QRT-PCR基因表達(dá)分析41-43
• 3.6.3 Western Blotting蛋白表達(dá)分析43-45
• 3.6.4 組織學(xué)染色分析45
• 3.6.5 尼羅紅體內(nèi)組織分布45
• 3.6.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析45
• 3.7 結(jié)果與討論45-52
• 3.7.1 空白膠束生物相容性考察45-46
• 3.7.2 載尼羅紅膠束的表征46-47
• 3.7.3 載尼羅紅膠束體外靶向性研究47-50
• 3.7.4 小鼠急性肝損傷模型評(píng)價(jià)50-51
• 3.7.5 載尼羅紅膠束體內(nèi)靶向性研究51-52
• 3.8 本章小結(jié)52-53
• 第4章 載喜樹(shù)堿膠束對(duì)活化態(tài)肝星狀細(xì)胞的生物學(xué)評(píng)價(jià)53-59
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料53-54
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑53
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器53-54
• 4.1.3 細(xì)胞模型54
• 4.2 載喜樹(shù)堿的兩親性聚合物膠束的制備及表征54-55
• 4.2.1 載喜樹(shù)堿膠束的制備54
• 4.2.2 載喜樹(shù)堿膠束的粒徑及形貌考察54
• 4.2.3 載喜樹(shù)堿膠束的載藥量及包封率54
• 4.2.4 載喜樹(shù)堿膠束的體外藥物釋放54-55
• 4.3 喜樹(shù)堿及載藥膠束對(duì)HSC-T6細(xì)胞的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)55
• 4.4 喜樹(shù)堿及載藥膠束對(duì)HSC-T6細(xì)胞的基因表達(dá)影響實(shí)驗(yàn)55
• 4.5 結(jié)果與討論55-58
• 4.5.1 載喜樹(shù)堿膠束的表征55-57
• 4.5.2 裸藥及載藥膠束對(duì)HSC-T6細(xì)胞的毒性考察57
• 4.5.3 裸藥及載藥膠束對(duì)HSC-T6細(xì)胞的基因表達(dá)影響分析57-58
• 4.6 本章小結(jié)58-59
• 結(jié)論59-60
• 致謝60-61
• 參考文獻(xiàn)61-68
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文68-69
• 常用縮略詞一覽表69-70

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張蕓;陳邦濤;邢媛;張國(guó)英;劉明社;趙中夫;;抗HMGB1抗體對(duì)小鼠肝纖維化的保護(hù)作用[J];長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2015年04期

2 Jian-Lan Yu;Jun-Hua Li;Rong-Gui Cheng;Yan-Mei Ma;Xiao-Juan Wang;Jing-Chun Liu;;Effect of matrine on transforming growth factor β1 and hepatocyte growth factor in rat liver fibrosis model[J];Asian Pacific Journal of Tropical Medicine;2014年05期

3 張明野;李明嬌;梁起嵐;劉紅梅;吳琳華;紀(jì)宏宇;;葉酸介導(dǎo)的納米給藥系統(tǒng)抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥師;2014年01期

4 郭曉鵬;馮思良;王金輝;俞騰飛;;拓?fù)洚悩?gòu)酶1及其喜樹(shù)堿類(lèi)抑制劑的臨床研究進(jìn)展[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2013年04期

5 梁潤(rùn)成;黃志軍;李桃;楊帆;;pH響應(yīng)納米遞藥系統(tǒng)在逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性方面的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2012年20期

6 代魯平;宋春霞;邵先祥;張耀;;抗癌藥物喜樹(shù)堿類(lèi)衍生物的研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2010年23期

7 袁釗;曾毅;陳金平;李迎迎;韓永濱;李Z，

本文編號(hào)：497801