本文關(guān)鍵詞：新型化合物XN51對(duì)急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的作用與其影響熱休克蛋白90功能的關(guān)系，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的研究新型化合物XN51對(duì)急性粒細(xì)胞白血病(AML)細(xì)胞增殖抑制作用及其干擾熱休克蛋白90(Hsp90)功能的關(guān)系。方法(1)采用臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT方法檢測(cè)XN51在體外抑制AML細(xì)胞增殖作用。(2)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)XN51對(duì)AML細(xì)胞周期時(shí)相、線粒體膜電位(MMP)和細(xì)胞凋亡的影響。(3)蛋白免疫印跡(Western blot)探討XN51對(duì)AML細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。(4)孔雀綠磷鉬酸銨——無(wú)機(jī)磷檢測(cè)法檢測(cè)XN51對(duì)HSP90蛋白ATP酶活性的影響。(5)蛋白免疫印跡法檢測(cè)XN51對(duì)AML細(xì)胞Hsp90客戶蛋白Akt和CDK2表達(dá)的影響。結(jié)果(1)臺(tái)盼藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明XN51具有明顯抑制AML細(xì)胞HL-60和NB4增殖的作用,半數(shù)抑制率濃度IC50分別為(3.49±0.02)μmol·L-1和(2.52±0.04)μmol·L-1,且其體外抑制AML細(xì)胞增殖的活性比Nov提高了近100倍。(2)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明XN51明顯增加HL-60和NB4細(xì)胞S期細(xì)胞的比例,使AML細(xì)胞周期阻滯在細(xì)胞周期S期;XN51能顯著降低AML細(xì)胞線粒體膜電位水平;隨著XN51濃度的增加,HL-60和NB4細(xì)胞的凋亡比例明顯增加;XN51破壞了AML細(xì)胞線粒體的穩(wěn)定性和增加AML細(xì)胞的凋亡率表明XN51通過(guò)激活細(xì)胞線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)AML細(xì)胞發(fā)生程序性死亡或壞死;XN51處理AML細(xì)胞誘導(dǎo)Hsp70蛋白表達(dá),增加細(xì)胞內(nèi)Cleaved parp、Cleaved Caspase3和Cleaved Caspase9蛋白蛋白含量,而下調(diào)p-Akt和CDK2蛋白的表達(dá)水平。(3)孔雀綠磷鉬酸銨——無(wú)機(jī)磷實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明XN51和Hsp90抑制劑GA(陽(yáng)性對(duì)照藥)均能顯著抑制Hsp90 ATPase酶活性,表現(xiàn)為使Hsp90內(nèi)源熒光發(fā)生規(guī)律性淬滅。通過(guò)Stern—Volmer方程計(jì)算得出XN51對(duì)Hsp90ATPase作用的動(dòng)態(tài)淬滅速率常數(shù)Kq值為(4.45±0.70x1012)L?mol-1?s-1遠(yuǎn)大于各類淬滅劑對(duì)生物大分子最大擴(kuò)散控制的碰撞動(dòng)態(tài)淬滅速率常數(shù)Kq(2.0x1010L?mol-1?s-1),表明XN51是通過(guò)與Hsp90形成復(fù)合物引起Hsp90內(nèi)源熒光發(fā)生靜態(tài)淬滅達(dá)到體外抑制Hsp90 ATPase的催化活性的作用;XN51通過(guò)抑制Hsp90分子伴侶功能,使Akt蛋白不能形成正確穩(wěn)定的活性構(gòu)象而被蛋白酶體降解,達(dá)到抑制AML細(xì)胞增殖作用;XN51通過(guò)抑制Hsp90分子伴侶功能,使CDK2蛋白不能形成正確穩(wěn)定的構(gòu)象結(jié)構(gòu)而被蛋白酶體降解,使AML細(xì)胞周期阻滯在S期;XN51在抑制Hsp90功能的同時(shí)使Hsp90的輔伴侶分子Hsp70蛋白表達(dá)上調(diào)。結(jié)論新型化合物XN51通過(guò)與Hsp90結(jié)合,干擾Hsp90分子伴侶功能,使參與細(xì)胞周期和增殖相關(guān)的Hsp90客戶蛋白Akt和CDK2不能正確折疊修飾形成有效穩(wěn)定的生物學(xué)構(gòu)象而失活,依賴蛋白酶體通路在細(xì)胞內(nèi)被降解清除,使AML細(xì)胞周期進(jìn)程不能通過(guò)S期細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn),誘導(dǎo)AML細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期的S期;XN51通過(guò)破壞線粒體膜電位的穩(wěn)定性,激活A(yù)ML細(xì)胞線粒體凋亡通路,激活A(yù)ML細(xì)胞內(nèi)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng),誘導(dǎo)AML細(xì)胞發(fā)生凋亡,抑制AML細(xì)胞增殖。
【關(guān)鍵詞】：Hsp90 靜態(tài)淬滅 分子伴侶 細(xì)胞周期阻滯 凋亡
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-11
• 英文縮略詞表11-12
• 前言12-13
• 1. XN51對(duì)AML細(xì)胞增殖的抑制作用13-28
• 1.1 XN51的化學(xué)合成13-15
