目的利用BiFC雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)研究香豆素衍生物IMM-H004對(duì)趨化素樣因子CKLF1與其受體CCR4結(jié)合的影響。方法引入BiFC技術(shù),將CKLF1趨化活性肽段C27與CCR4分別與Venus熒光蛋白的N端(VN173)和C端(VC155)相連,C27與CCR4的結(jié)合可以Venus黃色熒光的形式體現(xiàn),重組載體共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,進(jìn)行氧糖剝奪/復(fù)氧損傷造模,并給予0.1、1和10μmol·L^-1 IMM-H004,觀察活細(xì)胞中熒光強(qiáng)度。結(jié)果通過(guò)測(cè)序比對(duì)驗(yàn)證CKLF1/CCR4-BiFC系統(tǒng)構(gòu)建成功,并能轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞正常啟動(dòng),在該系統(tǒng)中,與Control組相比,OGD/R造模后黃色熒光強(qiáng)度明顯增加(P<0.01),給予不同濃度IMM-H004后熒光表達(dá)均明顯降低(P<0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論通過(guò)BiFC技術(shù),在活細(xì)胞狀態(tài)下直觀觀察到IMM-H004在腦缺血損傷模型中具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用,可拮抗氧糖剝奪/復(fù)氧損傷造模狀態(tài)下CKLF1/CCR4的結(jié)合。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞
    1.2 藥品與試劑
    1.3 主要儀器
    1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
    1.5 氧糖剝奪/復(fù)氧模型(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R)建立
    1.6 CKLF1-BiFC載體構(gòu)建
        1.6.1 引物設(shè)計(jì)
    1.7 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 CKLF1/CCR4 BiFC系統(tǒng)構(gòu)建
    2.2 CKLF1/CCR4-BiFC系統(tǒng)驗(yàn)證
    2.3 CKLF1/CCR4 BiFC系統(tǒng)在OGD/R造模情況下驗(yàn)證
    2.4 基于CKLF1/CCR4 BiFC系統(tǒng)檢測(cè)IMM-H004對(duì)OGD/R造模后熒光強(qiáng)度的影響
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