本文關(guān)鍵詞：安絲菌素固體發(fā)酵及安絲菌素P-0制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：安絲菌素(ansamitocin)屬于苯安莎類抗生素,具有強(qiáng)烈的腫瘤細(xì)胞毒性,是開發(fā)抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的重要原料。國(guó)內(nèi)安絲菌素發(fā)酵水平不高、商業(yè)供應(yīng)匱乏,為我國(guó)ADC藥物研發(fā)帶來(lái)一定難度。將安絲菌素發(fā)酵培養(yǎng)、分離提取及制備進(jìn)行綜合考慮,以提高安絲菌素產(chǎn)量、降低生產(chǎn)成本為目標(biāo)的研究,具有應(yīng)用前景。醫(yī)藥生物技術(shù)研究所作為我國(guó)微生物藥物研發(fā)機(jī)構(gòu)之一,也在進(jìn)行ADCs類藥物的開發(fā),并且急需穩(wěn)定的安絲菌素供應(yīng)。在本研究中,我們采用固體發(fā)酵珍貴束絲放線菌ATCC 31565,建立了安絲菌素發(fā)酵,提取,分離純化的實(shí)驗(yàn)室制備工藝流程。首先,我們建立了適合珍貴束絲放線菌ATCC 31565穩(wěn)定產(chǎn)生豐富孢子的種子培養(yǎng)基(葡萄糖：8g/L,麥芽提取物：5g/L,瓊脂粉：15g/L,酵母提取物：1g/L,NaCl:5g/L)。通過摸索不同安絲菌素固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方,獲得了一種安絲菌素固體發(fā)酵培養(yǎng)基配方(葡萄糖：20g/L,玉米淀粉：30 g/L,棉籽餅粉：30g/L, CaCl2:10g/L,瓊脂粉：20g/L),安絲菌素(純度85%)產(chǎn)量穩(wěn)定在約100mg/L,較ISP2培養(yǎng)基提高安絲菌素產(chǎn)量3倍多。在此基礎(chǔ)上,我們對(duì)珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵培養(yǎng)物進(jìn)行乙酸乙酯萃取和硅膠柱層析,得到含安絲菌素P-2、P-3和P-4組分的混合物。參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,我們對(duì)安絲菌素發(fā)酵進(jìn)行了一些驗(yàn)證和探索。例如,在培養(yǎng)基中添加異丁醇,提高了安絲菌素組分P-3的相對(duì)含量,但是安絲菌素總產(chǎn)量未見提高。在培養(yǎng)基中添加纈氨酸(Val)或者稀土元素鈧(ScCl3),未見安絲菌素發(fā)酵水平提高；同時(shí),我們也進(jìn)行了安絲菌素液體搖瓶發(fā)酵,效價(jià)與固體發(fā)酵相當(dāng),但液體發(fā)酵液粘稠度較高,給安絲菌素的分離提取帶來(lái)了一定不便。最后,通過水解反應(yīng)化脫去安絲菌素P-2,P-3,P-4中的C-3�；鶄�(cè)鏈；采用制備型HPLC獲得安絲菌素P-0純品。安絲菌素P-0得率約82%(純度大于99%)。提供安絲菌素樣品1.5g,用于醫(yī)藥生物技術(shù)研究所ADCs類藥物的研發(fā),解決了我所在ADCs類藥物起始研發(fā)階段對(duì)安絲菌素的迫切需求。
【關(guān)鍵詞】：安絲菌素 抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs) 珍貴束絲放線菌 固體發(fā)酵
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943
【目錄】：

• 中文摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-18
• 安絲菌素研究現(xiàn)狀9-13
• 安絲菌素發(fā)酵影響因素13-16
• 本課題研究目的及意義16-18
• 1 實(shí)驗(yàn)材料18-23
• 1.1 菌株18
• 1.2 培養(yǎng)基18-20
• 1.3 主要試劑20-21
• 1.4 主要儀器21-23
• 2 實(shí)驗(yàn)方法23-28
• 2.1 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵孢子懸液制備23
• 2.2 珍貴束絲放線菌ATCC 31565液體發(fā)酵種子制備23
• 2.3 安絲菌素TLC檢測(cè)方法23
• 2.4 安絲菌素HPLC檢測(cè)方法23-24
• 2.5 安絲菌素P-3標(biāo)準(zhǔn)曲線建立24
• 2.6 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵24-27
• 2.6.1 珍貴束絲放線菌ATCC 31565—ISP2培養(yǎng)基固體發(fā)酵24-26
• 2.6.2 珍貴束絲放線菌ATCC 31565—發(fā)酵培養(yǎng)基固體發(fā)酵26-27
• 2.7 珍貴束絲放線菌ATCC 31565液體發(fā)酵27
• 2.8 安絲菌素分離純化27
• 2.8.1 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵產(chǎn)物提取方法27
• 2.8.2 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵產(chǎn)物硅膠柱層析方法27
• 2.9 安絲菌素水解反應(yīng)(由合成室王玉成老師課題組完成)及P-0制備27-28
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論28-44
• 3.1 ISP2培養(yǎng)基固體發(fā)酵安絲菌素28-29
• 3.2 安絲菌素P-3標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立29-32
• 3.3 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化32-35
• 3.3.1 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體種子培養(yǎng)基優(yōu)化32-33
• 3.3.2 珍貴束絲放線菌ATCC 31565固體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化33-34
• 3.3.3 平皿裝量?jī)?yōu)化34-35
• 3.4 安絲菌素分離純化35-36
• 3.5 安絲菌素水解反應(yīng)及P-0制備36-38
• 3.6 珍貴束絲放線菌ATCC 31565其他探索工作38-43
• 3.6.1 ISP2+Val,ISP2+ScCl_3培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物提取分析39-40
• 3.6.2 ISP2+異丁醇培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物提取分析40-42
• 3.6.3 液體發(fā)酵產(chǎn)物提取分析42-43
• 3.7 討論與工作展望43-44
• 全文總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 文獻(xiàn)綜述：抗體藥物偶聯(lián)物研究進(jìn)展47-58
• 參考文獻(xiàn)56-58
• 英文縮略語(yǔ)58-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)介60
• 碩士在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文60

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 李婷蘭;韋柳靜;范宇翔;馬玉棟;白林泉;花強(qiáng);;奇跡束絲放線菌合成安絲菌素過程中支鏈氨基酸的添加效果分析[J];華東理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年06期

2 朱貴東;傅陽(yáng)心;;設(shè)計(jì)新一代抗體藥物偶聯(lián)物[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年07期

3 伊丹;王巖;陳少欣;;安絲菌素P-3的發(fā)酵工藝[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2012年04期

  本文關(guān)鍵詞：安絲菌素固體發(fā)酵及安絲菌素P-0制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：410316