背景及目的:凝血酶是凝血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的核心蛋白酶,除了發(fā)揮其凝血功能以外,研究表明它還可能與哮喘的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn),應(yīng)用于臨床抗凝的直接凝血酶抑制藥物達(dá)比加群,能有效減輕雞卵清白蛋白(OVA)誘導(dǎo)的哮喘小鼠模型的氣道重塑病理改變,但其對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的人氣道平滑肌細(xì)胞(HASMCs)的功能變化是否存在作用尚不清楚。Yes-associated protein(YAP)是Hippo信號(hào)通路的關(guān)鍵分子,通過(guò)影響細(xì)胞增殖和分化等來(lái)調(diào)節(jié)器官大小和組織穩(wěn)態(tài)。最近的研究發(fā)現(xiàn)YAP在哮喘小鼠模型的氣道平滑肌中高表達(dá),但YAP是否參與凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs功能變化未見(jiàn)報(bào)道。因此,本研究的目的是探討達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖、遷移和重塑相關(guān)蛋白上調(diào)的影響,明確YAP在凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs功能變化中的作用,以及凝血酶調(diào)控YAP的潛在分子機(jī)制。方法:我們使用原代HASMCs作為研究模型。使用CCK-8、EdU實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞增殖;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移;qRT-PCR、Western Blot分別檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白Collagen Ⅰ、纖維化蛋白α-SMA、YAP下游靶蛋白CTGF和Cyclin...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料和方法
    一、實(shí)驗(yàn)材料
        1. 實(shí)驗(yàn)器材設(shè)備
        2. 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3. 主要試劑的配制
    二、實(shí)驗(yàn)方法
        1. 原代HASMCs培養(yǎng)
        2. 原代HASMCs免疫熒光鑒定
        3. 小干擾RNA轉(zhuǎn)染
        4. CCK-8實(shí)驗(yàn)
        5. EdU實(shí)驗(yàn)
        6. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        7. 細(xì)胞總RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄
        8. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR (qRT-PCR)
        9. 細(xì)胞總蛋白的提取及濃度測(cè)定
        10. 蛋白免疫印跡(Western Blot)
        11.免疫熒光
        12. 免疫共沉淀(CoIP)
        13. 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    一、原代HASMCs的特點(diǎn)與鑒定
    二、達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs重塑的作用
    三、達(dá)比加群對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的YAP激活的影響
    四、YAP對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的HASMCs重塑的作用
    五、凝血酶激活YAP的機(jī)制研究
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
中英文縮略詞表
攻讀碩士期間主要科研成果
致謝



本文編號(hào)：3764162