發(fā)布時(shí)間：2023-04-25 04:55

　　胰蛋白酶是一種重要的蛋白酶,在醫(yī)藥、皮革加工、食品工業(yè)及農(nóng)業(yè)領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。目前市售胰蛋白酶仍以動(dòng)物源為主,受到制備成本高、動(dòng)物性病毒風(fēng)險(xiǎn)以及宗教問(wèn)題等因素制約,導(dǎo)致其應(yīng)用存在限制。微生物源胰蛋白酶可以有效解決上述問(wèn)題,且微生物發(fā)酵生產(chǎn)胰蛋白酶具有生產(chǎn)成本低、產(chǎn)量和酶活高、制備簡(jiǎn)便等特點(diǎn)。然而,目前多數(shù)研究仍主要圍繞動(dòng)物源胰蛋白酶展開,微生物胰蛋白酶的潛力還遠(yuǎn)未得到開發(fā)。本論文從某皮革廠采集樣品,以脫脂奶粉為唯一碳氮源初篩產(chǎn)蛋白酶的菌株,再通過(guò)搖瓶發(fā)酵復(fù)篩,結(jié)合特異性酶活檢測(cè)篩選獲得8株具有較高胰蛋白酶活性的菌株,并擇其中一株產(chǎn)酶達(dá)20 U·m L-1的菌株DMN6進(jìn)行后續(xù)研究。通過(guò)生理生化與16S r DNA分子鑒定,將該菌株鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)菌株DMN6產(chǎn)酶條件進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,該菌株產(chǎn)胰蛋白酶的最優(yōu)條件為,玉米粉15 g·L-1,大豆蛋白胨15 g·L-1,磷酸氫二鉀7 g·L-1,磷酸二氫鉀3 g·L-1,三氯化鐵5 mmol·L-1,氯化鎂15 mmol·L-1,接種量為1%,37℃下培養(yǎng)84 h,優(yōu)化...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 蛋白酶概述
        1.1.1 蛋白酶
        1.1.2 蛋白酶的分類
    1.2 胰蛋白酶概述
        1.2.1 胰蛋白酶的發(fā)現(xiàn)與起源
        1.2.2 胰蛋白酶的空間結(jié)構(gòu)
        1.2.3 胰蛋白酶的催化機(jī)制
    1.3 胰蛋白酶的應(yīng)用
        1.3.1 醫(yī)藥領(lǐng)域應(yīng)用
        1.3.2 皮革加工應(yīng)用
        1.3.3 食品工業(yè)應(yīng)用
        1.3.4 農(nóng)業(yè)應(yīng)用
    1.4 胰蛋白酶近期研究進(jìn)展
        1.4.1 酶的分離純化
        1.4.2 酶的基因工程研究
        1.4.3 酶的固定化
    1.5 微生物源胰蛋白酶
        1.5.1 真菌類
        1.5.2 細(xì)菌類
    1.6 研究意義與研究?jī)?nèi)容
        1.6.1 研究意義
        1.6.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的篩選與鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 篩菌樣品來(lái)源
        2.1.2 培養(yǎng)基
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 主要儀器及設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的篩選
        2.2.2 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的分子鑒定
        2.2.3 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的形態(tài)及生理生化鑒定
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的篩選
        2.3.2 產(chǎn)胰蛋白酶菌株的 16S rDNA分子鑒定及同源性分析
        2.3.3 菌株DMN6菌株形態(tài)特征與生理生化鑒定
    2.4 本章小結(jié)
第三章 地衣芽孢桿菌DMN6胰蛋白酶的發(fā)酵條件優(yōu)化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 培養(yǎng)基
        3.1.2 菌株
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.4 主要儀器及設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 菌體生長(zhǎng)及產(chǎn)酶曲線
        3.2.2 發(fā)酵條件的優(yōu)化
        3.2.3 發(fā)酵培養(yǎng)基成分的優(yōu)化
        3.2.4 中試試驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 菌體生長(zhǎng)及產(chǎn)酶曲線
        3.3.2 發(fā)酵條件對(duì)產(chǎn)酶的影響
        3.3.3 發(fā)酵培養(yǎng)基成分對(duì)產(chǎn)酶的影響
        3.3.4 中試試驗(yàn)結(jié)果
    3.4 本章小結(jié)
第四章 胰蛋白酶的分離純化及其酶學(xué)性質(zhì)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 培養(yǎng)基
        4.1.2 菌株
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.4 主要儀器及設(shè)備
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 胰蛋白酶的純化
        4.2.2 BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度
        4.2.3 變性蛋白凝膠電泳（SDS-PAGE）
        4.2.4 胰蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 胰蛋白酶的純化
        4.3.2 胰蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)
    4.4 本章小結(jié)
主要結(jié)論
展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄：作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3800749