本文關(guān)鍵詞：27nt miRNA對eNOS調(diào)節(jié)及HUVECs增殖相關(guān)因子AP-1作用機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：前期工作發(fā)現(xiàn),內(nèi)皮型一氧化氮合酶第4內(nèi)含子的27堿基重復子產(chǎn)生相應(yīng)27nt miRNA,并對eNOS的轉(zhuǎn)錄和表達有負反饋調(diào)節(jié)作用。進一步探討該內(nèi)含子源性27nt miRNA對內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因調(diào)節(jié)的分子機制及臍靜脈內(nèi)皮細胞增殖相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子AP-1的作用機制。1.明確27nt miRNA對內(nèi)皮細胞表型的調(diào)控作用2.闡明27nt miRNA抑制內(nèi)皮細胞增殖和轉(zhuǎn)移的機制。3.旨在從新的角度闡明內(nèi)皮細胞增殖、遷移和侵襲的分子機制,為尋找新的心血管疾病治療靶點提供理論依據(jù)。方法：1.體外觀察27nt miRNA對內(nèi)皮細胞生物學性狀的影響：將人工合成的wt-27nt miRNA和mut-27nt miRNA mimics分別轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細胞,觀察內(nèi)皮細胞的增殖(MTT法和細胞克隆法)、遷移(細胞劃痕實驗)、侵襲(Transwell實驗)等生物學行為的變化。2.27nt miRNA下游靶基因的預測、驗證和功能研究：我們使用TargetScan靶基因預測軟件并分析相關(guān)因素,篩選27nt miRNA可能的下游靶基因AP-1。然后。應(yīng)用熒光素酶報告系統(tǒng)驗證27nt miRNA對AP-1的負性調(diào)控作用。進一步采用qRT-PCR、免疫組化和免疫印跡實驗(western blotting)檢測靶基因AP-1 mRNA和蛋白和eNOS mRNA和蛋白表達水平的改變。3.在VEGF生長因子刺激下,進一步采用qRT-PCR和免疫印跡實驗(western blotting)檢測共轉(zhuǎn)染27nt miRNA和AP-1后eNOS mRNA和蛋白表達水平的改變,最后應(yīng)用MTT法觀察內(nèi)皮細胞的增殖情況。結(jié)果：1.過表達27nt miRNA對內(nèi)皮細胞的增殖和遷移以及侵襲具有顯著的抑制作用,2.通過生物信息學的預測發(fā)現(xiàn),AP-1可能是27nt miRNA的下游一個靶基因,熒光素酶報告表明,27nt miRNA對于它結(jié)合位點熒光報告基因活性具有顯著抑制作用,但其對突變體和對照質(zhì)粒的活性卻沒有顯著性的影響。前期工作發(fā)現(xiàn),eNOS不是27nt miRNA的預測靶基因,過表達27nt miRNA對eNOS mRNA以及蛋白表達水平有明顯影響。以上研究證實27nt miRNA通過轉(zhuǎn)錄后水平負性調(diào)控AP-1參與內(nèi)皮細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。3.在VEGF的刺激下,共轉(zhuǎn)染27nt miRNA和AP-1對eNOS mRNA和蛋白水平影響更為顯著。結(jié)論：1.過表達27nt miRNA顯著抑制內(nèi)皮細胞增殖、遷移和侵襲能力,提示27nt miRNA在內(nèi)皮細胞生物學功能方面扮演重要角色。2.過表達27nt miRNA顯著抑制eNOS和AP-1蛋白表達,從而顯著抑制內(nèi)皮細胞的增殖,遷移,侵襲。3.在VEGF的刺激下,27nt miRNA和AP-1負調(diào)控eNOS mRNA和蛋白水平表達。
【關(guān)鍵詞】：miRNA eNOS 內(nèi)皮細胞 AP-1
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 個人簡歷3-6
• 主要中英文縮略語表6-7
• 摘要7-9
• ABSTRACT9-12
• 引言12-16
• 第一部分 細胞培養(yǎng)、高表達質(zhì)粒構(gòu)建和細胞轉(zhuǎn)染16-24
• 引言16
• 1 材料和儀器16-17
• 2 方法17-21
• 3 結(jié)果21-23
• 4 討論23-24
• 第二部分 27nt miRNA對內(nèi)皮細胞表型的影響24-33
• 引言24
• 1 材料和儀器24-25
• 2 方法25-27
• 3 結(jié)果27-31
• 4 討論31-33
• 第三部分 27nt miRNA對內(nèi)皮細胞生物學行為影響的分子機制33-49
• 引言33
• 1 材料和儀器33-34
• 2 方法34-41
• 3 結(jié)果41-47
• 4 討論47-49
• 第四部分 27nt miRNA調(diào)節(jié)AP-1和eNOS協(xié)同參與內(nèi)皮細胞生物學行為49-62
• 引言49
• 1 材料和儀器49-50
• 2 方法50-55
• 3 結(jié)果55-59
• 4 討論59-62
• 小結(jié)62-63
• 參考文獻63-71
• 綜述71-112
• 參考文獻98-112
• 致謝112-113
• 攻讀學位期間發(fā)表論文113

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐昊,王明榮,顏光濤;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)進展及其應(yīng)用[J];國外醫(yī)學.預防.診斷.治療用生物制品分冊;2000年06期

2 劉云海,鐘英麗,任凱群,周建林,張健,韓梅;細胞轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化[J];湖南師范大學自然科學學報;2004年02期

3 黎健;;miR-34a調(diào)控內(nèi)皮祖細胞介導的血管新生[J];中國動脈硬化雜志;2011年03期

  本文關(guān)鍵詞：27nt miRNA對eNOS調(diào)節(jié)及HUVECs增殖相關(guān)因子AP-1作用機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：438061