本文關(guān)鍵詞：硫化氫對順鉑誘導(dǎo)近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的干預(yù)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究硫化氫對順鉑誘導(dǎo)近端腎小管上皮細(xì)胞凋亡的干預(yù)作用。研究順鉑影響近端腎小管上皮細(xì)胞后硫化氫干預(yù)的機制,探討臨床上順鉑導(dǎo)致的腎損害保護的新依據(jù)。方法:將實驗根據(jù)隨機對照原則分為三組:正常陰性對照組:無特殊處理;順鉑組,MTT實驗順鉑濃度為(0mg/L、1 mg/L,2mg/L、5mg/L,10 mg/L,20 mg/L,40 mg/L),DAPI、Annexin V-FITC/PI染色、Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)和實時定量PCR順鉑濃度為(20mg/L);順鉑加硫氫化鈉共同作用組:MTT實驗硫氫化鈉濃度為(0mmol/L,0.2 mmol/L,0.4 mmol/L,0.5 mmol/L,0.8 mmol/L,1.0mmol/L、2.0mmol/L)與順鉑(20 mg/L)共同作用,DAPI、Annexin V-FITC/PI染色、Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)和實時定量PCR為(0.5mmol/L、1.0mmol/L)硫氫化鈉加(20mg/L)順鉑。硫氫化鈉作為硫化氫的供體。體外培養(yǎng)人近端腎小管上皮細(xì)胞(Human Renal Tubular Epithelial Cell,HK-2 cell)和不同分組濃度藥物作用24小時后,使用:1、甲氮甲唑藍(lán)(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-dipheny l-2-H-tetrazolium bromide,MTT)實驗檢測不同順鉑濃度作用后HK-2細(xì)胞的存活率,并檢測不同濃度硫氫化鈉與順鉑共同作用后細(xì)胞存活率。2、使用DAPI、Annexin V-FITC/PI染色檢測各組HK-2細(xì)胞的凋亡形態(tài)學(xué)改變。3、Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測各組近端腎小管上皮細(xì)HK-2細(xì)胞凋亡率。4、實時定量PCR檢測各組HK-2細(xì)胞DAXX mRNA、Fas mRNA表達(dá)產(chǎn)物量。結(jié)果:1、通過甲氮甲唑藍(lán)實驗(mtt)比較,1、2、5、10、20mg/l順鉑可以使hk-2細(xì)胞的凋亡增多,吸光值分別為0.229±0.022;0.198±0.024;0.189±0.069;0.188±0.030和0.165±0.012,在20mg/l時抑制率和0mg/l陰性對照組(0.270±0.064)相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05);在20mg/l順鉑和硫氫化鈉濃度為0.2、0.4、0.5、0.8、1.0mmol/l的凋亡吸光值為0.173±0.051;0.186±0.023;0.259±0.050;0.263±0.033;0.268±0.098,和只使用20mg/l順鉑的陰性對照組(0.153±0.017)相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。但在1mmol/l,則對hk-2細(xì)胞保護下降(0.196±0.025)。2、dapi、annexinv-fitc/pi染色熒光顯微鏡顯示,在20mg/l順鉑影響下,hk-2細(xì)胞平均視野凋亡細(xì)胞數(shù)為35.02±6.079,和正常陰性對照組4.23±1.015相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。合用硫氫化鈉凋亡減少,在0.5、1.0mmol/l的視野平均凋亡細(xì)胞為22.55±2.912、9.78±2.063。和順鉑組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。3、而annexinv-fitc/pi流式細(xì)胞術(shù)提示,在20mg/l順鉑影響下,hk-2細(xì)胞凋亡率為(31.598±1.014)%,和正常陰性對照組(5.167±0.612)%相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。合用硫氫化鈉凋亡減少,在0.5、1.0mmol/l的凋亡率為(18.375±2.239)%、(11.636±1.233)%和順鉑組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。4、實時熒光定量pcr提示,hk-2細(xì)胞在順鉑影響后,daxxmrna、fasmrna表達(dá)產(chǎn)物明顯增多,和正常對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),而在硫氫化鈉和順鉑共同影響下,daxxmrna、fasmRNA表達(dá)產(chǎn)物較前減少,和順鉑組相比,有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。結(jié)論:硫化氫對順鉑導(dǎo)致的近端腎小管上皮細(xì)胞的凋亡有保護作用,呈濃度依賴性。
【關(guān)鍵詞】：HK-2細(xì)胞 硫化氫 順鉑 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要中英文縮寫10-12
• 第一章 引言12-14
• 第二章 實驗材料14-16
• 第三章 實驗方法16-24
• 第四章 實驗結(jié)果24-32
• 第五章 討論32-40
• 第六章 結(jié)論40-42
• 參考文獻42-48
• 文獻綜述48-60
• 參考文獻55-60
• 致謝60

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本文編號：426443