發(fā)布時間：2022-12-11 16:03

　　激活脊髓背角去甲腎上腺素α2受體,可以有效緩解病理性疼痛癥狀,但其分子機(jī)制尚不明確。細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（Extracellular signal-regulated kinases1and2; ERK1/2）的活性與痛覺感受密切相關(guān),ERK1/2的活性升高被認(rèn)為是脊髓敏感化的重要標(biāo)志。本研究通過小鼠足底皮下注射完全弗氏佐劑（CFA）制造慢性炎性疼痛模型,使用蛋白免疫印跡、免疫組織化學(xué)、免疫共沉淀和行為學(xué)測試等方法,探討了去甲腎上腺素α2受體對組織損傷誘發(fā)的ERK1/2信號通路的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：（1）鞘內(nèi)給予去甲腎上腺素α2受體激動劑可樂定（0.05μg）,能夠選擇性降低炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2的活性,而對正常動物ERK1/2無明顯影響；（2）抑制性Gi蛋白阻斷劑百日咳毒素（PTX）,能夠阻斷可樂定對炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2的調(diào)節(jié)作用；（3）正常小鼠鞘內(nèi)注射cAMP依賴性蛋白激酶（cAMP-dependent protein kinase A; PKA）激動劑forskolin（6μg）,也能模擬組織損傷、激活脊髓背角ERK1/2,且這一作用可被可樂定逆轉(zhuǎn),... 

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 去甲腎上腺素α2受體在脊髓痛覺信號傳導(dǎo)中的作用
    1.2 ERK1/2通路在脊髓痛覺信號傳導(dǎo)中的作用
    1.3 STEP在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 緩沖溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 行為學(xué)測試
        2.2.2 藥物的鞘內(nèi)注射
        2.2.3 質(zhì)粒的小量抽提
        2.2.4 全細(xì)胞組織勻漿的制備
        2.2.5 免疫共沉淀樣品制備(Co-Immunoprecipitation；CO-IP)
        2.2.6 Western Blot
        2.2.7 免疫組織化學(xué)檢測(Immunohistochemistry)
        2.2.8 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 可樂定在緩解炎性疼痛的同時降低脊髓背角ERK1/2活性
        3.1.1 鞘內(nèi)給予可樂定緩解炎性疼痛動物機(jī)械性痛覺超敏
        3.1.2 鞘內(nèi)給予可樂定降低CFA致炎動物脊髓背角ERK1/2的活性
        3.1.3 鞘內(nèi)給予可樂定對正常小鼠脊髓背角ERK1/2磷酸化水平無影響
        3.1.4 ERK1/2活性的變化在可樂定抑制炎性疼痛中的作用
    3.2 可樂定通過Gαi/PKA信號通路降低炎性疼痛動物脊髓背角ERK1/2的活性
        3.2.1 Gi蛋白在可樂定降低ERK1/2活性中的作用
        3.2.2 可樂定對PKA誘發(fā)的ERK1/2磷酸化的影響
    3.3 可樂定對PKA誘發(fā)的STEP61-S221磷酸化的影響
        3.3.1 可樂定能夠逆轉(zhuǎn)PKA激活導(dǎo)致的STEP61-S221磷酸化水平升高
    3.4 STEP61在可樂定降低炎性疼痛小鼠脊髓背角ERK1/2活性中的作用
        3.4.1 可樂定調(diào)節(jié)炎性疼痛動物脊髓STEP61的磷酸化
        3.4.2 STEP61參與可樂定對炎性疼痛動物脊髓背角ERK1/2活性的調(diào)節(jié)
    3.5 脊髓STEP61在炎性疼痛中的作用
        3.5.1 過表達(dá)STEP61(S221A)可有效緩解CFA引發(fā)的炎性痛覺超敏
        3.5.2 過表達(dá)STEP61(S221A)降低炎性疼痛動物脊髓背角ERK1/2的活性
    3.6 脊髓過表達(dá)STEP61(S221A)可以緩解多種因素介導(dǎo)的痛覺超敏
        3.6.1 過表達(dá)STEP61(S221A)阻斷PKA引發(fā)的痛覺超敏
        3.6.2 過表達(dá)STEP61(S221A)緩解NMDA受體引發(fā)的痛覺超敏
第四章 討論
    4.1 ERK1/2是去甲腎上腺素α2受體鎮(zhèn)痛作用的重要靶點(diǎn)
    4.2 Gαi/PKA通路參與可樂定對炎性疼痛動物脊髓背角ERK1/2活性的調(diào)節(jié)
    4.3 STEP61參與可樂定對ERK1/2活性的調(diào)節(jié)
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
縮略詞
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間研究成果
致謝



本文編號：3719080