非天然手性氨基酸（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸具有廣泛的生理活性,被廣泛應(yīng)用于多肽類(lèi)似物的合成和新藥開(kāi)發(fā),如大環(huán)饑餓激素受體拮抗劑、緩激肽B1受體拮抗劑、紡錘體驅(qū)動(dòng)蛋白抑制劑,可用于抗菌、止痛、抗癌、抗驚厥和神經(jīng)退行性疾病的治療。因而發(fā)展（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸有十分重要的學(xué)術(shù)價(jià)值和應(yīng)用前景。目前用于（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸不對(duì)稱(chēng)合成的方法主要有:化學(xué)法、拆分法和生物法。相比傳統(tǒng)的化學(xué)合成法,生物催化合成路線(xiàn)綠色環(huán)保,成為具有潛力的合成方法�，F(xiàn)有的生物催化不對(duì)稱(chēng)合成（S）-2-環(huán)丙基甘氨酸主要是通過(guò)酶偶聯(lián)法來(lái)實(shí)現(xiàn)的,羰基還原胺化酶和輔酶再生酶在不同的菌體中表達(dá),在催化過(guò)程中,底物、產(chǎn)物以及輔酶必須通過(guò)細(xì)菌細(xì)胞膜進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)外的物質(zhì)擴(kuò)散以及細(xì)胞間的物質(zhì)交換才能保證生物轉(zhuǎn)化過(guò)程的進(jìn)行,傳質(zhì)阻力使物質(zhì)擴(kuò)散及交換所需時(shí)間延長(zhǎng),催化效率下降。針對(duì)此情況,本課題擬利用基因工程技術(shù),將表達(dá)羰基還原胺化酶的基因與表達(dá)輔酶再生酶的基因通過(guò)柔性連接子連接,形成具有羰基還原胺化活性和輔酶再生活性的單鏈多肽,從而實(shí)現(xiàn)在單細(xì)胞中表達(dá)具有雙活性中心的雙功能融合酶。實(shí)現(xiàn)羰基不對(duì)稱(chēng)還原胺化和輔酶原位再生同時(shí)進(jìn)行并循環(huán)往復(fù),提... 

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 重組酶表達(dá)載體的構(gòu)建
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建及擴(kuò)增
        2.2 重組質(zhì)粒提取及酶切電泳分析
        2.3 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.4 重組酶表達(dá)及表達(dá)條件的優(yōu)化
        2.5 蛋白濃度測(cè)定及目標(biāo)蛋白的純化
        2.6 酶活力測(cè)定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建及分析
        3.2 重組酶表達(dá)及表達(dá)條件優(yōu)化
        3.3 Bradford 法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度
        3.4 目標(biāo)蛋白的純化
    4 本章小結(jié)
第二部分 重組酶的酶學(xué)性質(zhì)表征
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 溫度對(duì)酶活力的影響
        2.2 pH對(duì)酶活力的影響
        2.3 熱穩(wěn)定性研究
        2.4 動(dòng)力學(xué)參數(shù)的測(cè)定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 溫度對(duì)酶活力的影響
        3.2 pH對(duì)酶活力的影響
        3.3 熱穩(wěn)定性研究
        3.4 動(dòng)力學(xué)參數(shù)的測(cè)定
    4 本章小結(jié)
第三部分 重組全細(xì)胞催化不對(duì)稱(chēng)合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 環(huán)丙基乙醛酸鉀的制備
        2.2 重組全細(xì)胞催化合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
        2.3 生物轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
        2.4 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)構(gòu)型分析和轉(zhuǎn)化率測(cè)定
    3 結(jié)果與討論
        3.1 重組全細(xì)胞催化合成(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸
        3.2 生物轉(zhuǎn)化條件的優(yōu)化
        3.3 產(chǎn)物結(jié)構(gòu)構(gòu)型分析和轉(zhuǎn)化率測(cè)定
    4 本章小結(jié)
全文總結(jié)
本文創(chuàng)新點(diǎn)和特色
參考文獻(xiàn)
附圖
文獻(xiàn)綜述:非天然手性氨基酸(S)-2-環(huán)丙基甘氨酸的合成研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1](R)-、（S）-羰基還原酶在釀酒酵母中的表達(dá)和亞細(xì)胞定位[J]. 張榮珍,徐巖,王珊珊,張波濤,耿亞維.  微生物學(xué)報(bào). 2011(06)

碩士論文
[1]酶偶聯(lián)法不對(duì)稱(chēng)還原潛手性β-酮酯類(lèi)化合物的研究[D]. 陳星星.江南大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3733185