• 1.1.1 材料、試劑13
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器13-14
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)方法14-15
• 1.1.3.1 藥物合成14
• 1.1.3.2 藥物純化14-15
• 1.2 臺(tái)盼藍(lán)染色活細(xì)胞計(jì)數(shù)15-17
• 1.2.1 材料、試劑15
• 1.2.2 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件15
• 1.2.3 主要試劑的配制15
• 1.2.4 實(shí)驗(yàn)儀器15-16
• 1.2.5 實(shí)驗(yàn)方法16
• 1.2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果16-17
• 1.3 MTT法檢測(cè)XN51對(duì)AML細(xì)胞增殖抑制作用17-20
• 1.3.1 材料、試劑17
• 1.3.2 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件17-18
• 1.3.3 主要試劑的配制18
• 1.3.4 實(shí)驗(yàn)儀器18
• 1.3.5 實(shí)驗(yàn)方法18-19
• 1.3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-20
• 1.4 XN51對(duì)AML細(xì)胞周期、線粒體膜電位和細(xì)胞凋亡的影響20-27
• 1.4.1 材料、試劑21
• 1.4.2 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件21
• 1.4.3 主要試劑的配制21-22
• 1.4.4 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 1.4.5 實(shí)驗(yàn)方法22-23
• 1.4.5.1 碘化丙啶染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期22
• 1.4.5.2 JC-1 染色檢測(cè)XN51對(duì)AML細(xì)胞線粒體膜電位的影響22-23
• 1.4.5.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)XN51對(duì)AML細(xì)胞凋亡的影響23
• 1.4.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果23-27
• 1.4.6.1 XN51使HL-60和NB4細(xì)胞周期阻滯在S期23-25
• 1.4.6.2 XN51降低HL-60和NB4細(xì)胞線粒體膜電位25-26
• 1.4.6.3 XN51增加HL-60和NB4細(xì)胞凋亡比例26-27
• 1.5 統(tǒng)計(jì)分析27
• 1.6 討論和結(jié)論27-28
• 1.6.1 討論27-28
• 1.6.2 結(jié)論28
• 2 XN51抑制AML細(xì)胞增殖與其影響Hsp90功能的關(guān)系28-42
• 2.1 XN51對(duì)AML細(xì)胞周期及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響28-34
• 2.1.1 材料、試劑29
• 2.1.2 細(xì)胞株及培養(yǎng)條件29
• 2.1.3 主要試劑的配制29-31
• 2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器31
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)方法31-33
• 2.1.5.1 提取總蛋白31-32
• 2.1.5.2 BCA蛋白定量32
• 2.1.5.3 蛋白免疫印跡32-33
• 2.1.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-34
• 2.2 (孔雀綠磷鉬酸銨——無(wú)機(jī)磷檢測(cè)法)檢測(cè)XN51對(duì)HSP90蛋白ATP酶活性的影響34-36
• 2.2.1 材料、試劑34
• 2.2.2 主要試劑的配制34-35
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器35
• 2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 2.2.4.1 Hsp90蛋白的表達(dá)和純化35
• 2.2.4.2 熒光滴定法檢測(cè)XN51對(duì)Hsp90內(nèi)源熒光的淬滅作用35-36
• 2.2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果36
• 2.3 XN51對(duì)Hsp90客戶蛋白的影響36-38
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)原理和材料36-37
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)試劑37
• 2.3.3 試驗(yàn)方法37
• 2.3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-38
• 2.4 統(tǒng)計(jì)分析38
• 2.5 討論和結(jié)論38-42
• 2.5.1 討論38-40
• 2.5.2 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 文獻(xiàn)綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 致謝53

