乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一,目前乳腺癌的發(fā)病率逐年上升,極大地威脅了女性的身體健康。因此,癌癥的早期診斷和治療顯得尤為關鍵。一方面,超聲成像是早期成像的主要分子成像技術,而超聲微泡造影劑,如PLGA納米泡,不僅可以提高圖像對比度,還具有較好的生物安全性;另一方面,化療仍然是治療癌癥的主要方式,常用的化療藥物如DOX能一定程度地抑制腫瘤的生長。但是,乳腺癌對化療藥物的多藥耐藥性極大地限制了藥物的使用,通過RNAi手段可以通過阻止化療藥物的泄露來克服多藥耐藥性,實現(xiàn)對腫瘤的基因治療。腫瘤細胞的微環(huán)境與正常細胞存在差異,如:腫瘤組織的pH值維持在5.0-5.5之間,而正常組織的pH一般保持在7.35-7.45之間。PAH-Cit是一類電荷翻轉共聚物,在酸性環(huán)境下酰胺鍵極易水解。基于以上理由,本文構建了一種具有pH響應的PLGA納米泡,共載DOX和P-gp shRNA實現(xiàn)超聲成像和藥物、基因協(xié)同治療。首先,我們合成了Dox-PLGA,通過SEM、DLS、UV等方式證實成功地合成了粒徑約300nm左右的Dox-PLGA納米泡。然后,通過1HNMR和FTIR驗證了PAH-Cit聚合物的成功合...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 分子成像技術
        1.1.1 超聲成像
        1.1.2 磁共振成像
        1.1.3 CT成像
        1.1.4 熒光成像
    1.2 納米藥物載體概述
        1.2.1 納米藥物載體的分類
            1.2.1.1 無機納米粒子
            1.2.1.2 納米脂質體
            1.2.1.3 高分子聚合物材料
        1.2.2 納米藥物載體的性質
    1.3 腫瘤的多藥耐藥性
        1.3.1 腫瘤的多藥耐藥性及產生原因
        1.3.2 常用克服多藥耐藥性的策略
    1.4 環(huán)境響應型納米藥物載體
        1.4.1 溫度響應型
        1.4.2 PH響應型
        1.4.3 氧化還原響應型
        1.4.4 光響應型
    1.5 課題的提出與主要研究內容
        1.5.1 論文選題依據與意義
        1.5.2 本課題的主要研究內容
第二章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA的合成與表征
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗試劑
        2.2.2 實驗儀器
        2.2.3 溶液配置
    2.3 實驗方法
        2.3.1 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的制備
        2.3.2 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的表征
            2.3.2.1 掃描電鏡觀察納米泡的形貌
            2.3.2.2 紫外分光光度計測定DOX的吸收峰
            2.3.2.3 包封率和載藥率的測定
        2.3.3 DOX-PLGA/PEI NBS的制備
        2.3.4 DOX-PLGA/PEI NBS的表征
            2.3.4.1 納米泡粒徑分析
            2.3.4.2 納米泡ZETA電位分析
        2.3.5 PAH-CIT的制備
        2.3.6 PAH-CIT的表征
        2.3.7 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI的制備
        2.3.8 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA的制備
        2.3.9 瓊脂糖凝膠電泳實驗
        2.3.10 P-GP SHRNA質粒的提取(OMEGA質粒提取說明書)
        2.3.11 基因體外釋放實驗
        2.3.12 體外超聲成像實驗
    2.4 實驗結果與討論
        2.4.1 PLGA NBS和DOX-PLGA NBS的形貌分析
        2.4.2 包封率和載藥率的測定
        2.4.3 納米泡粒徑及ZETA電位分析
        2.4.4 PAH-CIT的表征
        2.4.5 納米泡形貌分析
        2.4.6 納米泡粒徑分析
        2.4.7 納米泡ZETA電位分析
        2.4.8 瓊脂糖凝膠電泳實驗
        2.4.9 體外超聲成像實驗
    2.5 小結
第三章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA體外治療效果
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞系
        3.2.2 實驗試劑
        3.2.3 實驗儀器
        3.2.4 溶液配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 HELA、HUVEC、MCF-7、MCF-7/ADR細胞復蘇
        3.3.2 細胞傳代
        3.3.3 細胞凍存
        3.3.4 細胞毒性實驗
        3.3.5 共聚焦顯微鏡觀察細胞內吞情況
        3.3.6 流式細胞術檢測細胞內吞情況
        3.3.7 定量PCR實驗
            3.3.7.1 細胞總RNA提取
            3.3.7.2 逆轉錄反應
            3.3.7.3 PCR擴增反應
        3.3.8 免疫印跡實驗
            3.3.8.1 收集蛋白樣品
            3.3.8.2 SDS-PAGE凝膠電泳
            3.3.8.3 轉膜
            3.3.8.4 免疫反應
            3.3.8.5 化學發(fā)光、顯影、定影
        3.3.9 CALCEIN-AM/PI雙染實驗
        3.3.10 細胞周期實驗
    3.4 實驗結果與討論
        3.4.1 細胞毒性實驗
        3.4.2 共聚焦顯微鏡觀察細胞內吞情況
        3.4.3 流式細胞術檢測細胞內吞情況
        3.4.4 定量PCR實驗
        3.4.5 免疫印跡實驗
        3.4.6 協(xié)同治療效果
        3.4.7 CALCEIN-AM/PI雙染實驗
        3.4.8 細胞周期實驗
    3.5 小結
第四章 DOX-PLGA/PEI/PAH-CIT/PEI/P-GP SHRNA活體成像及抗腫瘤效果
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗動物及細胞株
        4.2.2 實驗試劑
        4.2.3 實驗儀器
        4.2.4 溶液配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 腫瘤模型的建立
        4.3.2 體內超聲成像
        4.3.3 體內協(xié)同抗腫瘤作用
        4.3.4 組織病理學分析
            4.3.4.1 HE染色
            4.3.4.2 TUNEL染色
        4.3.5 血液學分析及血液生化檢測
    4.4 實驗結果與討論
        4.4.1 體內超聲成像
        4.4.2 體內毒副作用
        4.4.3 血液學分析
        4.4.4 體內協(xié)同抗腫瘤作用
    4.5 小結
第五章 全文總結
致謝
參考文獻
碩期間取得的研究成果



本文編號：3886368