乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,目前乳腺癌的發(fā)病率逐年上升,極大地威脅了女性的身體健康。因此,癌癥的早期診斷和治療顯得尤為關(guān)鍵。一方面,超聲成像是早期成像的主要分子成像技術(shù),而超聲微泡造影劑,如PLGA納米泡,不僅可以提高圖像對(duì)比度,還具有較好的生物安全性;另一方面,化療仍然是治療癌癥的主要方式,常用的化療藥物如DOX能一定程度地抑制腫瘤的生長(zhǎng)。但是,乳腺癌對(duì)化療藥物的多藥耐藥性極大地限制了藥物的使用,通過(guò)RNAi手段可以通過(guò)阻止化療藥物的泄露來(lái)克服多藥耐藥性,實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤的基因治療。腫瘤細(xì)胞的微環(huán)境與正常細(xì)胞存在差異,如:腫瘤組織的pH值維持在5.0-5.5之間,而正常組織的pH一般保持在7.35-7.45之間。PAH-Cit是一類(lèi)電荷翻轉(zhuǎn)共聚物,在酸性環(huán)境下酰胺鍵極易水解�；谝陨侠碛�,本文構(gòu)建了一種具有pH響應(yīng)的PLGA納米泡,共載DOX和P-gp shRNA實(shí)現(xiàn)超聲成像和藥物、基因協(xié)同治療。首先,我們合成了Dox-PLGA,通過(guò)SEM、DLS、UV等方式證實(shí)成功地合成了粒徑約300nm左右的Dox-PLGA納米泡。然后,通過(guò)1HNMR和FTIR驗(yàn)證了PAH-Cit聚合物的成功合...

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 分子成像技術(shù)
        1.1.1 超聲成像
        1.1.2 磁共振成像
        1.1.3 CT成像
        1.1.4 熒光成像
    1.2 納米藥物載體概述
        1.2.1 納米藥物載體的分類(lèi)
            1.2.1.1 無(wú)機(jī)納米粒子
            1.2.1.2 納米脂質(zhì)體
            1.2.1.3 高分子聚合物材料
        1.2.2 納米藥物載體的性質(zhì)
    1.3 腫瘤的多藥耐藥性
        1.3.1 腫瘤的多藥耐藥性及產(chǎn)生原因
        1.3.2 常用克服多藥耐藥性的策略
    1.4 環(huán)境響應(yīng)型納米藥物載體
        1.4.1 溫度響應(yīng)型
        1.4.2 PH響應(yīng)型
        1.4.3 氧化還原響應(yīng)型
        1.4.4 光響應(yīng)型
    1.5 課題的提出與主要研究?jī)?nèi)容
        1.5.1 論文選題依據(jù)與意義
        1.5.2 本課題的主要研究?jī)?nèi)容
第二章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA的合成與表征
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 溶液配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的制備
        2.3.2 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的表征
            2.3.2.1 掃描電鏡觀察納米泡的形貌
            2.3.2.2 紫外分光光度計(jì)測(cè)定DOX的吸收峰
            2.3.2.3 包封率和載藥率的測(cè)定
        2.3.3 DOX-PLGA/PEI NBS的制備
        2.3.4 DOX-PLGA/PEI NBS的表征
            2.3.4.1 納米泡粒徑分析
            2.3.4.2 納米泡ZETA電位分析
        2.3.5 PAH-CIT的制備
        2.3.6 PAH-CIT的表征
        2.3.7 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI的制備
        2.3.8 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA的制備
        2.3.9 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        2.3.10 P-GP SHRNA質(zhì)粒的提取(OMEGA質(zhì)粒提取說(shuō)明書(shū))
        2.3.11 基因體外釋放實(shí)驗(yàn)
        2.3.12 體外超聲成像實(shí)驗(yàn)
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的形貌分析
        2.4.2 包封率和載藥率的測(cè)定
        2.4.3 納米泡粒徑及ZETA電位分析
        2.4.4 PAH-CIT的表征
        2.4.5 納米泡形貌分析
        2.4.6 納米泡粒徑分析
        2.4.7 納米泡ZETA電位分析
        2.4.8 瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)
        2.4.9 體外超聲成像實(shí)驗(yàn)
    2.5 小結(jié)
第三章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA體外治療效果
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞系
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.4 溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 HELA、HUVEC、MCF-7、MCF-7/ADR細(xì)胞復(fù)蘇
        3.3.2 細(xì)胞傳代
        3.3.3 細(xì)胞凍存
        3.3.4 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.3.5 共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)吞情況
        3.3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞情況
        3.3.7 定量PCR實(shí)驗(yàn)
            3.3.7.1 細(xì)胞總RNA提取
            3.3.7.2 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
            3.3.7.3 PCR擴(kuò)增反應(yīng)
        3.3.8 免疫印跡實(shí)驗(yàn)
            3.3.8.1 收集蛋白樣品
            3.3.8.2 SDS-PAGE凝膠電泳
            3.3.8.3 轉(zhuǎn)膜
            3.3.8.4 免疫反應(yīng)
            3.3.8.5 化學(xué)發(fā)光、顯影、定影
        3.3.9 CALCEIN-AM/PI雙染實(shí)驗(yàn)
        3.3.10 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
        3.4.2 共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)吞情況
        3.4.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)吞情況
        3.4.4 定量PCR實(shí)驗(yàn)
        3.4.5 免疫印跡實(shí)驗(yàn)
        3.4.6 協(xié)同治療效果
        3.4.7 CALCEIN-AM/PI雙染實(shí)驗(yàn)
        3.4.8 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
    3.5 小結(jié)
第四章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA活體成像及抗腫瘤效果
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及細(xì)胞株
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.4 溶液配制
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 腫瘤模型的建立
        4.3.2 體內(nèi)超聲成像
        4.3.3 體內(nèi)協(xié)同抗腫瘤作用
        4.3.4 組織病理學(xué)分析
            4.3.4.1 HE染色
            4.3.4.2 TUNEL染色
        4.3.5 血液學(xué)分析及血液生化檢測(cè)
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.4.1 體內(nèi)超聲成像
        4.4.2 體內(nèi)毒副作用
        4.4.3 血液學(xué)分析
        4.4.4 體內(nèi)協(xié)同抗腫瘤作用
    4.5 小結(jié)
第五章 全文總結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
碩期間取得的研究成果



本文編號(hào)：3886368