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 沈艷麗;高向東;顧覺(jué)奮;;Hsp90抑制劑的研究[J];國(guó)外醫(yī)藥(抗生素分冊(cè));2013年04期

2 趙晴;劉浩;趙素容;張配;董清清;蔣琛琛;吳成柱;;17-Demethoxy-reblastatin聯(lián)合順鉑對(duì)三陰性乳腺癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];安徽醫(yī)藥;2014年03期

3 閆磊;章建全;潘倩;鄭建明;呂艷紅;;熱消融對(duì)甲狀腺良性結(jié)節(jié)組織內(nèi)HSP70表達(dá)的影響[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2014年11期

4 侯寧;呂志慧;趙靚;高雪麗;劉超男;呂曉萍;鄭世民;;毒害艾美耳球蟲(chóng)感染對(duì)雛雞腸道組織熱休克蛋白-90 mRNA表達(dá)的影響[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2015年08期

5 張敏;李建成;劉小俠;張青文;趙章武;;熱激蛋白90與中紅側(cè)溝繭蜂的發(fā)育關(guān)系[J];昆蟲(chóng)知識(shí);2009年02期

6 林怡;吳麗賢;;Hsp90抑制劑的研究進(jìn)展[J];海峽藥學(xué);2014年09期

7 何彩梅;李海燕;魏大巧;葛若梅;;Hsp90抑制劑的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2010年07期

8 周長(zhǎng)明;劉濤;韓淼;;格爾德霉素在鼻咽癌臨床治療中的應(yīng)用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2012年04期

9 何靜子;魏曉麗;景彩萍;;熱休克蛋白在惡性腫瘤治療及預(yù)后中的應(yīng)用進(jìn)展[J];山東醫(yī)藥;2014年30期

10 何靜子;許靜洪;;熱休克蛋白和腫瘤關(guān)系研究進(jìn)展[J];陜西醫(yī)學(xué)雜志;2014年11期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 林圣云;李靜;武利強(qiáng);戴鐵穎;胡致平;;葡萄柚黃酮聯(lián)合BIIB021抗MDS細(xì)胞株Skm-1增殖作用研究[A];2013年國(guó)家級(jí)“惡性血液系統(tǒng)疾病診治新進(jìn)展”學(xué)習(xí)班暨學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 山廣志;Hsp90抑制劑—格爾德霉素的結(jié)構(gòu)優(yōu)化及抗病毒構(gòu)效關(guān)系研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

2 王任飛;熱休克蛋白90抑制劑對(duì)未分化甲狀腺癌增殖及攝碘動(dòng)力學(xué)的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 朱建華;以Hsp90為靶點(diǎn)的細(xì)胞機(jī)制抗病毒藥物合成與篩選[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

2 李冬;廣譜抗病毒抗生素格爾德霉素衍生物的合成與活性研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

3 鄔葉鋒;HSP90抑制劑17-DMAG影響結(jié)腸癌SW620細(xì)胞生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2012年

4 薛立娟;擬黑多刺蟻hsp90基因的克隆與mRNA水平表達(dá)及其對(duì)發(fā)育影響的研究[D];陜西師范大學(xué);2012年

5 武鼎銘;新型催化體系下多取代嘌呤化合物的合成研究[D];江蘇科技大學(xué);2012年

6 趙雷;17-DMAG對(duì)EGFR-TKI耐藥的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549和H1975作用的體外研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

7 白志勛;TGF-β1/Smads/ILK信號(hào)通路在環(huán)孢素誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

8 葉強(qiáng);弓形蟲(chóng)排泄分泌抗原的功能組分分析與鑒定[D];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2013年

9 韋培培;熱應(yīng)激下雞下丘腦HSP90和GPR23基因mRNA表達(dá)及SNPs檢測(cè)[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

10 趙晴;17-demethoxy-reblastatin體外抗乳腺癌細(xì)胞作用及其相關(guān)機(jī)理研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2014年

  本文關(guān)鍵詞：新型化合物XN51對(duì)急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞的作用與其影響熱休克蛋白90功能的關(guān)系，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：378500