本文關(guān)鍵詞：多肽修飾的聯(lián)吡啶釕脂質(zhì)體的制備、表征以及抗腫瘤作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前癌癥仍是影響人類健康長壽的大敵,其中,腦膠質(zhì)瘤的治愈率一直很低。傳統(tǒng)的手術(shù)治療很難徹底根除腫瘤組織,化療是必要的輔助治療手段。然而由于血腦屏障(Blood brain barrier, BBB)的存在,一方面化療藥物很難入腦,另一方面藥物入腦后容易對正常腦組織產(chǎn)生毒副作用。因此如何克服透過血腦屏障以及降低藥物毒性,提高藥物抗腫瘤療效是亟待解決的問題�；谝陨蠁栴},本文主要從兩個(gè)方面入手：第一、合成兩種具有廣譜抗腫瘤作用的多吡啶釘配合物作為研究的前體藥物,并用脂質(zhì)體包裹以期降低藥物毒性。因?yàn)獒斉湮换衔锞哂械投�、易吸收、易排泄、易修飾和易示蹤等�?yōu)點(diǎn)。第二構(gòu)建一種有多肽修飾的主動靶向性長循環(huán)脂質(zhì)體遞藥系統(tǒng),使其攜帶自身帶有熒光的聯(lián)吡啶釘配合物靶向性入腦,透過血腦屏障的阻礙,并通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)活體實(shí)驗(yàn)考察其抗腫瘤作用。因?yàn)橹鲃影邢蜷L循環(huán)脂質(zhì)體具有主動靶向性、緩釋性、長循環(huán)性、低毒性和高穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)。第一部分制備了用穿膜肽(RVG-derived peptide, RDP)修飾的長循環(huán)聯(lián)吡啶釕配合物主動靶向脂質(zhì)體,并對其理化性質(zhì)進(jìn)行研究評價(jià)。首先合成兩種具有抗腫瘤作用的多吡啶類釘配合物,2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物和1.10-菲羅啉釕配合物,通過MTT法檢測他們各自對腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制率(IC50),選擇2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物作為藥物代表,進(jìn)一步研究其抗腫瘤特性。其次將具有腦靶向作用的RDP與二硬脂�；字�(DSPE-PEG-NHS, double solid phase epitaxy-polyethylene glycol-N-Hydroxysuccinimide)進(jìn)行偶聯(lián),制成導(dǎo)向化合物DSPE-PEG-RDP。之后采用薄膜分散法分別制備RDP修飾的2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物主動靶向脂質(zhì)體(RDP-Ru-Lip, polypyridyl ruthenium complex liposome modified by RDP)和普通2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物脂質(zhì)體(Ru-Lip,polypyridyl ruthenium complex liposome). 用激光粒度及Zeta電位儀、透射電鏡、生物質(zhì)譜儀和紫外分光光度計(jì)進(jìn)行表征,考察其理化性質(zhì)。通過透析法測定脂質(zhì)體包封率,活體成像實(shí)驗(yàn)、倒置顯微鏡觀察法、免疫熒光方法檢驗(yàn)其靶向性,并通過MTT實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其對腫瘤細(xì)胞的影響。結(jié)果表明RDP修飾后的2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物脂質(zhì)體平均粒徑為(94.56±5.97)nm,包封率為(78.86±2.78)%,而普通脂質(zhì)體平均粒徑為(90.20±2.23)nm,包封率為(79.62±±3.62)%,并且所制得的脂質(zhì)體重現(xiàn)性高,穩(wěn)定性良好。第二部分著重考察所制得脂質(zhì)體靶向性和對腫瘤細(xì)胞的作用效果。通過活體成像實(shí)驗(yàn)表明經(jīng)過RDP修飾的2.2'-聯(lián)吡啶釕配合物長循環(huán)脂質(zhì)體具有很好的腦靶向作用。通過熒光倒置顯微鏡觀察和MTT細(xì)胞實(shí)驗(yàn)即3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)也表明RDP修飾2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物脂質(zhì)體具有明顯的嗜神經(jīng)性,能夠選擇性進(jìn)入神經(jīng)性細(xì)胞,IC50顯著低于普通脂質(zhì)體組和未經(jīng)脂質(zhì)體包裹的聯(lián)吡啶釕配合物組(Ru,polypyndyl ruthenium complex).DAPI即4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)染色結(jié)果顯示,脂質(zhì)體攜帶藥物進(jìn)入細(xì)胞后,藥物2.2’-聯(lián)吡啶釕多數(shù)在胞漿中富集,極少進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi),推測其抗腫瘤作用主要在胞漿內(nèi)發(fā)揮或啟動。