吡蟲啉是全球使用最為廣泛的殺蟲劑,在環(huán)境及食物中時有殘留。已有研究關(guān)注其殘留對人體健康的影響,但有關(guān)吡蟲啉暴露對過敏性疾病如IgE介導(dǎo)的食物過敏的影響尚不清楚。此外,TLR2介導(dǎo)肥大細胞活化對致病原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答發(fā)揮重要作用。研究表明吡蟲啉可以抑制機體的免疫應(yīng)答且可能導(dǎo)致感染性疾病的出現(xiàn),但目前缺乏吡蟲啉暴露對TLR2介導(dǎo)肥大細胞活化的實驗數(shù)據(jù)支持。此外,人體可能同時暴露于多種殺蟲劑,但有關(guān)多種或兩種殺蟲劑,如硫丹和吡蟲啉對IgE介導(dǎo)的I型超敏反應(yīng)的聯(lián)合作用缺乏依據(jù)。本論文以殺蟲劑吡蟲啉為研究對象,建立IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化模型,尤其是牛奶β-乳球蛋白通過IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化,通過檢測與過敏相關(guān)的過敏因子等變化,為揭示吡蟲啉對IgE介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響及機制提供理論依據(jù);另一方面,本論文研究了吡蟲啉對TLR2介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響,為解釋吡蟲啉通過影響TLR2介導(dǎo)的肥大細胞活化從而影響宿主的免疫應(yīng)答的可能性提供實驗數(shù)據(jù)支持;最后,本論文還研究了吡蟲啉和硫丹聯(lián)合暴露對IgE介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響,為評價多種殺蟲劑對過敏性疾病,如食物中多種殺蟲劑的殘留對食物過敏的影響提...

【文章頁數(shù)】：137 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化與超敏反應(yīng)
        1.1.1 FcεRI介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒信號通路
        1.1.2 肥大細胞分泌的顆粒物質(zhì)
    1.2 肥大細胞、Toll樣受體與感染免疫
    1.3 α7煙堿型乙酰膽堿受體與超敏反應(yīng)
        1.3.1 膽堿能抗炎通路
        1.3.2 α7nAChR的結(jié)構(gòu)及作用機制
        1.3.3 α7nAChR與超敏反應(yīng)
    1.4 環(huán)境毒物暴露與超敏反應(yīng)
        1.4.1 超敏反應(yīng)的影響因素
        1.4.2 環(huán)境毒物暴露與超敏反應(yīng)
        1.4.3 環(huán)境毒物影響超敏反應(yīng)的機制
        1.4.4 展望
    1.5 殺蟲劑暴露與過敏性疾病的關(guān)系
    1.6 吡蟲啉與超敏反應(yīng)
        1.6.1 吡蟲啉簡介
        1.6.2 吡蟲啉的理化性質(zhì)
        1.6.3 吡蟲啉的作用機理
        1.6.4 吡蟲啉在環(huán)境中的水平
        1.6.5 吡蟲啉在人體內(nèi)的暴露水平
        1.6.6 吡蟲啉的毒性
        1.6.7 吡蟲啉暴露對機體的免疫應(yīng)答的影響
        1.6.8 吡蟲啉暴露與超敏反應(yīng)的關(guān)系
    1.7 硫丹與超敏反應(yīng)
        1.7.1 硫丹簡介
        1.7.2 硫丹的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、環(huán)境行為
        1.7.3 硫丹在環(huán)境中的水平
        1.7.4 硫丹的危害
        1.7.5 硫丹與超敏反應(yīng)的關(guān)系
    1.8 農(nóng)藥殘留聯(lián)合毒性及評估方法
    1.9 IgE介導(dǎo)的超敏反應(yīng)的評價
        1.9.1 動物實驗評價
        1.9.2 小鼠被動皮膚過敏反應(yīng)
        1.9.3 細胞學(xué)評價
        1.9.4 結(jié)語
    1.10 立題背景與研究內(nèi)容
        1.10.1 立題背景
        1.10.2 研究內(nèi)容
第2章 吡蟲啉對IgE介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與設(shè)備
        2.2.1 材料與試劑
        2.2.2 儀器與設(shè)備
        2.2.3 溶液的配制
    2.3 方法
        2.3.1 RBL-2H3細胞培養(yǎng)
        2.3.2 CCK法檢測吡蟲啉對細胞增殖活性的影響
        2.3.3 IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化模型及吡蟲啉處理肥大細胞
        2.3.4 β-hex含量的檢測
        2.3.5 組胺含量的檢測
        2.3.6 LTC4含量檢測
        2.3.7 TNF-α和IL-6含量檢測
        2.3.8 胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流檢測
        2.3.9 IgE介導(dǎo)的小鼠體內(nèi)被動皮膚過敏反應(yīng)(PCA)
        2.3.10 統(tǒng)計
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 吡蟲啉對RBL-2H3的增殖活性的影響
        2.4.2 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后的組胺和β-hex的釋放的變化
        2.4.3 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后LTC4釋放的變化
        2.4.4 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后TNF-α和IL-6釋放的變化
        2.4.5 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后鈣離子內(nèi)流的變化
        2.4.6 小鼠經(jīng)吡蟲啉處理后PCA變化
    2.5 討論
        2.5.1 吡蟲啉對體外IgE介導(dǎo)的肥大細胞活化的影響
        2.5.2 吡蟲啉對體內(nèi)IgE介導(dǎo)的小鼠PCA的影響
    2.6 小結(jié)
