本文關(guān)鍵詞：地西他濱聯(lián)合三氧化二砷對HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的作用以及對DAPK基因影響的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一類起源于造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病,且其發(fā)病率有逐年上升的趨勢。在過去的幾十年里,AML的治療已有了長足的進(jìn)步,目前治療的手段主要有聯(lián)合化療和在化療基礎(chǔ)上的造血干細(xì)胞移植。傳統(tǒng)化療的毒副作用和耐藥復(fù)發(fā)嚴(yán)重影響著患者的總體生存率,雖然骨髓移植是根治方法,但由于人類白細(xì)胞抗原不相合性以及移植后GVHD產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn),故限制了其在臨床的廣泛開展。因此,我們需要尋找新的藥物來優(yōu)化治療方案,減少藥物的毒副作用以及交叉耐藥,以提高患者總體生存率。目前研究發(fā)現(xiàn),白血病細(xì)胞基因啟動子區(qū)DNA甲基化的發(fā)生率明顯增高,特別是那些具有抑癌功能的基因啟動子區(qū)發(fā)生的高甲基化。與基因突變不同,DNA甲基化是一種可逆轉(zhuǎn)的基因修飾過程,故在腫瘤或癌前病變中可以通過去甲基化處理恢復(fù)基因的表達(dá),從而達(dá)到防治腫瘤的目的。因此,DNA去甲基化作用將為血液系統(tǒng)腫瘤的治療提供新思路。地西他濱(decitabine,DAC),又稱為5-氮雜-2’-脫氧胞苷,作為一種DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑對AML患者包括耐藥、復(fù)發(fā)患者已顯示出初步的療效。目前DAC已成功應(yīng)用于多種血液系統(tǒng)腫瘤,但在聯(lián)合應(yīng)用方面的研究仍比較少。三氧化二砷(arsenic trioxide,AS2O3)是我國從中醫(yī)藥中發(fā)掘出來的治療急性早幼粒細(xì)胞白血病(APL)效果肯定的藥物,已被美國NCCN的AML診療指南列為疾病持續(xù)不緩解或復(fù)發(fā)時(shí)挽救治療的首選用藥,是中西醫(yī)結(jié)合治療成功的經(jīng)典例證。近年來,去甲基化藥物不斷應(yīng)用于臨床,尤其是針對不適合應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)化療方案誘導(dǎo)緩解的AML患者,然而如何提高藥物療效并減輕副作用是目前一重要課題。本實(shí)驗(yàn)研究DAC、AS2O3對HL-60細(xì)胞(人急性髓系白血病細(xì)胞株)增殖、凋亡的作用以及對死亡相關(guān)蛋白激酶(death associated protein kinase,DAPK)基因表達(dá)的影響,探討去甲基化藥物治療AML的作用機(jī)制,旨在為今后臨床用藥提供更多的理論依據(jù)。方法:選取AML細(xì)胞株HL-60為研究對象,并隨機(jī)分組:空白對照組,DAC單藥組(20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L),AS2O3單藥組(1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L),DAC聯(lián)合AS2O3組(40μmol/L+2.5μmol/L、80μmol/L+2.5μmol/L、40μmol/L+5μmol/L、80μmol/L+5μmol/L),DAC預(yù)處理+AS2O3組(1μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L)。評價(jià)不同濃度藥物干預(yù)不同時(shí)間后對HL-60細(xì)胞增殖、凋亡的作用以及對DAPK基因表達(dá)水平的影響。每組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3次。1用CCK8法初篩濃度并檢測不同濃度藥物作用24h、48h、72h對HL-60細(xì)胞的增殖抑制率;2用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測不同濃度藥物作用24h、48h、72h對HL-60細(xì)胞的凋亡率;3用RT-PCR法檢測不同濃度藥物作用HL-60細(xì)胞72h后DAPK m RNA的表達(dá)水平;4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。結(jié)果:1 DAC、AS2O3對HL-60細(xì)胞增殖的影響1.1不同濃度的DAC、AS2O3單藥對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,增殖抑制率逐漸升高。DAC對HL-60細(xì)胞增殖抑制率由(10.97±1.09)%增加到(61.95±1.24)%,AS2O3對HL-60細(xì)胞增殖抑制率由(13.81±3.09)%增加到(84.18±2.94)%。各處理組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC、AS2O3單藥能夠抑制HL-60細(xì)胞增殖,并呈時(shí)間劑量依賴性。(Fig.1,Fig.2,Table 1,Table 2)1.2不同濃度的DAC聯(lián)合AS2O3對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,增殖抑制率由(43.22±4.78)%增加到(93.12±3.71)%,各處理組較單藥組比較增殖抑制率顯著增加,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC聯(lián)合AS2O3對HL-60細(xì)胞增殖抑制作用具有協(xié)同作用。