綜上結(jié)果表明：經(jīng)RDP修飾的2.2’-聯(lián)吡啶釕配合物長循環(huán)脂質(zhì)體穩(wěn)定可控,且具有明顯的靶腦作用,體外抗腫瘤效果明顯,有望成為靶向治療腦部腫瘤疾病的良好藥物載體。本論文研究發(fā)現(xiàn),制備的RDP-Ru-Lip理化性質(zhì)良好,穩(wěn)定可控,制備重現(xiàn)性高。通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明其體外抗腫瘤細(xì)胞效果明顯,并具有嗜神經(jīng)性。通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明其能夠快速透過血腦屏障,攜帶藥物聯(lián)吡啶釕靶向性入腦,提高藥物濃度。這些實(shí)驗(yàn)研究為更多主動腦靶向長循環(huán)脂質(zhì)體和抗腫瘤類金屬配合物的研制開發(fā)提供了有力的理論支撐。
【關(guān)鍵詞】：聯(lián)吡啶釕 穿膜肽RDP 脂質(zhì)體 靶向性 抗腫瘤
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 第一章 文獻(xiàn)綜述10-18
• 1.1 脂質(zhì)體概述10-12
• 1.1.1 普通脂質(zhì)體10-11
• 1.1.2 長循環(huán)脂質(zhì)體11-12
• 1.1.3 多肽修飾的脂質(zhì)體12
• 1.1.4 新型長循環(huán)主動靶向脂質(zhì)體12
• 1.2 穿膜肽RDP12-13
• 1.3 金屬配合物作為抗腫瘤藥物的研究概述13-18
• 1.3.1 釕類金屬配合物抗腫瘤的研究情況13-14
• 1.3.2 釕和釕類金屬配合物抗腫瘤特點(diǎn)14
• 1.3.3 釕類金屬配合物抗腫瘤機(jī)理14-16
• 1.3.4 多吡啶配合物的研究概述16
• 1.3.5 聯(lián)吡啶釕配合物的研究概述16-18
• 第二章 引言18-22
• 2.1 研究背景18-19
• 2.2 研究目的和意義19
• 2.3 主要研究內(nèi)容19-20
• 2.4 技術(shù)路線20-22
• 第三章 RDP修飾的聯(lián)吡啶釕主動靶向脂質(zhì)體的制備、表征22-34
• 3.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料22-23
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器22-23
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)材料23
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果23-31
• 3.2.1 聯(lián)吡啶釕配合物標(biāo)準(zhǔn)品的合成23-24
• 3.2.2 聯(lián)吡啶釕紫外吸收波長的測定和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制24-25
• 3.2.3 穩(wěn)定性考察25
• 3.2.4 脂質(zhì)體的制備和表征25-31
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論與討論31-34
• 第四章 RDP修飾的聯(lián)吡啶釕主動靶向脂質(zhì)體抗腫瘤效果評價(jià)34-42
• 4.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料34-35
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器34
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果35-40
• 4.2.1 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)35-36
• 4.2.2 MTT實(shí)驗(yàn)36-38
• 4.2.3 活體成像實(shí)驗(yàn)38-40
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論與討論40-42
• 第五章 全文總結(jié)42-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 致謝50-52
• 研究生期間撰寫發(fā)表的文章52

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 王逸麟;付愛玲;;狂犬病毒糖蛋白衍生物作為靶腦載體初探[J];科學(xué)技術(shù)與工程;2011年36期

2 路娟;劉清飛;羅國安;王義明;;藥物的聚乙二醇修飾研究進(jìn)展[J];有機(jī)化學(xué);2009年08期

3 趙慧;王堅(jiān)成;羅春蕾;孫啟時(shí);張強(qiáng);;多肽GRGDS修飾的紫杉醇長循環(huán)靶向脂質(zhì)體的體外評價(jià)[J];中國新藥雜志;2008年23期

4 倪睿;劉建平;;脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體的應(yīng)用研究[J];藥學(xué)服務(wù)與研究;2008年02期

5 張景R，

本文編號：441615