第3章 吡蟲啉對IgE介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響機制
    3.1 引言
    3.2 材料與設(shè)備
        3.2.1 材料與試劑
        3.2.2 儀器與設(shè)備
        3.2.3 溶液的配制
    3.3 方法
        3.3.1 牛乳過敏患者血清的處理
        3.3.2 RBL-2H3和KU812細胞培養(yǎng)、藥物處理及體外激活
        3.3.3 肥大細胞脫顆粒分析
        3.3.4 LTC4和TNF-α含量測定
        3.3.5 胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流分析
        3.3.6 磷酸化PLC-γ與NF-κB蛋白的Western blot分析
        3.3.7 cPLA2活性分析
        3.3.8 體內(nèi)IgE介導(dǎo)的小鼠PCA
        3.3.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 吡蟲啉對RBL-2H3和KU812細胞增殖活性的影響
        3.4.2 α7nAChR拮抗劑MLA的最佳作用濃度
        3.4.3 肥大細胞經(jīng)MLA處理后脫顆粒的變化
        3.4.4 肥大細胞經(jīng)MLA處理后LTC4和TNF-α釋放的變化
        3.4.5 肥大細胞經(jīng)MLA處理后鈣離子內(nèi)流的變化
        3.4.6 肥大細胞經(jīng)MLA處理后PLC-γ與NF-κB蛋白表達的變化
        3.4.7 肥大細胞經(jīng)MLA處理后cPLA2活性的變化
        3.4.8 小鼠經(jīng)MLA處理后的PCA變化
    3.5 討論
        3.5.1 α7nAChR介導(dǎo)吡蟲啉對肥大細胞脫顆粒的體外影響
        3.5.2 α7nAChR介導(dǎo)吡蟲啉對肥大細胞脫顆粒的體內(nèi)影響
        3.5.3 α7nAChR可能成為治療過敏性疾病的新靶點
    3.6 小結(jié)
第4章 吡蟲啉對TLR2介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響
    4.1 引言
    4.2 材料與設(shè)備
        4.2.1 材料與試劑
        4.2.2 儀器與設(shè)備
        4.2.3 溶液的配制
    4.3 方法
        4.3.1 CCK法檢測吡蟲啉對RBL-2H3細胞增殖活性的影響
        4.3.2 RBL-2H3細胞培養(yǎng)、藥物處理及體外激活
        4.3.3 肥大細胞脫顆粒的分析
        4.3.4 LTC4、IL-6和TNF-α含量測定
        4.3.5 胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流檢測
        4.3.6 磷酸化NF-κB蛋白的Western blot分析
        4.3.7 體內(nèi)TLR2介導(dǎo)的小鼠PCA
        4.3.8 體內(nèi)TLR2介導(dǎo)的小鼠皮膚炎癥
        4.3.9 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計
    4.4 結(jié)果與分析
        4.4.1 吡蟲啉對RBL-2H3增殖活性的影響
        4.4.2 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后脫顆粒、LTC4產(chǎn)量的變化
        4.4.3 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉后IL-6和TNF-α釋放的變化
        4.4.4 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后鈣離子內(nèi)流的變化
        4.4.5 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉處理后p-NF-κB表達的變化
        4.4.6 經(jīng)吡蟲啉處理后小鼠PCA的的變化
        4.4.7 小鼠處理后血清中組胺、LTC4、IL-6和TNF-α產(chǎn)量變化
        4.4.8 小鼠經(jīng)吡蟲啉處理后皮膚炎癥的的變化
    4.5 討論
        4.5.1 吡蟲啉對體外TLR2介導(dǎo)的肥大細胞活化的影響
        4.5.2 吡蟲啉對體內(nèi)TLR2介導(dǎo)的肥大細胞活化的影響
    4.6 小結(jié)
第5章 吡蟲啉和硫丹聯(lián)合暴露對IgE介導(dǎo)的肥大細胞脫顆粒的影響
    5.1 引言
    5.2 材料與設(shè)備
        5.2.1 材料與試劑
        5.2.2 儀器與設(shè)備
        5.2.3 溶液的配制
    5.3 方法
        5.3.1 骨髓來源肥大細胞(BMMCs)培養(yǎng)、藥物處理及體外激活
        5.3.2 肥大細胞脫顆粒的分析
        5.3.3 LTC4和TNF-α含量測定
        5.3.4 胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流的檢測
        5.3.5 磷酸化NF-κB蛋白的Western blot分析
        5.3.6 體外IgE介導(dǎo)的小鼠被動全身性過敏反應(yīng)(PSA)
        5.3.7 統(tǒng)計
    5.4 結(jié)果與分析
        5.4.1 吡蟲啉和硫丹對BMMCs細胞活性的共同影響
        5.4.2 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉和硫丹共同處理后脫顆粒的變化
        5.4.3 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉和硫丹共同處理后鈣離子內(nèi)流的變化
        5.4.4 肥大細胞經(jīng)吡蟲啉和硫丹共同處理后p-NF-κB表達的變化
        5.4.5 小鼠經(jīng)吡蟲啉和硫丹共同處理后PSA的變化
    5.5 討論
        5.5.1 吡蟲啉和硫丹聯(lián)合暴露對肥大細胞脫顆粒的影響
        5.5.2 吡蟲啉和硫丹聯(lián)合暴露對肥大細胞脫顆粒的作用方式
    5.6 小結(jié)
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 本研究創(chuàng)新點
    6.3 展望
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號：3740243