發(fā)布時(shí)間：2017-06-28 06:04

  本文關(guān)鍵詞：基于細(xì)胞阻抗傳感技術(shù)的腫瘤耐藥性評(píng)估研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肺癌是臨床最常見(jiàn)的惡性腫瘤,化學(xué)治療作為全身性治療的手段,在惡性腫瘤的治療中具有手術(shù)和放療治療不可替代的地位,細(xì)胞的體外篩選方法是臨床前篩選抗腫瘤藥物的有效方法,而最常用的MTT法為終點(diǎn)測(cè)試,不能連續(xù)、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),存在一定局限性。細(xì)胞電阻抗傳感技術(shù)可在近似生理環(huán)境下通過(guò)測(cè)量細(xì)胞和微電極之間電阻抗的改變來(lái)動(dòng)態(tài)地記錄細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性和細(xì)胞形態(tài)的變化,具有無(wú)需標(biāo)記,非侵害性、實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)、高靈敏度、高通量的優(yōu)點(diǎn)。本研究擬建立一種利用細(xì)胞電阻抗傳感技術(shù)進(jìn)行體外藥物篩選與評(píng)價(jià)的新方法,并應(yīng)用于薊賓磷脂增溶微粒逆轉(zhuǎn)A549/PTX細(xì)胞株耐藥性的評(píng)價(jià)。本研究以肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549和大細(xì)胞肺癌細(xì)胞系NCI-H460為實(shí)驗(yàn)用腫瘤細(xì)胞,首先通過(guò)考察不同的細(xì)胞接種量與吸光度的線性關(guān)系,驗(yàn)證MTT法測(cè)定準(zhǔn)確性,然后利用MTT法測(cè)定A549和NCI-H460兩株細(xì)胞對(duì)紫杉醇注射液、多西他賽注射液、長(zhǎng)春瑞濱注射液及注射用培美曲塞二鈉及順鉑注射液的敏感性。兩株細(xì)胞對(duì)紫杉醇注射液及多西他賽注射液均敏感,且隨著藥物濃度的增加,細(xì)胞抑制率有所增加;A549細(xì)胞株對(duì)長(zhǎng)春瑞濱注射液及注射用培美曲塞二鈉的敏感性較差,而NCI-H460細(xì)胞株對(duì)兩種藥物呈中度敏感,但隨著藥物濃度的增加,兩株細(xì)胞的抑制率均無(wú)明顯變化;在順鉑注射液的作用下,A549細(xì)胞株的抑制率隨著藥物濃度增加而增加,NCI-H460細(xì)胞株的抑制率隨著藥物濃度增加無(wú)明顯變化。通過(guò)細(xì)胞電阻抗傳感技術(shù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)方法和MTT方法分別測(cè)定紫杉醇注射液、多西他賽注射液、長(zhǎng)春瑞濱注射液和注射用培美曲塞二鈉4種抗腫瘤藥對(duì)人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NCI-H460生長(zhǎng)的影響,借助配對(duì)t檢驗(yàn)、組內(nèi)相關(guān)系數(shù)以及Bland-Altman法等數(shù)據(jù)分析方法對(duì)兩種方法所測(cè)得抑制率進(jìn)行一致性綜合評(píng)價(jià),結(jié)合電子顯微鏡下細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察,佐以人肺癌腺細(xì)胞株A549的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),評(píng)估所建立的新方法。結(jié)果顯示ECIS法可定性定量地表征不同藥物對(duì)NCI-H460細(xì)胞和A549細(xì)胞作用的過(guò)程動(dòng)態(tài)信息,反映不同藥物作用特征性差異,以細(xì)胞指數(shù)-作用時(shí)間關(guān)系表征的細(xì)胞動(dòng)態(tài)生物反應(yīng)譜可靈敏地反映藥物抑制NCI-H460細(xì)胞的動(dòng)態(tài)特征效應(yīng)信息,同時(shí)抑制率數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示兩種方法一致性較好,電子顯微鏡下不同時(shí)期NCI-H460細(xì)胞形態(tài)及A549細(xì)胞株的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步說(shuō)明該方法的可行性,提示所建立的基于細(xì)胞電阻抗分析方法可用于體外藥物篩選與評(píng)價(jià)。將水飛薊素、卵磷脂及其他輔料制成薊賓磷脂增溶微粒,首先對(duì)其進(jìn)行外觀及溶解度等質(zhì)量評(píng)價(jià),然后利用實(shí)時(shí)細(xì)胞電阻抗法檢測(cè)其細(xì)胞毒性,篩選對(duì)A549/PTX細(xì)胞株抑制率小于20%的劑量,將該劑量用于逆轉(zhuǎn)A549/PTX細(xì)胞株的耐藥性研究,利用實(shí)時(shí)細(xì)胞電阻抗法檢測(cè)A549及A549/PTX兩株細(xì)胞在紫杉醇作用下的生物反應(yīng)譜及抑制率,A549/PTX細(xì)胞株對(duì)紫杉醇的敏感性顯著低于A549株,呈現(xiàn)出較強(qiáng)的耐藥性,在一定濃度紫杉醇的作用下,兩株細(xì)胞的生物反應(yīng)譜均呈類似的峰谷趨勢(shì)。當(dāng)在耐藥細(xì)胞株中加入薊賓磷脂增溶微粒后,生物反應(yīng)譜也呈峰谷趨勢(shì),但達(dá)峰值時(shí)間前移了約5h,抑制率也所有增加,說(shuō)明薊賓磷脂增溶微粒對(duì)逆轉(zhuǎn)A549/PTX細(xì)胞株的耐藥性有一定的作用。
