非天然手性氨基酸（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸具有廣泛的生理活性,被廣泛應(yīng)用于多肽類似物的合成和新藥開發(fā),如大環(huán)饑餓激素受體拮抗劑、緩激肽B1受體拮抗劑、紡錘體驅(qū)動蛋白抑制劑,可用于抗菌、止痛、抗癌、抗驚厥和神經(jīng)退行性疾病的治療。因而發(fā)展（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸有十分重要的學(xué)術(shù)價值和應(yīng)用前景。目前用于（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸不對稱合成的方法主要有:化學(xué)法、拆分法和生物法。相比傳統(tǒng)的化學(xué)合成法,生物催化合成路線綠色環(huán)保,成為具有潛力的合成方法�，F(xiàn)有的生物催化不對稱合成（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸主要是通過酶偶聯(lián)法來實現(xiàn)的,羰基還原胺化酶和輔酶再生酶在不同的菌體中表達,在催化過程中,底物、產(chǎn)物以及輔酶必須通過細(xì)菌細(xì)胞膜進行細(xì)胞內(nèi)外的物質(zhì)擴散以及細(xì)胞間的物質(zhì)交換才能保證生物轉(zhuǎn)化過程的進行,傳質(zhì)阻力使物質(zhì)擴散及交換所需時間延長,催化效率下降。針對此情況,本課題擬利用基因工程技術(shù),將表達羰基還原胺化酶的基因與表達輔酶再生酶的基因通過柔性連接子連接,形成具有羰基還原胺化活性和輔酶再生活性的單鏈多肽,從而實現(xiàn)在單細(xì)胞中表達具有雙活性中心的雙功能融合酶。實現(xiàn)羰基不對稱還原胺化和輔酶原位再生同時進行并循環(huán)往復(fù),提... 

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重組酶表達載體的構(gòu)建
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建及擴增
        2.2 重組質(zhì)粒提取及酶切電泳分析
        2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.4 重組酶表達及表達條件的優(yōu)化
        2.5 蛋白濃度測定及目標(biāo)蛋白的純化
        2.6 酶活力測定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建及分析
        3.2 重組酶表達及表達條件優(yōu)化
        3.3 Bradford 法測定蛋白質(zhì)濃度
        3.4 目標(biāo)蛋白的純化
    4 本章小結(jié)
第二部分 重組酶的酶學(xué)性質(zhì)表征
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 溫度對酶活力的影響
        2.2 pH對酶活力的影響
        2.3 熱穩(wěn)定性研究
        2.4 動力學(xué)參數(shù)的測定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 溫度對酶活力的影響
        3.2 pH對酶活力的影響
        3.3 熱穩(wěn)定性研究
        3.4 動力學(xué)參數(shù)的測定
    4 本章小結(jié)
第三部分 重組全細(xì)胞催化不對稱合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
    1 實驗材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗試劑
    2 實驗方法
        2.1 環(huán)丙基乙醛酸鉀的制備
        2.2 重組全細(xì)胞催化合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
        2.3 生物轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
        2.4 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)構(gòu)型分析和轉(zhuǎn)化率測定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 重組全細(xì)胞催化合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
        3.2 生物轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
        3.3 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)構(gòu)型分析和轉(zhuǎn)化率測定
    4 本章小結(jié)
全文總結(jié)
本文創(chuàng)新點和特色
參考文獻
附圖
文獻綜述:非天然手性氨基酸(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸的合成研究進展
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1](R)-、（S）-羰基還原酶在釀酒酵母中的表達和亞細(xì)胞定位[J]. 張榮珍,徐巖,王珊珊,張波濤,耿亞維.  微生物學(xué)報. 2011(06)

碩士論文
[1]酶偶聯(lián)法不對稱還原潛手性β-酮酯類化合物的研究[D]. 陳星星.江南大學(xué) 2012



本文編號：3733185