組蛋白賴氨酸去甲基化酶5B(Histone Lysine Demethylase 5B,KDM5B)是含Jmjc結(jié)構(gòu)域的家族中的一員。KDM5B以Fe(II)和α-酮戊二酸為輔助因子能去除組蛋白3第4位賴氨酸的單、雙、三甲基化的去甲基化酶。研究發(fā)現(xiàn)KDM5B參與多個(gè)靶基因啟動(dòng)子周圍的抑制性轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成,并對(duì)染色質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)揮廣泛的調(diào)節(jié)作用,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。本課題組通過調(diào)研文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)KDM5B在成人正常組織中表達(dá)量低,主要在睪丸和腦中會(huì)有較高的表達(dá);而在乳腺癌、前列腺癌、胃癌、肺癌、口腔癌等多種實(shí)體瘤及白血病細(xì)胞中具有高表達(dá)。而且有大量證據(jù)表明KDM5B與腫瘤生長、血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移和腫瘤相關(guān)的化療耐藥有關(guān),具有一定的致癌作用。因此,KDM5B被認(rèn)為是癌癥治療的潛在的藥物靶標(biāo)。目前科研工作者以KDM5B為藥物靶點(diǎn)設(shè)計(jì)了許多抑制劑,但都存在選擇性低或細(xì)胞通透率差等一些問題,目前仍然沒有上市的KDM5B抑制劑。因此,開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、高效、高選擇性、低毒副作用的KDM5B抑制劑具有非常重要的意義。在總結(jié)了前人經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,我們課題組借助于高通量虛擬篩選及基于結(jié)構(gòu)的藥物設(shè)計(jì)和結(jié)...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
1.前言
    1.1 表觀遺傳學(xué)
    1.2 甲基化修飾
    1.3 KDM5B
        1.3.1 KDM5B結(jié)構(gòu)
        1.3.2 KDM5B去甲基化機(jī)制
        1.3.3 KDM5B與癌癥關(guān)系
    1.4 KDM5B抑制劑的研究現(xiàn)狀
    1.5 EMT
    1.6 本文的研究目的和主要內(nèi)容
2.KDM5B小分子抑制劑篩選方法的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)原理和材料
        2.1.1 KDM5B小分子抑制劑活性測定的原理
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 KDM5B蛋白活性檢測
        2.2.2 酶反應(yīng)體系穩(wěn)定性及實(shí)用性評(píng)價(jià)
        2.2.3 KDM5B抑制劑的體外活性評(píng)價(jià)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 基于HTRF原理的KDM5B活性測定及條件優(yōu)化
        2.3.2 反應(yīng)體系穩(wěn)定性及應(yīng)用性評(píng)價(jià)結(jié)果
        2.3.3 化合物對(duì)KDM5B抑制活性評(píng)價(jià)結(jié)果
    2.4 小結(jié)
3.新型KDM5B抑制劑ZB-16 在胃癌中作用機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
        3.1.1 主要儀器設(shè)備
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 常用試劑配置
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.2 貼壁細(xì)胞的傳代
        3.2.3 細(xì)胞凍存
        3.2.4 細(xì)胞總蛋白提取
        3.2.5 細(xì)胞組蛋白提取
        3.2.6 蛋白BCA定量
        3.2.7 Western blot 實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 MTT實(shí)驗(yàn)
        3.2.9免疫熒光實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 胃癌細(xì)胞系中KDM5B的表達(dá)量
        3.3.2 化合物對(duì)MKN45 胃癌細(xì)胞的增殖的影響
        3.3.3 化合物對(duì)組蛋白修飾的影響
        3.3.4 化合物對(duì)組蛋白表達(dá)量的影響
        3.3.5 化合物對(duì)MKN45 胃癌細(xì)胞克隆形成的影響
        3.3.6 化合物對(duì)MKN45 胃癌細(xì)胞遷移能力的影響
        3.3.7 化合物對(duì)MKN45 胃癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的影響
        3.3.8 化合物對(duì) MKN45 胃癌細(xì)胞的熱轉(zhuǎn)移分析實(shí)驗(yàn)
        3.3.9 化合物對(duì)MKN45 胃癌細(xì)胞的EMT進(jìn)程的影響
    3.4 小結(jié)
4.結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡歷與研究成果
致謝



本文編號(hào)：3958503