發(fā)布時間：2022-12-07 17:42

　　胰島素抵抗（IR）是指胰島素產(chǎn)生作用的敏感性及反應(yīng)性的相對降低,機體為維持正常濃度的葡萄糖,代償性地分泌胰島素,最終導(dǎo)致高胰島素血癥的發(fā)生。IR是誘發(fā)二型糖尿�。═2DM）發(fā)生發(fā)展的核心病理機制,有研究結(jié)果顯示,IR是比T2DM更為早期的機體生理異常表現(xiàn),它在促使T2DM形成過程中具有不可替代的作用。AWRK6（SWVGKHGKKFGLKKHKKH）是一種新型生物活性肽,是東北林蛙皮膚抗菌肽Dybowskin-2CDYa（SAVGRHGRRFGLRKH RKH）經(jīng)替換6個堿基優(yōu)化改造的新型抗菌肽。前期研究表明,AWRK6能夠促進MIN6細(xì)胞分泌胰島素,是新型GLP-1受體激動劑,對于T2DM小鼠有顯著的治療作用,其作用機制與Exendin-4相似。本研究在體外采用高濃度胰島素處理HepG2細(xì)胞,建立IR細(xì)胞模型,并篩選了AWRK6及陽性藥Exendin-4的最佳作用濃度。利用GOD-POD法檢測空白組、IR組、Exendin-4陽性對照組和AWRK6實驗組HepG2細(xì)胞葡萄糖消耗量,初步探究了AWRK6對IR的改善作用。同時我們選用雄性昆明小鼠,隨機分成空白組（15只）和HFD模型組（... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 胰島素抵抗與疾病
    1.3 胰島素抵抗相關(guān)信號通路
    1.4 促胰島素分泌肽
    1.5 抗菌肽AWRK6
    1.6 本文的目的及意義
第2章 AWRK6 對胰島素抵抗的HepG2 細(xì)胞的改善作用
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗儀器和設(shè)備
        2.2.2 實驗所用主要試劑
        2.2.3 實驗試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 HepG2 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.2 HepG2 細(xì)胞傳代
        2.3.3 HepG2 細(xì)胞凍存
        2.3.4 胰島素對細(xì)胞存活率的影響
        2.3.5 MTT法檢測細(xì)胞存活率
        2.3.6 HepG2 細(xì)胞胰島素抵抗模型的建立
        2.3.7 葡萄糖含量的測定
        2.3.8 AWRK6 濃度的篩選
        2.3.9 Exendin-4 濃度的篩選
        2.3.10 HepG2 細(xì)胞的處理
        2.3.11 統(tǒng)計方法
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 胰島素加藥濃度及時間的篩選
        2.4.2 AWRK6 加藥濃度的篩選
        2.4.3 Exendin-4 加藥濃度的篩選
        2.4.4 AWRK6對IR-HepG2 的作用
    2.5 本章小結(jié)
第3章 AWRK6 對胰島素抵抗模型小鼠的改善作用
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗儀器和設(shè)備
        3.2.2 實驗所用主要試劑
        3.2.3 實驗試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 實驗動物的準(zhǔn)備
        3.3.2 胰島素抵抗動物模型的建立
        3.3.3 胰島素抵抗動物模型的驗證
        3.3.4 藥物處理
        3.3.5 口服葡萄糖耐量試驗
        3.3.6 胰島素耐量試驗
        3.3.7 小鼠血清及組織的提取
        3.3.8 組織切片染色方法
        3.3.9 生化指標(biāo)
        3.3.10 統(tǒng)計方法
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 胰島素抵抗動物模型的驗證
        3.4.2 小鼠體重變化
        3.4.3 小鼠空腹血糖變化
        3.4.4 小鼠肝臟系數(shù)
        3.4.5 小鼠脂肪系數(shù)
        3.4.6 小鼠口服葡萄糖耐量試驗
        3.4.7 小鼠胰島素耐量試驗
        3.4.8 小鼠肝臟HE染色
        3.4.9 小鼠肝臟油紅O染色
        3.4.10 小鼠血清胰島素
        3.4.11 小鼠血清胰高血糖素
        3.4.12 小鼠胰島素抵抗指數(shù)
        3.4.13 小鼠胰島素敏感指數(shù)
        3.4.14 小鼠糖化血紅蛋白
        3.4.15 小鼠血清甘油三酯
        3.4.16 小鼠血清總膽固醇
        3.4.17 小鼠血清高密度脂蛋白
        3.4.18 小鼠血清低密度脂蛋白
        3.4.19 小鼠肝糖原
        3.4.20 小鼠肌糖原
    3.5 本章小結(jié)
第4章 AWRK6 改善胰島素抵抗的機制研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料
        4.2.1 實驗儀器和設(shè)備
        4.2.2 實驗所用主要試劑
        4.2.3 實驗試劑的配制
    4.3 實驗方法
        4.3.1 HepG2 細(xì)胞的處理
        4.3.2 細(xì)胞蛋白的提取
        4.3.3 組織蛋白的提取
        4.3.4 蛋白濃度的測定
        4.3.5 聚丙烯酰胺凝膠電泳
        4.3.6 統(tǒng)計方法
    4.4 實驗結(jié)果
        4.4.1 AWRK6對PI3K、P-PI3K蛋白表達(dá)的影響
        4.4.2 AWRK6對AKT、P-AKT蛋白表達(dá)的影響
        4.4.3 AWRK6對GLUT2 蛋白表達(dá)的影響
    4.5 本章小結(jié)
討論
結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]AWRK6改善HepG2細(xì)胞胰島素抵抗的初步研究[J]. 金莉莉,張含玉,劉麗,黃景文,王秋雨.  遼寧大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2018(03)
[2]基于PI3K/Akt信號通路的中醫(yī)藥改善胰島素抵抗的研究進展[J]. 方玲,張琪,魏恩韜,賈紫珮.  中國醫(yī)藥導(dǎo)報. 2018(23)

碩士論文
[1]抗菌肽AWRK6中和內(nèi)毒素及抗敗血癥活性[D]. 王歡.遼寧大學(xué) 2015



本文編號：3712561