(Fig.3,Table 3)1.3經(jīng)DAC(80μmol/L)預(yù)處理后,不同濃度的AS2O3對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,增殖抑制率由(31.8±1.32)%增加到(91.44±0.78)%,較AS2O3單藥組增殖抑制率顯著增加,各處理組間以及處理組與AS2O3單藥組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC預(yù)處理可以增強(qiáng)AS2O3對HL-60細(xì)胞的增殖抑制作用。(Fig.4,Table 4)2 DAC、AS2O3對HL-60細(xì)胞凋亡的影響2.1不同濃度的DAC、AS2O3單藥對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,凋亡率逐漸升高。DAC對HL-60細(xì)胞凋亡率由(8.0±1.05)%增加到(36.6±1.35)%,AS2O3對HL-60細(xì)胞凋亡率由(10.2±1.35)%增加到(45.3±2.35)%。各處理組間以及處理組與對照組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC、AS2O3單藥能夠誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡,并呈時(shí)間劑量依賴性。(Fig.5,Table 5,Table 6)2.2不同濃度的DAC聯(lián)合AS2O3對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,凋亡率由(19.6±0.56)%增加到(62.1±0.71)%,各處理組較單藥組比較凋亡率顯著增加,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC聯(lián)合AS2O3對HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡具有協(xié)同作用。(Fig.5,Table 7)2.3經(jīng)DAC(80μmol/L)預(yù)處理后,不同濃度的AS2O3對HL-60細(xì)胞作用24h、48h、72h后,隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長,凋亡率由(18.8±1.32)%增加到(71.4±0.79)%,較AS2O3單藥組凋亡率顯著增加,各處理組間以及處理組與AS2O3單藥組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC預(yù)處理可以增強(qiáng)AS2O3對HL-60細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡的作用。(Fig.5,Table 8)3 DAC、AS2O3對HL-60細(xì)胞DAPKm RNA表達(dá)的影響3.1不同濃度的DAC、AS2O3單藥對HL-60細(xì)胞作用72h后,隨著藥物濃度的增加,DAPKm RNA的表達(dá)水平逐漸升高。DAC對DAPKm RNA的表達(dá)量由1.5±0.34增加到3.2±0.56,AS2O3對DAPKm RNA的表達(dá)量由1.2±0.50增加到3.0±0.17。各處理組間以及處理組與對照組之間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC、AS2O3單藥能夠增加HL-60細(xì)胞DAPKm RNA的表達(dá)水平,并呈劑量依賴性。(Fig.6,Fig.7,Table 9,Table 10)3.2不同濃度的DAC聯(lián)合AS2O3對HL-60細(xì)胞作用72h后,隨著藥物濃度的增加,DAPKm RNA的表達(dá)量由3.6±0.47增加到5.2±0.25,各處理組與單藥組及對照組比較,DAPKm RNA的表達(dá)量顯著升高,且差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC聯(lián)合AS2O3能夠增加HL-60細(xì)胞DAPKm RNA的表達(dá)水平,且兩者具有協(xié)同作用。(Table 11)3.3經(jīng)DAC(80μmol/L)預(yù)處理后,不同濃度的AS2O3對HL-60細(xì)胞作用72h后,隨著藥物濃度的增加,DAPKm RNA的表達(dá)量由2.0±0.35增加到4.5±0.18,較AS2O3單藥組基因的表達(dá)水平顯著升高,各處理組間以及處理組與AS2O3單藥組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00)。說明DAC預(yù)處理可以提升AS2O3對HL-60細(xì)胞DAPKm RNA的表達(dá)水平。(Table 12)結(jié)論:1地西他濱和三氧化二砷單藥及聯(lián)合對HL-60細(xì)胞均有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用,且呈時(shí)間劑量依賴性。2地西他濱和三氧化二砷發(fā)揮作用具有協(xié)同效應(yīng)。3經(jīng)地西他濱預(yù)處理后,可以增加三氧化二砷對HL-60細(xì)胞的敏感性,其作用機(jī)制可能與恢復(fù)或增加了DAPK基因的表達(dá)有關(guān),DAPK基因可能是DAC誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡的調(diào)控基因之一。
【關(guān)鍵詞】：去甲基化 地西他濱 三氧化二砷 HL-60 增殖 凋亡 DAPK
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 英文縮寫13-14
• 前言14-16
• 材料與方法16-22
• 結(jié)果22-26
• 附圖26-31
• 附表31-35
• 討論35-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-44
• 綜述 去甲基化藥物治療急性髓系白血病的研究進(jìn)展44-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡歷53

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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本文編號：417194