黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)是人體內(nèi)次黃嘌呤和黃嘌呤代謝產(chǎn)生尿酸的關(guān)鍵酶,而多酚單體可抑制黃嘌呤氧化酶從而減少尿酸合成進(jìn)而緩解痛風(fēng)癥狀。為探究來源于天然產(chǎn)物的多酚單體對XOD的抑制作用機(jī)制,首先研究幾種常見活性較好的多酚單體對黃嘌呤氧化酶的抑制率,及其對XOD的抑制動力學(xué),并且通過熒光猝滅實(shí)驗(yàn)與分子對接模擬多酚單體與XOD之間的相互作用形式。在6種多酚單體中,白藜蘆醇、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)和橙皮苷對黃嘌呤氧化酶活性的抑制效果較好,室溫下IC50分別為261.22、150.51、97.08μmol/L,是黃嘌呤氧化酶的競爭性抑制劑。熒光猝滅實(shí)驗(yàn)表明,單體與XOD結(jié)合使酶的內(nèi)源熒光發(fā)生了猝滅現(xiàn)象,猝滅機(jī)制為靜態(tài)猝滅。分子對接模擬表明,多酚單體能與XOD的氨基酸殘基結(jié)合,結(jié)合位點(diǎn)位于鉬蝶呤(molybdopterin,Mo-Pt)輔因子或黃素腺嘌呤二核苷酸(flavine-adenine dinucleotide,FAD)結(jié)構(gòu)域的異惡嗪環(huán)附近。多酚單體是有效的XOD競爭性抑制劑,可以通過抑制黃嘌呤氧...

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【部分圖文】：

圖1不同濃度下6種多酚單體及陽性對照別嘌呤醇的抑制率和IC50

6種多酚單體和別嘌呤醇對XOD都有抑制效果，抑制率隨多酚單體和別嘌呤醇濃度的升高而不斷增加，呈現(xiàn)劑量效應(yīng)關(guān)系（圖1A）。多酚單體和陽性對照（別嘌呤醇）對XOD抑制率的回歸分析結(jié)果即半數(shù)抑制濃度（IC50）見圖1B。所有單體對XOD活性均表現(xiàn)有抑制作用，其中EGCG、白藜蘆醇、橙皮....

圖3EGCG、白藜蘆醇、橙皮苷對XOD的抑制常數(shù)判定圖

從大理藜蘆（百合科）的根和莖甲醇提取物分離出的白藜蘆醇等5種多酚，對XOD活性具有抑制作用，并呈劑量依賴型關(guān)系，其中白藜蘆醇對XOD的抑制效果與本研究結(jié)果一致，抑制率的IC50值為66.1μmol/L，對XOD的抑制類型也為競爭性抑制[23]。Aucamp等[24]研究了5種兒茶....

圖3EGCG、白藜蘆醇、橙皮苷對XOD的抑制常數(shù)判定圖

圖3EGCG、白藜蘆醇、橙皮苷對XOD的抑制常數(shù)判定圖2.3單體與XOD熒光猝滅光譜

圖2EGCG、白藜蘆醇、橙皮苷對XOD的抑制類型判定圖

可以看出，EGCG、白藜蘆醇、橙皮苷隨著因變量的增加直線的斜率不斷降低，由此推斷三者對XOD的抑制作用屬于可逆抑制作用[21],Lineweaver-Burk曲線表現(xiàn)出典型的競爭性抑制特征，表明三種單體是XOD的競爭性抑制劑[22]。采用Dixon作圖法，取兩個不同底物濃度[s]....

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