【關(guān)鍵詞】：非小細(xì)胞肺癌 細(xì)胞電阻抗傳感技術(shù)(ECIS) MTT 耐藥性 逆轉(zhuǎn)劑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略詞表6-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 第一章 前言12-17
• 1.1 細(xì)胞電阻抗傳感技術(shù)研究現(xiàn)狀12-14
• 1.1.1 藥效評(píng)價(jià)研究12-13
• 1.1.2 細(xì)胞毒性試驗(yàn)研究13-14
• 1.2 水飛薊素研究現(xiàn)狀14-15
• 1.3 抗腫瘤藥物臨床耐藥與個(gè)體化檢測(cè)方法現(xiàn)狀15
• 1.4 本課題研究的基本思路15-17
• 第二章 MTT法測(cè)定非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性17-28
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 2.1.1 主要儀器及材料17
• 2.1.2 抗腫瘤藥物及主要試劑17-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-20
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)19
• 2.2.2 MTT法準(zhǔn)確性考察19
• 2.2.3 不同藥物對(duì)肺癌細(xì)胞的敏感性測(cè)定19-20
• 2.3.結(jié)果與討論20-26
• 2.3.1 MTT法準(zhǔn)確性考察20-21
• 2.3.2 不同抗腫瘤藥物對(duì)A549細(xì)胞株的藥敏結(jié)果21-23
• 2.3.3 不同抗腫瘤藥物對(duì)NCI-H460細(xì)胞株的藥敏結(jié)果23-25
• 2.3.4 抗腫瘤藥物對(duì)肺癌細(xì)胞的作用特性25-26
• 2.4 小結(jié)26-28
• 第三章 基于實(shí)時(shí)電阻抗傳感技術(shù)進(jìn)行非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞的體外藥物篩選研究28-52
• 3.1.實(shí)驗(yàn)材料29-31
• 3.1.1 主要儀器及材料29
• 3.1.2 抗腫瘤藥物及主要試劑29-31
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)31
• 3.2.2 細(xì)胞接種量及加藥時(shí)間的確定31-32
• 3.2.3 ECIS法檢測(cè)32
• 3.2.4 MTT法檢測(cè)32-33
• 3.2.5 顯微檢測(cè)33
• 3.2.6 ECIS法和MTT法一致性評(píng)價(jià)33
• 3.2.7 數(shù)據(jù)分析33
• 3.3 結(jié)果與討論33-50
• 3.3.1 細(xì)胞接種量和加藥時(shí)間的確定33-34
• 3.3.2 不同抗腫瘤藥物對(duì)NCI-H460細(xì)胞株和A549細(xì)胞株生長(zhǎng)的細(xì)胞動(dòng)態(tài)生物反應(yīng)譜34-38
• 3.3.3 細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)觀察38-40
• 3.3.4 ECIS法與MTT法一致性評(píng)價(jià)40-50
• 3.4 小結(jié)50-52
• 第四章 薊賓磷脂增溶微粒逆轉(zhuǎn)A549/PTX耐藥性研究52-69
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料53-54
• 4.1.1 主要儀器及材料53-54
• 4.1.2 抗腫瘤藥物及主要試劑54
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法54-58
• 4.2.1 薊賓磷脂增溶微粒的制備54-55
• 4.2.2 薊賓磷脂增溶微粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)55-56
• 4.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)56
• 4.2.4 薊賓磷脂增溶微粒對(duì)A549/PTX的毒性實(shí)驗(yàn)56-57
• 4.2.5 薊賓磷脂增溶微粒逆轉(zhuǎn)A549/PTX細(xì)胞株的耐藥性57-58
• 4.3 結(jié)果與討論58-67
• 4.3.1 薊賓磷脂增溶微粒的質(zhì)量評(píng)價(jià)58-64
• 4.3.2 薊賓磷脂增溶微粒對(duì)A549/PTX的毒性實(shí)驗(yàn)64
• 4.3.3 薊賓磷脂增溶微粒逆轉(zhuǎn)A549/PTX細(xì)胞株的耐藥性64-67
• 4.4 小結(jié)67-69
• 結(jié)論69-71
• 參考文獻(xiàn)71-76
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷76-77
• 致謝77

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